1楼：禾鸟
1、实时荧光定量pcr内参：
在不同的pcr反应管中已定量的内参和引物，内参用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内参也被扩增。
在pcr产物中，由于内参与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内参为对照定量待检测模板。
2、选择：内参一般是固定的，可以用实验室之前就有的。或者用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。
扩展资料
（1）内参在传统定量中的作用：
由于传统定量方法都是终点检测，即pcr到达平台期后进行检测，而pcr经过对数期扩增到达平台期时，检测重现性极差。同一个模板在96孔pcr仪上做96次重复实验，所得结果有很大差异，因此无法直接从终点产物量推算出起始模板量。
加入内参后，可部分消除终产物定量所造成的不准确性。但即使如此，传统的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法。
（2）内参对定量pcr的影响：
若在待测样品中加入已知起始拷贝数的内标，则pcr反应变为双重pcr，双重pcr反应中存在两种模板之间的干扰和竞争，尤其当两种模板的起始拷贝数相差比较大时，这种竞争会表现得更为显著。
但由于待测样品的起始拷贝数是未知的，所以无法加入合适数量的已知模板作为内参。也正是这个原因，传统定量方法虽然加入内参，但仍然只是一种半定量的方法。
2楼：小笑聊情感
实时荧光定量pcr内参是一种在dna扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（pcr）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定dna序列进行定量分析的方法。
3楼：匿名用户
内参就是一个表达量在各个组基本保持不变的基因，又叫看家基因，比如常用的gapdh， actin。或者18s rrna也可以。
如果内参表达量一致，说明你pcr的上样量一致，样本的质量也一致。如果出入很大，说明你的样本的浓度或者是质量有问题。测到的目的基因的表达量就不可靠了
4楼：匿名用户
管家基因，具体可以咨询公司，也可以自己看文献，常用的有gapdh，beta-actin和18srna，根据不同的**选用不同的管家基因，比如gapdh就被人诟病做癌细胞基因时超不准。。。
5楼：xueling黄
如果对内参要求很高的话，可以筛选合适内参，有免费的软件，比如genorm，normfinder等
什么是实时荧光定量pcr？有什么作用？请详细说明。
6楼：月光_倾城
好多生物工作做广告做培训噢。你怎么不去看一下。
什么是实时荧光定量pcr，检测指标是什么？
7楼：奔马的香香猪
实时检测pcr扩增，在扩增的指数期对起始模板进行定量，在扩增过程中，荧光信号随着pcr产物的增加而增强。我们实验室使用的bioghsc super probe kit pcr实验检测dna,测得的循环数在28左右，整个pcr过程有4个阶段，基线期---指数增长期---线性增长期---平台期，指数增长期内，pcr有高度重复性，一般的检测指标是看线性图谱的扩增曲线的起跳值（ct值）。
8楼：钱塘书生
你要检测什么东西啊？
实时荧光定量pcr是检测模板dna的拷贝数、基因表达量、基因突变等的
9楼：阅微基因
所谓实时荧光定量pcr技术，是指在pcr反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个pcr进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。参考资料：http:
//baike.baidu.***/view/1020950.htm
实时荧光定量pcr的结果该怎样分析？
10楼：群英斗将
1、如果有标准曲线，按照标准曲线计算；
2、一般都是相对量，则用delta delta ct方法来计算；
3、引物或探针降解：可通过page电泳检测其完整性；
4、模板量不足：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起；
5、看ct值是分析荧光定量pcr最直观的一个数据，ct值一般在35左右就失去参考价值了，平时我们实验室用biodai-pcr荧光定量法测得的扩增曲线的起跳值基本在30左右。
扩展资料：
pvr的循环参数：
1、预变性；
模板dna完全变性与pcr酶的完全激活对pcr能否成功至关重要，加热时间参考试剂说明书。
2、变性步骤；
循环中一般95℃，30秒足以使各种靶dna序列完全变性，可能的情况下可缩短该步骤时间。变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不彻底，易造成扩增失败。
3、引物退火；
退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的tm值为参考，根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对pcr的特异性有较大影响。
4、引物延伸；
引物延伸一般在72℃进行（taq酶最适温度）。但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略延伸时间随扩增片段长短而定，一般推荐在1000bp以上，含pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。
5、循环数；
大多数pcr含25-35循环，过多易产生非特异扩增。
6、最后延伸；
在最后一个循环后，反应在72℃维持10-30分钟．使引物延伸完全，并使单链产物退火成双链。
11楼：南京金益柏生物科技****
用2-△△ ct法算的话，应如何算？ 假设检测a基因，ct分别为（这里记住ct越大，表明相对含量越低） 普通组/test1：28 实验组1/test2：
29 实验组2/test3：30 这时候要设对照了，假设test1为对照组（普通组），当然是以普通组为对照 那么，相对含量为。
12楼：匿名用户
看ct值、起始拷贝数、标准偏差等
如果是sybr做的话，再看下溶解曲线
实时荧光定量pcr之前要不要做个内参基因的筛选
13楼：匿名用户
通常不需要，因为我们已经很清楚每个内参的属性。但还需要看你用定量做什么，比如说做组织表达，或者诱导表达，我们都会偏好于不同的内参。
实时荧光定量pcr和定量pcr有什么区别
1楼 匿名用户 实时荧光是反应荧光数值定量，普通那种是通过条带半定量，现在做半定量的已经很少了，除非是一些验证试验必须要图的 实时荧光定量pcr与普通pcr的区别是什么？结果有何异同？能说明的问题是什么？ 2楼 么破1自我 二者结果相同。都能说明生物体外的特殊dna复制的整个过程的扩增效率和溶解温度...
实时荧光定量pcr的重复性好是什么意思
1楼 为青生物 3个实验重复的ct值的标准差在0 167以内 abi的标准 ，我们一般在0 5以内就可以了 实时荧光定量pcr的重复性好是什么意思 2楼 她恨我如魇丶 实时荧光定量pcr的重复性好有两个含义 一次实验每个孔需要做3 6个重复孔 如果几个孔曲线比较一致 就是重复性好 三次不同的实验结果...
荧光定量PCRTm值代表啥意思,荧光染料定量PCR熔解曲线Tm值过高对结果有什么影响
1楼 满意请采纳哟 tm值和溶解曲线是为了检测pcr反应特异性的， 主峰前的一个小峰可能是非特异性扩增， 也可能是引物二聚体，可以降低引物浓度试试 荧光染料定量pcr熔解曲线tm值过高对结果有什么影响 2楼 谁说我不好哎 用syber green方法做完pcr后，用来判断产物是否相对专一。反应结束后...