1楼：容易特意
引物tm是设值和合成引物时的tm值, 也就是理论值。
而pcr产物tm值是在实际操作中摸索出来的温度值 引物tm值与pcr产物tm值这两个不同的引物当然退火温度也不相同,一般在设计引物的时候,程序就会显示出tm值是多少.在做pcr的时候,将退火温度设定
荧光定量pcrtm值代表啥意思
2楼：满意请采纳哟
tm值和溶解曲线是为了检测pcr反应特异性的，
主峰前的一个小峰可能是非特异性扩增，
也可能是引物二聚体，可以降低引物浓度试试
rt-pcr的引物如何设计？
3楼：匿名用户
引物可以通过一些软件设计，比如primer 5 ，但是还需要注意一些细节问题。
比如1.引物最好在模板cdna的保守区内设计。 dna序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。
在ncbi上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件（比如dnaman）比对（alignment），各基因相同的序列就是该基因的保守区。
2.引物长度一般在15~30碱基之间。 引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于taq dna 聚合酶进行反应。
3.引物gc含量在40%~60%之间，tm值最好接近72℃。 gc含量（***position）过高或过低都不利于引发反应。
上下游引物的gc含量不能相差太大。另外，上下游引物的tm值（melting temperature）是寡核苷酸的解链温度，即在一定盐浓度条件下，50%寡核苷酸双链解链的温度。有效启动温度，一般高于tm值5~10℃。
若按公式tm= 4（g+c）+2（a+t）估计引物的tm值，则有效引物的tm为55~80℃，其tm值最好接近72℃以使复性条件最佳。
4楼：匿名用户
先找出你要扩增的“保守序列”的所有碱基，到专门的设计软件上搜索最佳引物序列。
软件和软件的使用在丁香园上均可找到。
http://****dxy.**/bbs不过一开始最好有设计过的人在身边指点，不然会有很多问题
5楼：匿名用户
http://****bbioo.***/bio101/2007/20171.htm
上面有很清楚
的设计方法。
6楼：许无忧
建议你去借分子克隆实验指南来看看，或者采用引物设计软件，比如primer premier 5，把序列输入就可以得到不同打分的引物对
7楼：归跃卜叶丰
microrna的茎环引物可以自己设计。据说有公司也可以帮忙合成，不过还是自己设计好了发过去比较省钱吧。内参一般是u6，因为它长度和microrna一样比较短。
我做的反转录内参是跟microrna分开管子转的real-time
quantification
ofmicrornas
bystem–loop
rt–pcr
这篇文献上有比较容易看懂的茎环引物的图。也可以看看几篇相关的中文文献都有。
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