稳定转染的细胞系可以表达多长时间

1楼:义翘神州加油

这个要看细胞的状态和蛋白表达特点。

推荐了解“主细胞库”“工作细胞库”这两个名词。

如何让一个细胞过度表达某种基因,来观察此基因的作用,瞬时转染和稳定转染都用什么方法

2楼:百替生物

瞬转的方法有多种:磷酸钙转染法,pei转染法,lipofectamine2000试剂盒转染。**递增。

一般容易转染的细胞用前两种方法。而比较难转染的肿瘤细胞等则用lipo2000转染。但用pei和lipo对细胞产生的毒性比用磷酸钙法大。

稳转一般都通过抗性筛选,前面已经回答过了,就不赘述了。

这些转染都是使细胞通过多个质粒。

过表达一般通过western blot来检测。过表达后蛋白表达量比原始细胞有显著升高则说明过表达成功。

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如何构建稳定细胞株?

3楼:心無所依

构建方法:先把质粒整合到染色体上后,用相应的质粒dna中的抗性标志来筛选该细胞系,就行成了稳定表达的细胞株。

细胞株是用单细胞分离培养或通过筛选的方法,由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。原代培养物经首次传代成功后即为细胞系(cell line), 由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。

如果不能继续传代,或传代次数有限, 可称为有限细胞系(finite cell line), 如可以连续培养, 则称为连续细胞系(continuous cell line), 培养50代以上并无限培养下去。

细胞株是通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养细胞。从培养代数来讲,可培养到40-50代。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。

对于人类肿瘤细胞,在体外培养半年以上,生长稳定,并连续传代的即可称为连续性株或系。

4楼:匿名用户

一种是脂质体转染后,单克隆筛选稳定细胞株。另外一种是应用逆转录病毒,慢病毒转染,筛选稳定细胞株。

脂质体转染:在转染24小时后,消化细胞并计数。将细胞种到96孔板,保证每个孔2-3个细胞,这样才能得到单克隆。

待细胞贴壁后,加入抗生素筛选。筛选时间和浓度视细胞而定。一般g418一个星期作用,嘌呤霉素2-3天。

脂质体法筛单克隆时间较长,且效率低,大概只有1%。

病毒转染:先要用包装细胞,一般为293细胞,包装出病毒,再用病毒转染目的细胞。包装病毒视不同类型的病毒而定,一般要3-5天的时间。

包装好的病毒要测滴度,根据滴度决定转染目的细胞的病毒量。转染目的细胞1-2天后加抗生素筛选得到稳定细胞株。

病毒转染得到稳定细胞株的效率高,只是步骤繁琐。

现在很多家公司提供构建稳定细胞株的技术服务,如杭州的波因、南京的凯基等,可以提供各种载体的构建及细胞株的构建整套技术服务。