1楼：祝您每天开心
一般染料法定量pcr在进行完pcr后都要运行熔解曲线,一般设定先94度几分钟,然后骤冷到65度（假定65度为退伙温度）.在65度时,pcr产物是以双链的形式存在的。
因为染料是插到双链dna的小沟里然后发荧光的,所以这个时候检测到很强的光信号,随着温度升高,双链逐渐打开,荧光信号逐渐减弱。
2楼：匿名用户
realtime pcr的溶解曲线的出峰温度一般在85度——90度，溶解温度是指核酸片段解链一半时的温度。哪些因素影响熔解温度呢？pcr产物大小，gc含量等，一般的熔解温度是要大于80度的。
我们实验室用bioghc -pcr检测了dna,溶解曲线是为了验证扩增产物特异性的
荧光定量pcr溶解曲线怎么判断是否为目的产物
3楼：南京金益柏生物科技****
根据曲线初步判断，整个实验设计还可以！你做相对定量吗，将样品结果与对照看看基因表达量分析就可以了！ 如果绝对定量，需要进一步实验吧！
4楼：梦屿千寻_之歌
sybre green做溶解曲线特异性产物二聚体溶解曲线温度低峰宽
探针做信号
谁能具体解释一下荧光定量pcr中溶解曲线的意思以及作用
5楼：匿名用户
这个用于syber green实时pcr。而使用探针的不需要。
因为syber green是非特异性结合，所以如果有非特异性的序列被扩增，也会同样产生信号。在设计引物的时候，可以计算出被扩增序列的tm。pcr反应完成以后，开始进行解离曲线的测量。
一般是对反应产物逐步加温，每增加一度，测信号一次。pcr产物会在温度达到tm时发生解离，荧光信号会一下子消失、如果把温度和荧光信号的变化做一个图，就会看到一开始，荧光信号没有变化，是一个平直的线。达到tm附近是，会有一个比较锐利的峰，说明信号的变化很大，继续加热超过tm，这是双链都打开了。
所以信号也不会再有变化，所以又是平直的线。
如果产物都是特异性的，就是我上面说的那样。如果有非特异性产物，就会出现不在tm就出现峰值，或者有矮而胖的峰值等等异常情况出现，这样，那个管子的样本就不能用了。
怎么理解荧光定量pcr的溶解曲线
6楼：匿名用户
荧光定量pcr的溶解曲线理解：用syber green方法做完pcr后，用来判断产物是否相对专一。应结束后，逐渐加温。和syber
green分子结合的pcr产物随温度升高逐渐变为单链，就不能在和syber
green结合。
一般每加温一度，读一次信号。当温度到达pcr产物的tm时，产物解离一下增多。曲线的横坐标是温度，而纵坐标是荧光信号的变化，开始加热，信号变化不大，所以几乎是平的。
接近tm时，突然变化加大，所以出现峰值。再升温，产物全部解离，就又是一条直线了。如果有非特异性产物，在加热过程中就会出现一些比较矮，宽的峰。
7楼：匿名用户
这个一般是用syby green作为荧光染料的时候需要做的工作！
因为syby green染料是非特异的染料，只要有扩增，染料就可以镶嵌在双链中发出荧光。我们做溶解曲线是为了观察我们扩增发出荧光的片段是不是我们需要的产物。如果溶解曲线做出来只有单峰，且出锋位置是你的退火温度，那么这个是你的产物发出的荧光，实验结果有效。
如果出现多锋或退火温度不对，那么这个实验结果是不可信的！你需要再次调整！
请问：实时荧光定量pcr怎样设定才能有溶解曲线？
8楼：匿名用户
有一种可能是，在试验开始的设定阶段，需要为整个实验设计出熔解曲线的程序，这个您可能忘记了。
9楼：匿名用户
在设置反应程序时，在最后加一步
实时定量pcr的绘制溶解曲线应该从多少度开始升温
10楼：匿名用户
如果扩增产物只有目标序列的话就应该只有一个峰的。
1.简单的说来，溶解曲线就是在采用荧光染料法进行实时定量pcr时采用的一种分析手段。当体系的温度逐渐升高的时候，体系中的pcr产物慢慢的由双链变成单链，这是一个逐渐变化的过程。
由于荧光染料能插入到双链dna中而发光，单链不发光，因此可以看到荧光的变化。在实时荧光pcr仪中都应该自带分析软件，看溶解曲线主要是看其峰在什么位置，不同的核酸会有不同的峰。同一核酸的峰差别应该不大，一般能控制在正负0.
5度内。
2.溶解曲线是做染料法定量pcr时，用到的一种结果分析方法。
一般染料法定量pcr在进行完pcr后都要运行熔解曲线，一般设定先94度几分钟，然后骤冷到65度（假定65度为退伙温度）。在65度时，pcr产物是以双链的形式存在的，因为染料是插到双链dna的小沟里然后发荧光的，所以这个时候检测到很强的光信号，随着温度升高，双链逐渐打开，荧光信号逐渐减弱。因为理论上要检测的样本长度一定，所以到达某一个温度的时候，应该全部解链，我们假设在88 度的时候pcr产物全部解链，这个时候就是我们在熔解曲线图上看到的所有曲线同时骤然下滑的那个点，一般把最高温设定在94度左右。
如果下滑点不在一个温度，说明不是一种产物。
11楼：匿名用户
一般都是50到90度
55度有小峰的话很可能就是非特异扩增出的杂带，把pcr产物拿去电泳，如果是非特异条带的话，适当提高退火温度，提高2度左右，再不行就缩短退火和延伸时间
12楼：士诚小人也
一般是从65度开始，升到90度左右
13楼：滑茗绪惜儿
实时pcr产物的tm值大小一般会在80°上下，所以溶解曲线不必从40°开始，可以从65°开始进行溶解曲线绘制，另外在产物之前出现的小峰，同时也在阴性对照中出现了，应该是引物二聚体或者是非特异的扩增。
谁能具体解释一下荧光定量pcr中溶解曲线的意思以及作用？
14楼：匿名用户
用syber green方法做完pcr后，用来判断产物是否相对专一。反应结束后，逐渐加温。和syber green分子结合的pcr产物随温度升高逐渐变为单链，就不能在和syber green结合。
一般每加温一度，读一次信号。当温度到达pcr产物的tm时，产物解离一下增多。曲线的横坐标是温度，而纵坐标是荧光信号的变化！
开始加热，信号变化不大，所以几乎是平的，接近tm时，突然变化加大，所以出现峰值。再升温，产物全部解离，就又是一条直线了。
如果有非特异性产物，在加热过程中就会出现一些比较矮，宽的峰。
什么是realtime-pcr溶解曲线
15楼：匿名用户
如图所示，这就是一个标准的real time-qpcr溶解曲线。下面从几个方面来解读：1、随着温度的升高，dna双链断裂；接着温度降低，到达退火温度的时候，dna双链复性，荧光分子绑定在dna双链上，所以荧光信号值到达最高点。
上面的是反映在扩增曲线上面的。2、接着dna双链分子由退火温度约60度，继续升温，双链断开，dna分子溶解。请注意溶解曲线的纵坐标，表示单位时间内荧光信号的变化量。
当扩增产物特异，是单一产物的时候，这个纵坐标峰值所对应的横坐标应该是一致的，即呈现单一的溶解峰，这个时候，在同样的温度下，可以认为是产物相同；如果溶解峰不单一，就意味有非特异性扩增。
16楼：匿名用户
溶解曲线分析可以用来确定不同的反应产物，包括非特异性产物。扩增反应完成后，通过逐渐增加温度同时监测每一步的荧光信号来产生溶解曲线，随着反应中双链dna变性，荧光染料又回复到游离状态导致荧光信号降低，用荧光信号改变的负的一次导数与温度作图，在扩增产物的溶解温度上有一特征峰（tm，dna双链解链50％的温度），用这个特征峰就可以将特异产物与其它产物如引物二聚体区分开，因为它们在不同的温度溶解.
这个一般是用syby green作为荧光染料的时候需要做的工作！
因为syby green染料是非特异的染料，只要有扩增，染料就可以镶嵌在双链中发出荧光。我们做溶解曲线是为了观察我们扩增发出荧光的片段是不是我们需要的产物。如果溶解曲线做出来只有单峰，且出锋位置是你的退火温度，那么这个是你的产物发出的荧光，实验结果有效。
如果出现多锋或退火温度不对，那么这个实验结果是不可信的！你需要再次调整！