1楼：匿名用户
不同探针有些许差别，但原理一样。简单说：就是在探针上加上荧光素，在taq聚合酶作用下合成带有荧光素探针的片段，再给它激发光，释放一光波，仪器检测并分析。
至于结果：仪器有自动分析功能，会给出一个阈值线。阈值线与荧光曲线的交叉点就是ct值。根据ct值和你使用的试剂盒说明书来判读结果。
实时荧光定量pcr的结果该怎样分析？
2楼：群英斗将
1、如果有标准曲线，按照标准曲线计算；
2、一般都是相对量，则用delta delta ct方法来计算；
3、引物或探针降解：可通过page电泳检测其完整性；
4、模板量不足：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起；
5、看ct值是分析荧光定量pcr最直观的一个数据，ct值一般在35左右就失去参考价值了，平时我们实验室用biodai-pcr荧光定量法测得的扩增曲线的起跳值基本在30左右。
扩展资料：
pvr的循环参数：
1、预变性；
模板dna完全变性与pcr酶的完全激活对pcr能否成功至关重要，加热时间参考试剂说明书。
2、变性步骤；
循环中一般95℃，30秒足以使各种靶dna序列完全变性，可能的情况下可缩短该步骤时间。变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不彻底，易造成扩增失败。
3、引物退火；
退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的tm值为参考，根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对pcr的特异性有较大影响。
4、引物延伸；
引物延伸一般在72℃进行（taq酶最适温度）。但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略延伸时间随扩增片段长短而定，一般推荐在1000bp以上，含pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。
5、循环数；
大多数pcr含25-35循环，过多易产生非特异扩增。
6、最后延伸；
在最后一个循环后，反应在72℃维持10-30分钟．使引物延伸完全，并使单链产物退火成双链。
3楼：南京金益柏生物科技****
用2-△△ ct法算的话，应如何算？ 假设检测a基因，ct分别为（这里记住ct越大，表明相对含量越低） 普通组/test1：28 实验组1/test2：
29 实验组2/test3：30 这时候要设对照了，假设test1为对照组（普通组），当然是以普通组为对照 那么，相对含量为。
4楼：匿名用户
看ct值、起始拷贝数、标准偏差等
如果是sybr做的话，再看下溶解曲线
实时定量pcr的结果是怎样分析的
5楼：小乾乾
1、如果有标准曲线，按照标准曲线计算。
2、一般都是相对量，则用delta delta ct方法来计算。
3、举例如下：对照组基因a的ct值为20， 内参（比如βactin)ct值15。实验组基因a ct值18，内参ct值14。
4、首先算加样量：delta ct=15-14=1。2的1次方是2。
也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。基因a: delta ct=20-18=2。
2的2次方是4。也就是说基因a的量在实验组是对照组的4倍。但是由于加样量是2倍，所以4处以2=2，最后的相对量是2倍。
5、几点注意：必须确定扩增的特异性，只有相同目标的ct值才能相减（扩增效率有可能不同），2的某次方只是理论值，实际扩增效率低于2，最好不用syber green。
6楼：豆村长de草
实时荧光定量pcr技术是在pcr反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个pcr进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
基线在pcr扩增反应的最初数个循环里，荧光信号变化不大，接近一条直线，这样的直线即基线。光域值threshold的设定，一般将pcr反应前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值是pcr3-15个循环荧光信号标准差的10倍，荧光域值设定在pcr扩增的指数期。
融解曲线是用来验证扩增产物特异性的，如果产物是单一条带，融解曲线就会出现一尖峰；如果有引物二聚体或其它非特异性扩增，就会出现至少两个尖峰。
扩展资料：
时荧光定量pcr仪real-time qpcr 常见问题分析：
1、无ct值出现
1）检测荧光信号的步骤有误：一般sg法采用72℃延伸时采集，taqman法。则一般在退火结束时或延伸结束采集信号；
2）引物或探针降解：可通过page电泳检测其完整性；
3）模板量不足：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起；
4）模板降解：避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。
2、ct 值出现过晚（ct>38）
1）扩增效率低:反应条件不够优化，设计更好的引物或探针、改用三步法 进行反应、适当降低退火温度、增加镁离子浓度等；
2）pcr各种反应成分的降解或加样量不足，
3）pcr产物太长：一般采用80-150bp的产物长度。
3、标准曲线线性关系不佳
1）加样存在误差：使得标准品不呈梯度；
2）标准品出现降解：应避免标准品反复冻融，或重新制备并稀释标准品；
3）引物或探针不佳：重新设计更好的引物和探针；
4）模板中存在抑制物，或模板浓度过高。
7楼：匿名用户
实时定量pcr的结果是可以和所有核酸结合，没有特异性。
要保证特异性的话，最好用其他的方法。扩增体系中加入模板dna的体积，比如同时10微升的体系，对照组加1微升dna，实验组加2微升dna，则实验组的加样量是对照组的2倍。
看ct值是分析荧光定量pcr最直观的一个数据，ct值一般在35左右就失去参考价值了，平时我们实验室用biodai-pcr荧光定量法测得的扩增曲线的起跳值基本在30左右。
扩展资料：
real-time qpcr 常见问题分析：
一、无ct值出现
1、检测荧光信号的步骤有误：一般sg法采用72℃延伸时采集taqman法。
则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。
2、引物或探针降解：可通过page电泳检测其完整性。
3、模板量不足：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。
4、模板降解：避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。
二、ct 值出现过晚（ct>38）
1、扩增效率低:反应条件不够优化，设计更好的引物或探针、改用三步法 进行反应、适当降低退火温度、增加镁离子浓度等。
2、pcr各种反应成分的降解或加样量不足。
3、pcr产物太长：一般采用80-150bp的产物长度。
三、标准曲线线性关系不佳
1、加样存在误差：使得标准品不呈梯度。
2、标准品出现降解：应避免标准品反复冻融，或重新制备并稀释标准品。
3、引物或探针不佳：重新设计更好的引物和探针。
4、模板中存在抑制物，或模板浓度过高。
四、负对照有信号、溶解曲线不止一个主峰
1、引物设计不够优化：应避免引物二聚体和发夹结构的出现。
2、引物浓度不佳：适当降低引物的浓度，并注意上下游引物的浓度配比。
3、镁离子浓度过高：适当降低镁离子浓度，或选择更合适的mix 试剂盒。
4、模板有基因组的污染：rna提取过程中避免基因组dna 的引入，或通过引物设计避免非特异扩增。
五、扩增效率低
1、反应试剂中部分成分特别是荧光染料降解。
2、反应条件不够优化：可适当降低退火温度或改为三步扩增法。
3、反应体系中有pcr反应抑制物：一般是加入模板时所引入，应先把模板适度稀释，再加入反应体系中，减少抑制物的影响。
8楼：寵愛認
常见分析角度：
1.无ct值出现
（1）检测荧光信号的步骤有误：一般sg法采用72℃延伸时采集，taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号；
（2）引物或探针降解：可通过page电泳检测其完整性；
（3）模板量不足：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起；
（4）模板降解：避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。
2.ct 值出现过晚（ct>38）
（1）扩增效率低:反应条件不够优化，设计更好的引物或探针、改用三步法 进行反应、适当降低退火温度、增加镁离子浓度等；
（2）pcr各种反应成分的降解或加样量不足，
（3）pcr产物太长：一般采用80-150bp的产物长度。
3.标准曲线线性关系不佳
（1）加样存在误差：使得标准品不呈梯度；
（2）标准品出现降解：应避免标准品反复冻融，或重新制备并稀释标准品；
（3）引物或探针不佳：重新设计更好的引物和探针；
（4）模板中存在抑制物，或模板浓度过高。
4.负对照有信号、溶解曲线不止一个主峰
（1）引物设计不够优化：应避免引物二聚体和发夹结构的出现；
（2）引物浓度不佳：适当降低引物的浓度，并注意上下游引物的浓度配比；
（3）镁离子浓度过高：适当降低镁离子浓度，或选择更合适的mix 试剂盒；
（4）模板有基因组的污染：rna提取过程中避免基因组dna 的引入，或通过引物设计避免非特异扩增。
5.扩增效率低
（1）反应试剂中部分成分特别是荧光染料降解；
（2）反应条件不够优化：可适当降低退火温度或改为三步扩增法；
（3）反应体系中有pcr反应抑制物：一般是加入模板时所引入，应先把模板适度稀释，再加入反应体系中，减少抑制物的影响。
9楼：匿名用户
bioghsc super probe kit在20ul的反应体系里，只要有几个拷贝的dna分子就能被检测出来，具有非常强的抗干扰能力，能够对土壤、粪便、肿瘤和血液**的复杂样本中的靶基因进行检测分析，适合探针法定量pcr检测，试剂以预混液的形式包装，使用极其方便。
如何分析荧光定量pcr实验结果？
10楼：匿名用户
如果是realtime做表达量，用excel的制图，将每个个体的ct值平均数做出柱状图就可以了。如果你还做了标曲的话，就用制图中的散点图看r2值。
其实这些功能做定量pcr的时候电脑程序应该会自动分析才对。
具体情况具体分析。
11楼：尚高原捷珺
pcr是聚合酶链式反应,通过反复的变性退火延伸,达到将微量dna扩增检测的目的。目前实验室里多采用的是实时荧光定量检测,一起可以读取每次循环的荧光强度,并记录达到设定的阈值的循环次数。原始标本含有的dna量愈多,达到阈值循环数愈小。
通过已知浓度的标准品为对照,定量分析样本所含的目的dna量。
实时荧光定量pcr的原理
12楼：匿名用户
荧光定量pcr原理：随着pcr反应的进行，pcr反应产物不断累计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一个荧光强度信号，这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光扩增曲线图。
荧光定量检测根据所使用的标记物不同可分为荧光探针（bioghc elitefast sybr kit）和荧光染料（bioghsc super probe kit）
实时定量pcr扩增曲线怎么分析,实时定量PCR的结果是怎样分析的
1楼 南京金益柏生物科技 可能是模板浓度太低了，都没有达到阈值的，刚开始要做不同浓度梯度的，摸一下模板浓度条件 2楼 桑桑双子的老巢 你好，扩增曲线可以粗略地判断扩增效率。sybr green的双delta ct法要求目的基因和内参的扩增效率基本一致。如果不一致，需要对公式进行修正，部分qpcr仪的...
原子荧光光谱法的说明,简要叙述原子荧光光谱分析法原理及方法的主要特点
1楼 主题 测量待测元素的原子蒸气在一定波长的辐射能激发下发射的荧光强度进行定量分析的方法。原子荧光的波长在紫外 可见光区。气态自由原子吸收特征波长的辐射后，原子的外层电子从基态或低能态跃迁到高能态，约经10 8秒，又跃迁至基态或低能态，同时发射出荧光。 若原子荧光的波长与吸收线波长相同，称为共振荧...
哪些物质可以进行荧光分析，荧光光谱仪测定的条件是什么
1楼 原子荧光光谱的产生 气态自由原子吸收光源的特征辐射后，原子的外层电子跃迁到较高能级，然后又跃迁返回基态或较低能级，同时发射出与原激发波长相同或不同的发射即为原子荧光。原子荧光是光致发光，也是二次发光。当激发光源停止照射之后，再发射过程立即停止。 结构上和原子发射光谱仪差不多，只不过光路系统，发...