1楼：匿名用户
怎么做？加完反应液和样品放在定量pcr仪的反应孔里直接就出来了啊？你是想问原理，还是别的？
实时荧光定量pcr没出现扩增曲线为什么
2楼：匿名用户
说明扩增失败。常见原因如下：（1）定量试剂质量较差；（2）模板质量太差；（3）引物质量太差；（4）pcr扩增时反应程序的设置有问题。
实时荧光定量pcr曲线怎么分析
3楼：龙凤油洺月
看荧光背景；
看扩增曲线形态（s）；
看ct值；
靠扩增效率、
谁能具体解释一下荧光定量pcr中溶解曲线的意思以及作用
4楼：奔马的香香猪
溶解曲线分析可以用来确定不同的反应产物，包括非特异性产物。溶解曲线分析可以用来确定不同的反应产物，包括非特异性产物。扩增反应完成后，通过逐渐增加温度同时监测每一步的荧光信号来产生溶解曲线，随着反应中双链dna变性，荧光染料又回复到游离状态导致荧光信号降低，用荧光信号改变的负的一次导数与温度作图，在扩增产物的溶解温度上有一特征峰（tm，dna双链解链50%的温度），用这个特征峰就可以将特异产物与其它产物如引物二聚体区分开，因为它们在不同的温度溶解.
这个一般是用syby green作为荧光染料的时候需要做的工作！我们实验室用bioghc elitefast sybr kit检测dna,熔解曲线是为了验证扩增产物特异性的，要是熔解曲线是单峰说明产物只有一条，结果较好；要是双峰说明产物不特异，可能存在引物二聚体或非特异性扩增，有可能你的引物设计有问题。
5楼：匿名用户
溶解曲线是判断扩增产物是否单一的曲线，顾名思义，其跟模板（或其浓度）没有关系，扩增什么基因就应该有其相对应的溶解曲线，类似于电泳。那么你扩增几种基因就应该有几种对应的峰（一般sybr法的目的基因在80~90℃之间），我说的是一般情况，这个跟扩增片段长短有关系。出现其他峰就该考虑是否为引物二聚体（一般为60~75℃之间）视引物长度而定，而基因组dna污染的峰会在90℃以后。
出现引物二聚体可能是引物设计、引物加量等原因（也有可能是从加完反应液到上机开始pcr这之间的时间过长）所致；基因组dna那么考虑设计跨内含子引物或者实验之前做gdna的消除工作。而阴性对照有目的峰那可能就是模板污染，注意实验操作等避免模板污染。
详细请见我的回答：http://zhidao.baidu.***/question/548001369.html?from=pubpage&msgtype=2
6楼：表咏蒿乐蓉
用syber
green方法做完pcr后，用来判断产物是否相对专一。反应结束后，逐渐加温。和syber
green分子结合的pcr产物随温度升高逐渐变为单链，就不能在和syber
green结合。一般每加温一度，读一次信号。当温度到达pcr产物的tm时，产物解离一下增多。
曲线的横坐标是温度，而纵坐标是荧光信号的变化！开始加热，信号变化不大，所以几乎是平的，接近tm时，突然变化加大，所以出现峰值。再升温，产物全部解离，就又是一条直线了。
如果有非特异性产物，在加热过程中就会出现一些比较矮，宽的峰。
实时定量pcr扩增曲线怎么分析
7楼：南京金益柏生物科技****
可能是模板浓度太低了，都没有达到阈值的，刚开始要做不同浓度梯度的，摸一下模板浓度条件
8楼：桑桑双子的老巢
你好，扩增曲线可以粗略地判断扩增效率。sybr green的双delta ct法要求目的基因和内参的扩增效率基本一致。如果不一致，需要对公式进行修正，部分qpcr仪的配套软件可以做到，直接输入每对引物的扩增效率。
但无论如何，保证高扩增效率是实验成功的关键。如果扩增效率一致，不同ct的曲线显示出来就基本是平行的位移，其倾斜程度基本一致。而如下图一样，一条比较“陡”，另一条比较“平”，那么意味着扩增效率不一致。
有可能是引物效率不一，或者个别样品、反应孔存在抑制pcr的污染等。
来自：肽度时界威客吴博士，有科研难题、科研需求就上肽度时界吧！
实时定量pcr扩增曲线怎么分析,实时定量PCR的结果是怎样分析的
1楼 南京金益柏生物科技 可能是模板浓度太低了，都没有达到阈值的，刚开始要做不同浓度梯度的，摸一下模板浓度条件 2楼 桑桑双子的老巢 你好，扩增曲线可以粗略地判断扩增效率。sybr green的双delta ct法要求目的基因和内参的扩增效率基本一致。如果不一致，需要对公式进行修正，部分qpcr仪的...
实时荧光定量pcr和定量pcr有什么区别
1楼 匿名用户 实时荧光是反应荧光数值定量，普通那种是通过条带半定量，现在做半定量的已经很少了，除非是一些验证试验必须要图的 实时荧光定量pcr与普通pcr的区别是什么？结果有何异同？能说明的问题是什么？ 2楼 么破1自我 二者结果相同。都能说明生物体外的特殊dna复制的整个过程的扩增效率和溶解温度...
荧光定量pcr中溶解曲线的温度大概是多少
1楼 祝您每天开心 一般染料法定量pcr在进行完pcr后都要运行熔解曲线 一般设定先94度几分钟 然后骤冷到65度 假定65度为退伙温度 在65度时 pcr产物是以双链的形式存在的。 因为染料是插到双链dna的小沟里然后发荧光的 所以这个时候检测到很强的光信号 随着温度升高 双链逐渐打开 荧光信号逐...