1楼：蝈蝈
因为高拷贝质粒稳定性低，而且给宿主细胞的压力大。
低拷贝数的质粒dna在宿主细胞**前只能复制1～2次，而多拷贝数质粒可以在细胞**前复制成10～200拷贝。
高拷贝数的质粒称为松弛型质粒(relaxed pla**id)，独立于细菌细胞而自主复制；低拷贝数的质粒一般是严紧型质粒(stringent pla**id)，它们的复制随细菌染色体的复制同步进行。
一般来说，外源基因的表达量随拷贝数的增加而提高，但是当拷贝数很大时，拷贝数与发酵目标产物产率的这种关系却不存在。这主要有两方面的原因：一方面，高拷贝数时外源基因的表达量不再由质粒的拷贝数决定，可能是由转录和翻译水平决定的；另一方面，高拷贝数的质粒往往很不稳定。
由于质粒拷贝数的变化直接与基因目标产物的产率有关，因此对于重组蛋白的生产来说，质粒的拷贝数是一个非常重要的参数。
而且同一个细胞里一般不会同时有两种不同的质粒，这是质粒不相容性(pla**id in***patibility)。在细菌细胞增殖过程中，其中必有一种会被逐渐排斥。所以要用纯化过的低拷贝质粒。
低拷贝在鸟枪法测序中很常用的。
随机测序战略又称鸟枪战略(shotgun strategy),此策略是将人 类基因组dna用机械方法随机切割成2kb左右的小片段,把这些dn**段装入适当载体,建 立亚克隆文库,从中随机挑 取克隆片段.最后通过克隆片段的重叠组装确定大片段dna序列.
很想知道质粒构建的详细步骤？
2楼：匿名用户
1. 通过pcr扩增目的基因片段
pcr要设计
引物，设计引物时要选择合适的同源序列，根据质粒载体和基因序列要选择合适的酶切位点，pcr的产物要纯化。
2. 酶切
根据引物设计的酶切位点，分别对pcr产物和质粒载体进行酶切，酶切后的产物也要进行**
3. 连接
通过连接酶将酶切后的pcr产物和质粒载体进行连接4. 转化
将连接产物转化到受体菌中（一般为dh5a），涂板，培养过夜5. 挑取单克隆，并鉴定
挑去平板上的单克隆培养，可以通过pcr或者酶切初步鉴定阳性克隆，对初步鉴定出来的阳性克隆进行测序
3楼：匿名用户
质粒的构建有很多方法，如果是pcr产物连接到t载体则使用t-a策略，如果是酶切连接刚需要t4连接酶进行连接。
你要是有天根全式金载体连接说明书就明白了。
怎样构建质粒？ 20
4楼：匿名用户
分别将这两个基因插入到相应的载体中使用酶切，连接，转化，鉴定的方法就可以进行质粒构建了！
质粒载体如何构建
5楼：单单love伟伟
首先需要一个表达载体，看你需要原核还是真核，看情况选择，然后有获得你需要的目的基因，在两端加酶切位点，将目的基因与载体连接到一起后就完成了质粒载体的构建了。
6楼：匿名用户
你的质粒载如果是克隆型的，那么必须有：复制起始和终止位点、多克隆位点、标记位点、分子量小、易分离等特点。如果是表达型的则必须有：转录起始位点，也就是要有启动子和终止子等。
7楼：匿名用户
pcr 酶切 连接 转化 涂板 摇菌 提质粒。。。。
质粒的构建过程
8楼：different不同
因为高拷贝质粒稳定性低，而且给宿主细胞的压力大。
低拷贝数的质粒dna在宿主细胞**前只能复制1～2次，而多拷贝数质粒可以在细胞**前复制成10～200拷贝。
高拷贝数的质粒称为松弛型质粒(relaxed pla**id)，独立于细菌细胞而自主复制；低拷贝数的质粒一般是严紧型质粒(stringent pla**id)，它们的复制随细菌染色体的复制同步进行。
一般来说，外源基因的表达量随拷贝数的增加而提高，但是当拷贝数很大时，拷贝数与发酵目标产物产率的这种关系却不存在。这主要有两方面的原因：一方面，高拷贝数时外源基因的表达量不再由质粒的拷贝数决定，可能是由转录和翻译水平决定的；另一方面，高拷贝数的质粒往往很不稳定。
由于质粒拷贝数的变化直接与基因目标产物的产率有关，因此对于重组蛋白的生产来说，质粒的拷贝数是一个非常重要的参数。
而且同一个细胞里一般不会同时有两种不同的质粒，这是质粒不相容性(pla**id in***patibility)。在细菌细胞增殖过程中，其中必有一种会被逐渐排斥。所以要用纯化过的低拷贝质粒。
低拷贝在鸟枪法测序中很常用的。
随机测序战略又称鸟枪战略(shotgun strategy),此策略是将人 类基因组dna用机械方法随机切割成2kb左右的小片段,把这些dn**段装入适当载体,建 立亚克隆文库,从中随机挑 取克隆片段.最后通过克隆片段的重叠组装确定大片段dna序列.
构建质粒载体的大体步骤是什么？
9楼：匿名用户
（1）根据你已知的序列设计带有酶切位点的引物。
（2）pcr，跑胶，看看你的目的条带大小对不。
（3）条带对的话再重新跑个大孔胶，然后切胶**。（具体步骤根据你们所用试剂盒上的说明书进行），切胶**后还需电泳，看你**后怎么样。
（4）拿着你的**液与你的ta载体进行连接（具体操作见载体试剂盒说明书）
（5）连接后要转化进大肠杆菌感受态中。37℃ 200rpm 摇菌一个小时。
（6）之后涂布至固体培养基上。（培养基是带有抗生素的，这个抗生素的选择要根据你的载体来选）
（7）37℃倒置培养一夜
（8）第二天早上，挑取单菌落，进行菌落pcr，检测是否为假阳性。
（9）pcr之后如果条带正确，则摇菌，摇的就是你检测之后的那个单菌落。
（10）可以直接拿菌落测序，或者提取质粒测序。（记住要保存菌种）
（11）如果测序得到的序列确实为你最初设定的那个序列，则再摇你保存的那个菌种。
（12）提取质粒，做酶切。酶切的体系要看你所用的酶。
（13）酶切后还是需要进行**。
（14）将**的片段与你已经酶切好的表达载体的片段连接。
（15）再转化至大肠杆菌扩增。
（16）pcr检菌，酶切检菌。
（17）检菌正确，则你的表达载体构建完成。
因为我不知道你是否要构建到表达载体中，还是构建到克隆载体就可以，所以后面说的不是很详细，但是大体的步骤就是这样，只要你会构建克隆载体了，后面的表达载体基本也没有问题了，只是多下些功夫就可以了。
我上面说的都是很简单的语言，只供参考，不能作为书面语。有什么问题可以再交流。
质粒的载体构建
10楼：°迷岛
pbr322质粒载体的构建过程可简单地概括如下：
1、由于pbr322质粒的亲本之一是pmb1质粒，故首先以pmb1为基础，引入rldrd19质粒的tn3易位子，得到13.3kb的pmb3质粒；
2、pmb3的分子量显然使得它不适合作为载体，所以要通过在ecori活性条件下的消化让它大部分的无用片段失去，留下来的小片段的dna的黏性末端连接起来后就形成了pmb8质粒（2.6kb）；
3、此时，另外一种psc101质粒在ecori活性条件下消化产生了含有tetr抗性的dn**断，这个片断和pmb8整合在一起就形成了pmb9质粒（5.3kb）。此时pmb9为ampstetr表型；
4、pmb9已经初步具备载体的功能，为了让它更加完善，我们要让它具备amprtetr性能，即在pmb9上引入psf2124的tn3易位子，但tn3可以来也可以走，为了留住它，我们切去了tn3中表达转位酶的基因，形成了pbr313质粒。
此后我们兵分两路：一路把pbr313的psti位点除去，使之成为ampstetr表型的pbr318质粒；
5、；另一路把pbr313的ecorⅱ的位点切除，使之成为amprtets表形的pbr320质粒。
由此我们的到了两种功能互补的质粒，这样我们只要将他们杂交就可以得到一种接近全能的载体质粒了，这就是pbr322。
质粒构建、提取详细步骤？
11楼：何必曾相識
构建载体就是把目标dna、载体、dna连接酶、酶的buffer放到一起，然后4度连接过夜就行了。上面各个东西的用量，你可以参考连接酶的说明书。如果你是想连t载体的话，就可以直接拿pcr产物和载体连，如果是想做表达载体的话，你还要把目标dna和载体进行酶切**后，才能连。
质粒提取的方法一般用碱提法，去网上搜下，有很多的。或者买试剂盒提（试剂盒大部分也是碱提法的）。
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