实时荧光定量pcr的重复性好是什么意思

2020-11-22 12:47:40 字数 3125 阅读 3001

1楼:为青生物

3个实验重复的ct值的标准差在0.167以内(abi的标准),我们一般在0.5以内就可以了

实时荧光定量pcr的重复性好是什么意思

2楼:她恨我如魇丶

实时荧光定量pcr的重复性好有两个含义:

一次实验每个孔需要做3-6个重复孔,如果几个孔曲线比较一致,就是重复性好.

三次不同的实验结果比较一致,也是表示rt-pcr重复性好.

实时荧光定量pcr的个体重复问题

3楼:糟油酒丸

楼主这个问题在实验设计方面是很基础很重要的。混合几个个体的cdna来做是不可取的,一楼答得对,但所谓“大家不是很认可”不是一个科学的理由。

在比较不同组的差异时,楼主确实需要取几个个体的平均值,但是还有一些重要的信息,是只有在每个个体独立分别pcr定量时,才能够获取的:

方差。这表示几个个体之间的差异。 1,2,3,4 这四个个体同3,4,5,6这四个个体相比较,均值是2.

5比4.5;2.3, 2.

4, 2.6, 2.7 比较 4.

3, 4.4, 4.6, 4.

7,均值也是2.5比4.5。

但是前两组方差都很大,后两组方差小得多。用统计学的方法来看,前两组的差异不大,不是显著的差异,而后两组则是存在着显著的差异。

离群值。 这表示同一组的几个个体之中,有一个/几个非常特殊,数值与其他个体相差很大的,不能够代表这个组而在数据分析时需要剔除的。比如1, 4, 4.

2, 4.4这四个个体同3.1, 3.

3, 3.5, 3.7这四个个体来比较。

如果只看均值,为3.4比3.4,无任何差别。

而如果能够看到每个个体的数值,你就会剔除1这个离群值,得到前一组数值高于后一组,这个完全不同的结论。

所以把几个个体混合起来做,是不能够得到正确的有效解决科学问题的实验结果的。

4楼:匿名用户

最好是不要,这样会减小重复之间的误差。特别是需定量的样品,混样对定量结果的准确性是有影响的

什么是实时荧光定量pcr?有什么作用?请详细说明。

5楼:月光_倾城

好多生物工作做广告做培训噢。你怎么不去看一下。

荧光定量pcrct值每次重复相差多少

6楼:

如果有标准曲线,按照标准曲线计算。

一般都是相对量。则用delta delta ct方法来计算。举例如下:

对照组基因a的ct值为20, 内参(比如βactin)ct值15。实验组基因a ct值18,内参ct值14。 首先算加样量:

delta ct=15-14=1。2的1次方是2。也就是说。。

荧光定量pcr检测需要多次吗

7楼:匿名用户

一次就可以,每个样品要有至少三个重复。如果你认为数据不合理,可以多做几次,最好重新取样品来做。

实时荧光定量pcr与普通pcr的区别是什么?结果有何异同?能说明的问题是什么?

8楼:么破1自我

二者结果相同。都能说明生物体外的特殊dna复制的整个过程的扩增效率和溶解温度情况。

区别:1、二者系统组成不同

荧光定量pcr仪比普通的pcr仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统。

2、二者原理不同

荧光定量pcr实时监测与dna结合的荧光染料激发的荧光,普通ocr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量。

3、二者反应要求不同

荧光定量pcr对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp,普通pcr可以扩增长点的片段。

4、二者应用不同

荧光定量pcr主要是用来定量分析和确定基因转录水平的,普通的pcr仪是做定性分析和扩增基因片段,定量pcr仪可以做普通pcr仪的工作,反之不行。

5、二者测量成本不同

定量pcr仪**较为昂贵,普通的基因扩增仪(pcr仪)只能够定性地分析是否存在目标片段。但是**要低很多,而且运行成本也要低很多。

实时荧光定量pcr技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。

9楼:匿名用户

原理不同:荧光定量pcr实时监

测与dna结合的荧光染料激发的荧光;普通pcr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量,一般是紫外光。

反应要求:荧光定量对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp;普通定量可以扩增长点的片段。如果不需要检测产物分子量大小,荧光定量可以不进行电泳就对产物进行定量分析,普通pcr必须电泳。

结果:荧光定量可以实现精确定量,普通pcr则不行。荧光定量体现可以看到整个扩增过程,可以看到扩增效率,溶解温度,直接得到的标准曲线等,这些是普通pcr无法实现的。

如果还不清楚建议去丁香园等**逛逛,希望可以帮到你

10楼:匿名用户

所谓实时荧光定量pcr技术,是指在pcr反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个pcr进程,最后通过标准曲线对未知模板进行“定量分析”的方法。

记住,实时荧光定量是定量分析

11楼:匿名用户

荧光pcr是为了测量mrna表达量的 普通pcr是为了扩增目的片段的

12楼:匿名用户

荧光定量是定量的,普通pcr是定性的,结果一个是说明含有多少,另一个说明有还是没有,前者更精确一点

荧光定量pcr每个样品需要重复3次吗

13楼:匿名用户

没有必要,最多一个样品一次反应用两个重复的,以防有明显的操作失误。如果两个孔的数据很接近,就取平均值作为一个值来看待。如果2者差别很大,说明有操作失误,这个样本的结果就不能要,需要重做。

荧光定量重复的设置?

14楼:匿名用户

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