1楼：夏娃的夏天
作qpcr的标准曲线可以用pcr－elisa法作。
具体如下：
pcr－elisa法：
利用地高辛或生物素等标记引物，扩增产物被固相板上特异的探针所结合；
再加入抗地高辛或生物素酶标抗体－辣根过氧化物酶结合物，最终酶使底物显色。
常规的pcr－elisa法只是定性实验，加入内标，作出标准曲线，也可实现定量检测目的。
通过测定一系列已知组分的标准物质的某理化性质，从而得到该性质的数值所组成的曲线。
扩展资料：
实时荧光定量pcr技术，在pcr反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个pcr进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
检测方法：
1、sybrgreenⅰ法：
在pcr反应体系中，加入过量sybr荧光染料，sybr荧光染料特异性地掺入dna双链后，发射荧光信号。
而不掺入链中的sybr染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与pcr产物的增加完全同步。
sybr定量pcr扩增荧光曲线图、pcr产物熔解曲线图（单一峰图表明pcr扩增产物的单一性）。
2、taqman探针法：
探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；
pcr扩增时，taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号。
即每扩增一条dna链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与pcr产物的形成完全同步。
pcr反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光阈值的缺省（默认）设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍，即：threshold = 10*sdcycle 3-15。
利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中横坐标代表起始拷贝数的对数，纵坐标代ct值。因此，只要获得未知样品的ct值，即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。
如何用excel制作标准曲线
2楼：匿名用户
先选中所有数据，然后点菜单中插入选项中的图表功能，再点选散点图类型，点击完成即可，（其它的你可根据需要进行选择）
3楼：雾里看花
选择数据后 ，点插入中的图表向导，在图表类型中点xy散点图，在子图表类型中点左下的那个，再点完成就好了
4楼：匿名用户
在标准类型里选择“散点图”就可以画出曲线了。
5楼：义高蒲静逸
我不知道你那个曲线是什么样子，不过所有的线都可以在绘图工具栏中进行绘制，如果列表中的线形你不满意，可先选择一下近似的绘制，再选择线条，右击，编辑顶点，就可更改为你理想的样子了。
qpcr标准曲线
6楼：匿名用户
无论什么方法都有个检测下限，也就是说，当浓度低于这个值的时候，此种方法就检测不到了，即使有数值也是不可信的。10^1的单位是“个”copy吗？据我个人的经验，没有什么方法的检测精度有这么高的...
（能检测出10个分子，方法本身就可以发science了吧...）或者，你可以查一下你这个方法的检测下限是多少~如果你样品的copy数比较高，前面的点的线性又非常好，大可不必纠结于这一个数值，以前几个做标准曲线就行了~
7楼：杞秀梅干甲
qpcr是对微量样品的一个精确定量，用它来测细菌的量是不是太浪费了一点？如果一定要做，那么标准曲线必须是用已知浓度的样品（比如你所说的质粒），然后测未知浓度的样品。也就是说，做标准曲线的样品和你要测的样品必须是同一种。
而且，不同的引物需要做不同的标准曲线。
做realtime-pcr时，绝对定量标准曲线的制作
8楼：匿名用户
博凌科为-为你解答：首先，你连基本概念都没弄清楚，怎么做实验？real time pcr用rna？
是你把它和reverse transcription pcr搞混了吧？虽然首写字母都是rt，但也不至于这么糊涂的。你先查下基本概念，知道自己要做的是什么东西，后面会顺利很多。
第二个问题，我在你的另一个提问里已经回答了。至于混合制备，可能是考虑到转基因和野生型之间的同源性，用来检测引物或探针特异性的。
荧光定量pcr的标准曲线怎么跑
9楼：潇洒的热心网友
采用相对法定量要求必须目的基因和内参具有相同的扩增效率,所以需要做efficiency curve如果得到的斜率小于0.1,可以采用相对法,否则,需要重新设计能达到相同扩增效率的引物,或者就需要制作标准曲线,制作标准曲线,可以将基因片段克隆到质粒,然后体外转录成rna,定量以后合成cdna,然后按比例稀释后做出标准曲线,或者可以采用一个一直***的rna样品,如细胞株,然后以此为标准制作.如果直接采用dna做标准,那前提是rna逆转录的效率一致.
qpcr 的标准曲线一定是直线吗
10楼：匿名用户
博凌科为-为你首先,你连基本概念都没弄清楚,怎么做实验?real time pcr用rna?是你把它和reverse transcription pcr搞混了吧?
虽然首写字母都是rt,但也不至于这么糊涂的.你先查下基本概念,知道自己要做的是什么东西,后面会顺利很多.第二个问题,我在你的另一个提问里已经回答了.
至于混合制备,可能是考虑到转基因和野生型之间的同源性,用来检测引物或探针特异性的.
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