1楼:匿名用户
1:原花色素的测定方法(分光光度法)
本方法适用于各种植物组织、器官及其制剂(如葡萄子与松树皮提取物)中原花色素含量的测定。
1. 方法提要
原花色素(也称缩合单宁)是黄烷-3-醇的寡聚体与多聚体,属多酚类化合物。与其他酚类化合物不同,黄烷醇(缩合单宁,单体,双体等)在酸性介质中可与香草醛反应,生成在500nm处有最大吸收的有色物质,可通过比色测其含量。
2. 仪器
分光光度计。
3. 试剂
所用水为去离子水或同等纯度蒸馏水。
(1)香草醛、甲醇、浓盐酸均为分析纯级。
(2)提纯的原花色素或儿茶素。
(3)4%香草醛甲醇液。
(4)标准使用液:将提纯的原花色素溶于蒸馏水,制成1mg/ml储备液,将储备液稀至浓度为1×10-2mg/ml至1mg/ml的标准使用液。标准使用液应于测定当天配制。
如无提纯的原花色素,可用儿茶素代替,配制方法同上。
4. 测定步骤
(1)样品中原花色素的制备:植物材料经4倍体积丙酮+水(7+3,体积比)或者经60%甲醇提取,40℃以下减压蒸馏去除有机溶剂,水相再经乙醚洗涤后定容。
冰冻干燥的固体原花色素制剂,直接溶于水中(先加少量甲醇助溶)制成原花色素液。
原花色素液于5℃下暗环境中保存备用。
(2)样品测定:用锡箔将试管(14mm×20mm)包裹严,仅留管口用于加样。向管内加入试样0.
5ml,再加3.0ml 4%香草醛甲醇液混合,然后加入1.5ml浓盐酸,彻底混匀,室温下显色15min。
也可在暗环境下进行以上操作。最后在500nm处比色。
可按以上操作步骤制得标准曲线(即0.1mg原花色素在500nm处的吸收值为0.55)。
5. 结果计算
计算原花色素量的公式,
原花色素(1×10-3mg)=a500nm÷0.55×100×v
式中 v——试样稀释体积(倍数)。
6. 注释
(1)本方法的检测范围为(5~500)×10-3mg/0.5ml样液。精密度与准确度大于1×10-3mg。
(2)反应试管应用清洁剂浸泡24h,彻底洗涤干净。
(3)进行比色时,用水作空白。
(4)500nm处的od值应控制在3以下。
(5)试样中原花色素含量较高时,应从香草醛存在下所测a500nm值中减去无香草醛时所测值。
(6)显色液应避光放置。
另外还有ph示差法
这个如果想要的话请留下邮箱
或者直接hi我
2楼:匿名用户
花青素含量的测定方法:
原理:花青素是植物体内广泛分布的色素之一,属黄酮类化合物,黄酮类化合物在植物生长中起调节作用,已受到人们的重视。花青素在不同ph条件下,呈现不同的颜色,在酸性中为红色,其颜色深浅与花青素含量成比例,用比色法即可进行测定,方法简单易行。
仪器药品:
721型分类光度计 温箱
台天平 剪刀
烧杯 量筒
0.1 mol/l hcl
操作步骤:
称取材料1g,剪成2梍3mm的碎片,置于烧杯中,加入0.1mol/l hcl 10ml(视花青素含量而增减hcl用量),杯口用称量纸盖紧,以防水分蒸发。置于32℃温箱中,浸渍至少4小时。
而后过滤之,取滤液用分光光度计在波长530nm下读取吸光度,以0.1 mol/l hcl为空白对照,用光径1cm的比色杯。当吸光度a530 为0.
1时的花青素浓度称为1个单位,以比较花青素的相对含量。将测得的吸光度乘上10,用以代表花青素的相对浓度单位。
3楼:匿名用户
1.1.2 仪器和试剂
采用760crt型双光束紫外可见光分光光度计。
试剂选用2%盐酸甲醇溶液:浓盐酸:99%甲醇(2:98)。
1.2 方法
1.2.1 样品处理
将含有花青素的树木鲜叶片去脉剪成1~2 mm碎片,随机取样,准确称量0.2 g,置于50 ml烧杯
中,加人10 ml 2%盐酸甲醇溶液浸泡,杯口用封口膜扎紧以防挥发,置室温避光处浸提2小时,至肉眼
观察叶组织完全变白取出过滤,用2%盐酸甲醇溶液定容至50 ml容量瓶中,于紫外可见分光光度计上
分析。1.2.2 测定
在紫外可见光分光光度计上全波段扫描2%盐酸甲醇溶液浸提叶片的浸提溶液吸收光谱,结果表
明,紫外区最大吸收波长在280砌附近,可见光区域最大吸收波长在500~550砌内[引。其最大吸收波
长在530~535 i]/n处,在此采用波长530 nm条件下定量测定。用2%盐酸甲醇溶液作为空白对照,在紫外可见光分光光度计上,用1 em厚比色皿,在波长530 nln
处测定其吸光度(a)。
用分光光度计测量原花青素时浓度时 用甲醇溶解时我误加了点蒸馏水 这样会对实验结果造成很大影响吗?
4楼:tt简单的幸福
不同浓度的溶液吸光度不同,没办法说明。可以用分光光度计重新测量
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