1楼：匿名用户
1.sybrgreenⅰ法：
在pcr反应体系中，加入过量sybr荧光染料，sybr荧光染料特异性地掺入dna双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的sybr染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与pcr产物的增加完全同步。
sybr定量pcr扩增荧光曲线图
pcr产物熔解曲线图（单一峰图表明pcr扩增产物的单一性）2.taqman探针法：
探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；pcr扩增时，taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条dna链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与pcr产物的形成完全同步。
实时荧光定量pcr内参是什么东西
2楼：禾鸟
1、实时荧光定量pcr内参：
在不同的pcr反应管中已定量的内参和引物，内参用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内参也被扩增。
在pcr产物中，由于内参与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内参为对照定量待检测模板。
2、选择：内参一般是固定的，可以用实验室之前就有的。或者用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。
扩展资料
（1）内参在传统定量中的作用：
由于传统定量方法都是终点检测，即pcr到达平台期后进行检测，而pcr经过对数期扩增到达平台期时，检测重现性极差。同一个模板在96孔pcr仪上做96次重复实验，所得结果有很大差异，因此无法直接从终点产物量推算出起始模板量。
加入内参后，可部分消除终产物定量所造成的不准确性。但即使如此，传统的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法。
（2）内参对定量pcr的影响：
若在待测样品中加入已知起始拷贝数的内标，则pcr反应变为双重pcr，双重pcr反应中存在两种模板之间的干扰和竞争，尤其当两种模板的起始拷贝数相差比较大时，这种竞争会表现得更为显著。
但由于待测样品的起始拷贝数是未知的，所以无法加入合适数量的已知模板作为内参。也正是这个原因，传统定量方法虽然加入内参，但仍然只是一种半定量的方法。
3楼：小笑聊情感
实时荧光定量pcr内参是一种在dna扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（pcr）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定dna序列进行定量分析的方法。
4楼：匿名用户
内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因，又叫看家基因，比如常用的gapdh， actin。或者18s rrna也可以。
如果内参表达量一致，说明你pcr的上样量一致，样本的质量也一致。如果出入很大，说明你的样本的浓度或者是质量有问题。测到的目的基因的表达量就不可靠了
5楼：匿名用户
管家基因，具体可以咨询公司，也可以自己看文献，常用的有gapdh，beta-actin和18srna，根据不同的**选用不同的管家基因，比如gapdh就被人诟病做癌细胞基因时超不准。。。
6楼：xueling黄
如果对内参要求很高的话，可以筛选合适内参，有免费的软件，比如genorm，normfinder等
实时荧光定量pcr的结果该怎样分析？
7楼：群英斗将
1、如果有标准曲线，按照标准曲线计算；
2、一般都是相对量，则用delta delta ct方法来计算；
3、引物或探针降解：可通过page电泳检测其完整性；
4、模板量不足：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起；
5、看ct值是分析荧光定量pcr最直观的一个数据，ct值一般在35左右就失去参考价值了，平时我们实验室用biodai-pcr荧光定量法测得的扩增曲线的起跳值基本在30左右。
扩展资料：
pvr的循环参数：
1、预变性；
模板dna完全变性与pcr酶的完全激活对pcr能否成功至关重要，加热时间参考试剂说明书。
2、变性步骤；
循环中一般95℃，30秒足以使各种靶dna序列完全变性，可能的情况下可缩短该步骤时间。变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不彻底，易造成扩增失败。
3、引物退火；
退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的tm值为参考，根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对pcr的特异性有较大影响。
4、引物延伸；
引物延伸一般在72℃进行（taq酶最适温度）。但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略延伸时间随扩增片段长短而定，一般推荐在1000bp以上，含pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。
5、循环数；
大多数pcr含25-35循环，过多易产生非特异扩增。
6、最后延伸；
在最后一个循环后，反应在72℃维持10-30分钟．使引物延伸完全，并使单链产物退火成双链。
8楼：南京金益柏生物科技****
用2-△△ ct法算的话，应如何算？ 假设检测a基因，ct分别为（这里记住ct越大，表明相对含量越低） 普通组/test1：28 实验组1/test2：
29 实验组2/test3：30 这时候要设对照了，假设test1为对照组（普通组），当然是以普通组为对照 那么，相对含量为。
9楼：匿名用户
看ct值、起始拷贝数、标准偏差等
如果是sybr做的话，再看下溶解曲线
实时荧光定量pcr与普通pcr的区别是什么？结果有何异同？能说明的问题是什么？
10楼：么破1自我
二者结果相同。都能说明生物体外的特殊dna复制的整个过程的扩增效率和溶解温度情况。
区别：1、二者系统组成不同
荧光定量pcr仪比普通的pcr仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统。
2、二者原理不同
荧光定量pcr实时监测与dna结合的荧光染料激发的荧光，普通ocr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量。
3、二者反应要求不同
荧光定量pcr对扩增片段有较高的要求，一般为100-300bp，普通pcr可以扩增长点的片段。
4、二者应用不同
荧光定量pcr主要是用来定量分析和确定基因转录水平的，普通的pcr仪是做定性分析和扩增基因片段，定量pcr仪可以做普通pcr仪的工作，反之不行。
5、二者测量成本不同
定量pcr仪**较为昂贵，普通的基因扩增仪(pcr仪)只能够定性地分析是否存在目标片段。但是**要低很多，而且运行成本也要低很多。
实时荧光定量pcr技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限，实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度，并记录在电脑软件之中，通过对每个样品ct值的计算，根据标准曲线获得定量结果。
11楼：匿名用户
原理不同：荧光定量pcr实时监
测与dna结合的荧光染料激发的荧光；普通pcr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量，一般是紫外光。
反应要求：荧光定量对扩增片段有较高的要求，一般为100-300bp；普通定量可以扩增长点的片段。如果不需要检测产物分子量大小，荧光定量可以不进行电泳就对产物进行定量分析，普通pcr必须电泳。
结果：荧光定量可以实现精确定量，普通pcr则不行。荧光定量体现可以看到整个扩增过程，可以看到扩增效率，溶解温度，直接得到的标准曲线等，这些是普通pcr无法实现的。
如果还不清楚建议去丁香园等**逛逛，希望可以帮到你
12楼：匿名用户
所谓实时荧光定量pcr技术，是指在pcr反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个pcr进程，最后通过标准曲线对未知模板进行“定量分析”的方法。
记住，实时荧光定量是定量分析
13楼：匿名用户
荧光pcr是为了测量mrna表达量的 普通pcr是为了扩增目的片段的
14楼：匿名用户
荧光定量是定量的，普通pcr是定性的，结果一个是说明含有多少，另一个说明有还是没有，前者更精确一点
实时荧光定量pcr和定量pcr有什么区别
1楼 匿名用户 实时荧光是反应荧光数值定量，普通那种是通过条带半定量，现在做半定量的已经很少了，除非是一些验证试验必须要图的 实时荧光定量pcr与普通pcr的区别是什么？结果有何异同？能说明的问题是什么？ 2楼 么破1自我 二者结果相同。都能说明生物体外的特殊dna复制的整个过程的扩增效率和溶解温度...
实时荧光定量pcr的重复性好是什么意思
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