实时荧光定量pcr和定量pcr有什么区别

2020-11-22 12:46:36 字数 5201 阅读 9679

1楼:匿名用户

实时荧光是反应荧光数值定量,普通那种是通过条带半定量,现在做半定量的已经很少了,除非是一些验证试验必须要图的

实时荧光定量pcr与普通pcr的区别是什么?结果有何异同?能说明的问题是什么?

2楼:么破1自我

二者结果相同。都能说明生物体外的特殊dna复制的整个过程的扩增效率和溶解温度情况。

区别:1、二者系统组成不同

荧光定量pcr仪比普通的pcr仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统。

2、二者原理不同

荧光定量pcr实时监测与dna结合的荧光染料激发的荧光,普通ocr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量。

3、二者反应要求不同

荧光定量pcr对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp,普通pcr可以扩增长点的片段。

4、二者应用不同

荧光定量pcr主要是用来定量分析和确定基因转录水平的,普通的pcr仪是做定性分析和扩增基因片段,定量pcr仪可以做普通pcr仪的工作,反之不行。

5、二者测量成本不同

定量pcr仪**较为昂贵,普通的基因扩增仪(pcr仪)只能够定性地分析是否存在目标片段。但是**要低很多,而且运行成本也要低很多。

实时荧光定量pcr技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。

3楼:匿名用户

原理不同:荧光定量pcr实时监

测与dna结合的荧光染料激发的荧光;普通pcr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量,一般是紫外光。

反应要求:荧光定量对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp;普通定量可以扩增长点的片段。如果不需要检测产物分子量大小,荧光定量可以不进行电泳就对产物进行定量分析,普通pcr必须电泳。

结果:荧光定量可以实现精确定量,普通pcr则不行。荧光定量体现可以看到整个扩增过程,可以看到扩增效率,溶解温度,直接得到的标准曲线等,这些是普通pcr无法实现的。

如果还不清楚建议去丁香园等**逛逛,希望可以帮到你

4楼:匿名用户

所谓实时荧光定量pcr技术,是指在pcr反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个pcr进程,最后通过标准曲线对未知模板进行“定量分析”的方法。

记住,实时荧光定量是定量分析

5楼:匿名用户

荧光pcr是为了测量mrna表达量的 普通pcr是为了扩增目的片段的

6楼:匿名用户

荧光定量是定量的,普通pcr是定性的,结果一个是说明含有多少,另一个说明有还是没有,前者更精确一点

pcr和实时荧光定量pcr这两种有什么区别

7楼:匿名用户

实时荧光定量pcr技术,是指在pcr反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个pcr进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

pcr(聚合酶链式反应)是利用dna在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°c左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至dna聚合酶最适反应温度(72°c左右),dna聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。

恒温pcr和实时荧光定量pcr的不同,是不同在实时荧光定量pcr的系统中加入了荧光染料(sybr green 或taqman 探针等等)。以sybr green为例,这种染料可以结合在双链的dna上,当pcr不断进行时,每一次退火生成的双链dna也在增加,荧光染料结合也越多,荧光也越强。在机器中有一个探测荧光的探头,可以定量检测荧光的强度,转换成数值。

这样就可以实时记录反映体系中dna的反应情况。

荧光pcr更有优势,因为荧光pcr灵敏度高于恒温pcr,同样**也高一些。

pcr,rt-pcr,实时荧光定量pcr的区别与联系

8楼:永恒的瞬间绽放

1、所说的pcr应该就是最常规的pcr,以dna为模板,通过上下游引物,实现dna的扩增。

2、rt-pcr一般情况下是指反转录pcr(reverse transcription),尽管有些资料上说实时荧光定量pcr也(realtime fluores-cence quantitative pcr)也简称rt-pcr,但是这是不对的,不推荐。

基本操作过程是将所提取的rna进行反转录,然后将所获得的cdna作为模板,设计引物进行扩增,是一种检测基因表达的常用方法。

3、实时荧光定量pcr也就是real-time pcr,其最大的作用是检测样品中的初始dna浓度。

至于三者的关系,rt-pcr和实时定量pcr应该都属于pcr,在rna实验中,这二者都会应用到。

例如你要比较2个组织中的某基因的表达差异,首先你要提取2个组织的总rna,然后通过rt-pcr检测该基因是否在2个组织中有表达,然后通过实时定量pcr测定该基因在2个组织中的表达量是否具有显著性差异。

扩展资料:

pcr原理

dna的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链dna在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在dna聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。

在实验中发现,dna在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制dna的变性和复性,加入设计引物,dna聚合酶、dntp就可以完成特定基因的体外复制。

但是,dna聚合酶在高温时会失活,因此,每次循环都得加入新的dna聚合酶,不仅操作烦琐,而且**昂贵,制约了pcr技术的应用和发展。

耐热dna聚合酶-taq酶的发现对于pcr的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使pcr技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,pcr技术得以大量应用,并逐步应用于临床。

pcr技术的基本原理类似于dna的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。pcr由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成:

①模板dna的变性:模板dna经加热至93℃左右一定时间后,使模板dna双链或经pcr扩增形成的双链dna解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;

②模板dna与引物的退火(复性):模板dna经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板dna单链的互补序列配对结合;

③引物的延伸:dna模板-引物结合物在72℃、dna聚合酶(如taqdna聚合酶)的作用下,以dntp为反应原料,靶序列为模板,按碱基互补配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板dna链互补的半保留复制链,重复循环变性-退火-延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”,

而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

实时荧光定量pcr与基本pcr相比有什么优点

9楼:杏雀烈

荧光定量pcr与普通pcr相比具有以下优点:

1、高灵敏性 可检测单个细胞基因;

2、高特异

10楼:匿名用户

普通的pcr大多数是定性实验,而实时荧光定量pcr则定量和定性都可以做。应用领域也不一样,普通pcr一般应用于基因组克隆、dna测序、rna反转录等,而实时荧光定量pcr一般应用于mrna表达量分析、绝对定量、蛋白表达、snp分析、阴阳性解析等领域。不是定量pcr比pcr好,而是两者应用与不同的领域,起到了不同的作用。

荧光定量pcr较普通pcr不同的一点就是可以实时检测pcr扩增产物,从而可进行绝对定量或者相对定量。

11楼:奔马的香香猪

pcr实验主要采用sybr green染料法和taqman探针法,biog技术采用经化学修饰的热启动聚合酶,有效避免了非特异扩增,具有高度的特异性。反应缓冲液经多次优化,与热启动聚合酶具有最为乐观的搭配,使聚合酶的活性能够得到最大程度的发挥。反应灵敏快速,40个循环只需20多分钟的时间。

在20ul的反应体系里,只要有几个拷贝的dna分子就能被检测出来。

恒温pcr和实时荧光定量pcr这两种有什么区别?哪个更有优势?

12楼:最纯粹的自由

实时荧光定量pcr技术,是指在pcr反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个pcr进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

pcr(聚合酶链式反应)是利用dna在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°c左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至dna聚合酶最适反应温度(72°c左右),dna聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。

恒温pcr和实时荧光定量pcr的不同,是不同在实时荧光定量pcr的系统中加入了荧光染料(sybr green 或taqman 探针等等)。以sybr green为例,这种染料可以结合在双链的dna上,当pcr不断进行时,每一次退火生成的双链dna也在增加,荧光染料结合也越多,荧光也越强。在机器中有一个探测荧光的探头,可以定量检测荧光的强度,转换成数值。

这样就可以实时记录反映体系中dna的反应情况。

荧光pcr更有优势,因为荧光pcr灵敏度高于恒温pcr,同样**也高一些。

13楼:傅浩川

恒温pcr主要是,确定是否存在一段特异的dna序列。

但是荧光定量pcr是看溶液中特异的pcr序列的浓度。

两者没有什么优势。一般的可能就是功能简单但是便宜。主要是便宜荧光的很贵 很贵 不是一般的贵!!

实时荧光pcr方法灵敏度略高于恒温pcr,但仪器昂贵,试剂消耗也相对更贵,适合向高端客户推广;恒温pcr大部分性能与实时荧光pcr相对,灵敏度稍低于实时荧光pcr,但仪器性价比高,更利于推广。实际推广中对高端客户可以采取用恒温pcr作为契机,在交流中如客户对灵敏度有高要求而又有一定实力的可推荐使用实时荧光pcr产品。

14楼:匿名用户

实时荧光pcr方法灵敏度略高于恒温pcr,但仪器昂贵,试剂消耗也相对更贵,适合向高端客户推广;恒温pcr大部分性能与实时荧光pcr相对,灵敏度稍低于实时荧光pcr,但仪器性价比高,更利于推广。实际推广中对高端客户可以采取用恒温pcr作为契机,在交流中如客户对灵敏度有高要求而又有一定实力的可推荐使用实时荧光pcr产品。

什么是实时荧光定量pcr?有什么作用?请详细说明。

15楼:月光_倾城

好多生物工作做广告做培训噢。你怎么不去看一下。

什么是实时定量PCR?有什么作用?请用自己的话详细说明

1楼 红素芹功琴 pcr的全称是 多聚酶链反应,用俗话说就是人为地制造一个环境,使双链基因片段进行复制 扩增 目的基因 就是你想要扩增的基因片段 变性 是在热的环境下使双链解链,一般需要94摄氏度 引物 引导复制的开始,是一种rna单链片段,能引导复制的起始位置 聚合酶 用的是taq酶是在火山口找到...

大象和猛犸有什么区别,猛犸和大象有什么区别?

1楼 词嘿兰 猛犸象是一种远古的物种, 生活在西伯利亚等寒冷的地区,以地上的植物为食,以群居为主。 它们身形特别高大,1980年在呼伦贝尔市扎赉诺尔煤矿 出土了中国目前最大的猛犸象骨骸化石。经装架后,其高达4 7米,长9米,门齿长3 1米。 据推算它活着时体重约在8吨以上。 这具猛犸化石被誉为中国古...

认识和相识有什么区别,相识和认识有什么区别?

1楼 再见 认识有心性认识和感性认识。认识是相识的最初阶段。相识则是指从陌生到熟悉之后彻底认识的意思 2楼 萌小殇 认识就是 能叫出一个人的名字的就算认识。相识就是 相知相爱的。 3楼 暗夜幽冥瘰 认识是现在认识的,相识是以前就以前就认识了 4楼 开心一下 没区别,都有一个识字 5楼 佛树花江燕 认...