基因表达载体的构建所需的条件,构建基因表达载体需要哪些工具

2020-11-25 05:18:50 字数 5108 阅读 4140

1楼:红袖添香雨濛濛

作为重组基因的载体,

1,必须能够在宿主细胞中复制,使重组基因能够在宿主基因中复制,从而稳定保存下来,这是作为运载体的必须条件。

2.具有多个限制酶切点,从而可以使不同的粘性末端与之相连,增强实用性

3.拥有标记基因是为了方便质粒进入宿主细胞后容易被检测出来,以便检测目的基因是否导入受体。

下面说说 载体所需的序列结构

目的基因就是能够产生所需蛋白质的dn**段,比如抗虫棉就是植入能产生抗虫蛋白的目的基因。

启动子、终止子:启动子、终止子是目的基因dna上特殊排序的碱基。rna从启动子开始转录、翻译,到终止子结束。

整个过程完成后便产生所需蛋白质。如果不清楚rna的转录翻译过程,可以再细说。

标记基因:用于检测是否已经植入目的基因。植入的成功率其实很低,所以有必要选出已经植入的个体。

比如抗虫棉,判断是否植入,用种植后让虫子吃的方法判断周期太长。所以在目的基因前或后植入比如抗四环素基因(如果目的基因成功植入,抗四环素基因也一起植入),然后用四环素来淘汰植入失败的个体,剩下的都是还有目的基因的个体。除了抗四环素基因,还有荧光基因等,总之就是方便检测。

应该很详细了吧。。。

构建基因表达载体需要哪些工具

2楼:匿名用户

大致需要以下几种东西:(1)原始表达载体,用以把目的基因连上去;(2)扩增目的基因的模板;(3)核酸内切酶,用于切割载体和目的基因;(4)连接酶,用于连接目的基因和载体;(5)大肠杆菌感受态,用于转化筛选阳性克隆。

3楼:佛树花江燕

在构建基因表达载体时要用到的工具酶有限制酶和dna连接酶。

基因表达载体的构建(即目的基因与运载体结合)是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心。其构建目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够表达和发挥作用。

过程:首先要用一定的限制酶切割质粒,使质粒出现一个缺口,露出黏性末端。然后用同

一种限制酶切断目的基因,使其产生相同的黏性末端(部分限制性内切酶可切割出平末端,拥有相同效果)。将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处,首先碱基互补配对结合,两个黏性末端吻合在一起,碱基之间形成氢键,再加入适量dna连接酶,催化两条dna链之间形成磷酸二酯键,从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来,形成一个重组dna分子。如人的胰岛素基因就是通过这种方法与大肠杆菌中的质粒dna分子结合,形成重组dna分子(也叫重组质粒)的。

基因工程表达载体应当具备哪些基本条件

4楼:匿名用户

a、目的基因、限制性核酸内切酶、运载体是基因工程必需具备的条件,但体细胞不一定是受体细胞,a错误; b、重组dna是由目的基因和质粒重组形成的,rna聚合酶是转录需要的酶,细胞中具有该种酶,因此不是基因工程必需的条件,b错误; c、mrna是基因转录的产物,基因工程中不需要提供该物质,质粒是运载体中的一种,除了质粒还有动植物病毒和噬菌体衍生物,因此质粒不是基因工程中必须的,c错误; d、限制酶和dna连接酶属于工具酶,另外运载体、目的基因和受体细胞是基因工程中的必需具备的条件,d正确.故选:d.

完整的基因表达载体包括哪些

5楼:匿名用户

基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤,而基因表达载体的本质是dna,组成元素有碳氢氧氮磷,其中氮在含氮碱基中,磷在磷酸基团中

完整的表达载体必须包括:

1、复制子,在细菌中扩增时所必须.

2、启动子,目的基因在细菌或细胞中转录所必须,转录了才能翻译,是谓“表达”.

3、原核筛选标记,细菌增菌所必须.

4、真核筛选标记,如果是真核表达,就是必须的.

5、多克隆位点,即酶切位点,插入目的片段的区域.

6、其他所需构件,可视实验设计情况而选用现成载体或在载体上自行添加.

另:表达的起始和终止,在目的基因上附带起始密码子和终止密码子.

6楼:千耀化秋柔

启动子:rna酶的结合部位

终止子:一段有特殊结构的dna短片段,转录结束的标志目的基因:这个一定得有,不解释

标记基因:共重组dna的鉴定和选择

复制原点:dna复制起点,即dna聚合酶结合位点

基因表达载体的构建必须需要外显子和内含子吗?

7楼:紫色学习

内含子在基因中,构造时只用外显子和启动子。

基因表达载体的构建(即目的基因与运载体结合)是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心。其构建目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够表达和发挥作用。

怎样构建目的基因表达载体

8楼:句月听风

先看表达载体有哪些合适的酶切位点,比如ndei,ncoi这样识别序列有atg起始密码子的,再看看目的基因含不含有这些位点,含有就不好连接了,挑好位点,计算下读码框是否正确,保证核糖体结合位点后的第一个atg与目的基因是间隔3的倍数个碱基。下游的位点更好选,如果有6xhis标签,想融合表达的话,就注意下要是同一读码框,同时利用载体的终止密码子,如果没有这样的需要,就利用目的基因本身的终止密码子好了。基本是这样,具体还是看看书吧。

基因表达载体的构建需要哪些工具酶 30

9楼:此生唯一自传

限制性核酸内切酶或限制酶——比作剪刀 dna连接酶——比作针线(包括t4dna连接酶 热稳定dna连接酶等) 楼上的说的不对

这还有几种酶的比较 有兴趣就看看 希望采纳限制性核酸内切酶(以下简称限制酶):限制酶主要存在于微生物(细菌、霉菌等)中。一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并且能在特定的切点上切割dna分子。

是特异性地切断dna链中磷酸二酯键的核酸酶(“分子手术刀”)。发现于原核生物体内,现已分离出100多种,几乎所有的原核生物都含有这种酶。是重组dna技术和基因诊断中重要的一类工具酶。

例如,从大肠杆菌中发现的一种限制酶只能识别gaattc序列,并在g和a之间将这段序列切开。目前已经发现了200多种限制酶,它们的切点各不相同。苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因,就能被某种限制酶切割下来。

在基因工程中起作用。   dna连接酶:主要是连接dn**段之间的磷酸二酯键,起连接作用,在基因工程中起作用。

  dna聚合酶:主要是连接dn**段与单个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键,在dna复制中起做用。   dna聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上,形成磷酸二酯键;而dna连接酶是在两个dn**段之间形成磷酸二酯键,不是在单个核苷酸与dn**段之间形成磷酸二酯键。

  dna聚合酶是以一条dna链为模板,将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的dna链;而dna连接酶是将dna双链上的两个缺口同时连接起来。因此dna连接酶不需要模板。 dna连接

rna聚合酶(又称rna复制酶、rna合成酶)的催化活性:rna聚合酶以完整的双链dna为模板,转录时dna的双链结构部分解开,转录后dna仍然保持双链的结构。真核生物rna聚合酶:

真核生物的转录机制要复杂得多,有三种细胞核内的rna聚合酶:rna聚合酶i转录rrna,rna聚合酶ii转录mrna,rna聚合酶iii转录trna和其它小分子rna。在rna复制和转录中起作用。

  反转录酶:rna指导的dna聚合酶,具有三种酶活性,即rna指导的dna聚合酶,rna酶,dna指导的dna聚合酶。在分子生物学技术中,作为重要的工具酶被广泛用于建立基因文库、获得目的基因等工作。

在基因工程中起作用。   解旋酶:是一类解开氢键的酶,由水解atp来供给能量它们常常依赖于单链的存在,并能识别复制叉的单链结构。

在细菌中类似的解旋酶很多,都具有atp酶的活性。大部分的移动方向是5'→3',但也有3'→5'移到的情况,如n'蛋白在φχ174以正链为模板合成复制形的过程中,就是按3'→5'移动。在dna复制中起做用。

  dna限制酶作用于磷酸二酯键   dna连接酶作用于磷酸二酯键   dna聚合酶作用于磷酸二酯键   dna解旋酶作用于氢键

10楼:__茧色

限制性核酸内切酶---分子手术刀

dna连接酶-----分子针线

11楼:匿名用户

限制性内切酶,dna连接酶

12楼:盘荣花梅桥

在构建基因表达载体时要用到的工具酶有限制酶和dna连接酶。

基因表达载体的构建(即目的基因与运载体结合)是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心。其构建目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够表达和发挥作用。

过程:首先要用一定的限制酶切割质粒,使质粒出现一个缺口,露出黏性末端。然后用同

一种限制酶切断目的基因,使其产生相同的黏性末端(部分限制性内切酶可切割出平末端,拥有相同效果)。将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处,首先碱基互补配对结合,两个黏性末端吻合在一起,碱基之间形成氢键,再加入适量dna连接酶,催化两条dna链之间形成磷酸二酯键,从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来,形成一个重组dna分子。如人的胰岛素基因就是通过这种方法与大肠杆菌中的质粒dna分子结合,形成重组dna分子(也叫重组质粒)的。

构建基因表达载体的原因

13楼:臭粑耙

如果我没记错的话应该是生物选修三的内容吧,基因工程部分表达载体是必须构造的,一般为质粒(小型环状dna)如果没有表达载体你想要植入基因是不能实现的,先用限制性内切酶切开质粒,然后将基因插入,在用dna连接酶连接上,记住连接酶和限制酶作用的部位是相同的

然后植物的就用花粉管通道法,动物就用显微注射法,然后就等目的基因表达吧应该会产生所需的蛋白质等产物

纯手工,望采纳!

14楼:匿名用户

单独的基因片段转进细胞里面是没法进行表达的 质粒上有其表达所需的启动原件

构建基因表达载体时,必须用什么处理目的基因和受体细胞 10

15楼:天蓝色心

你好,构建表达载体时必须用相同的限制性核酸内切酶处理目的基因和运载体,使他们拥有共同的黏性末端,从而可以连接在一起,导入受体细胞的时候根据受体细胞种类的不同方法不同,如果说处理的话,应该指的是导入微生物细胞,应该用ca+处理受体细胞,使其变成能自主吸收周围dna的状态,此细胞也称之为感受态细胞

关于基因表达载体的构建,基因表达载体构建步骤

1楼 我就是n动人 说说它们的作用吧 目的基因就是能够产生 所需蛋白质的dn 段,比如抗虫棉就是植入能产生抗虫蛋白的目的基因。 启动子 终止子 启动子 终止子是目的基因dna上特殊排序的碱基。rna从启动子开始转录 翻译,到终止子结束。 整个过程完成后便产生所需蛋白质。如果不清楚rna的转录翻译过程...

载体的抗生素抗性基因有什么作用,基因表达载体上的抗生素抗性基因是怎么来的,有什么作用?

1楼 具有 基因就说明能够 产生 物质,比如 具有 抗生素基因 的微生物就能生产 抗生素 ,而具有 胰岛素基因 的细胞就能分泌 胰岛素 。 。。 具有 抗性基因就说明能够 抵抗 物质。 首先, 抗生素 是一种是由微生物 包括细菌 真菌 放线菌属。 基因表达载体上的抗生素抗性基因是怎么来的,有什么作用...