1楼:温柔的水
用蛋白marker做对比分子量大校 用内参、对照样品做蛋白表达量相对变化分析。
如何确定作western blot的蛋白质大小
2楼:义翘神州加油
用蛋白marker做对比分子量大小。
用内参、对照样品做蛋白表达量相对变化分析。
western blot的实验原理(详细的)
3楼:小silver同学
western blot与baisouthern印迹杂交或northern印迹杂交方du法类似,但western blot采用的是聚zhi丙烯酰胺
dao凝胶电泳,被检回测物是蛋白
答质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。
经过page分离的蛋白质样品(跑page 胶的原理你懂吧~~~),转移到固相载体(硝酸纤维素膜nc膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变(这个过程就是转膜)。
以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。
4楼:
蛋白免疫抄印迹(western blotting 或 immunoblotting)一般由凝胶电泳、袭样品的印迹和
免疫bai学du检测三个部分组成。
第一步是zhi做 sds 聚丙烯dao
酰胺凝胶电泳,使待测样品中的蛋白质按分子量大小在凝胶中分成带。
第二步把凝胶中已分成条带的蛋白质转移到一种固相支持物上, 用得最多的材料是硝酸纤维素膜(nc 膜)和 pvdf 膜, 蛋白转移的方法多用电泳转移 **移电泳) ,它又有半干法和湿法之分,现在大多用湿法。
第三步是用特异性的抗体检测出已经印迹在膜上的所要研究的相应抗原。免疫检测的方法可以是直接的和间接的。现在多用间接免疫酶标的方法,在用特异性的第一抗体杂交结合后,再用酶标的第二抗体(碱性磷酸酶(ap)或辣根过氧化物酶(hrp)标记的抗第一抗体的抗体)杂交结合,再加酶的底物显色或者通过膜上的颜色或 x 光底片上暴光的条带来显示抗原的存在。
该技术被广泛应用于蛋白表达水平的检测中。
为什么western blot结果中,蛋白质检测分子量会与计算大小不同
5楼:匿名用户
western blot检测分子量的结果与理论计算值有差异是非常正常的
事情western blot检测最重要的意义在于目的蛋白在某细胞或组织中表达情况的定性。而目的蛋白检测分子量的大小取决于目的蛋白在sds-page的结果,也就是说如果目的蛋白在sds-page上检测结果是分子量偏大的,那么在western blot转膜后也会是偏大的,这和目的蛋白的结构(糖基化修饰),电泳迁移率,缓冲液组成等等都有关系。所以只是一个相对的分子量的结果。
要精确检测目的蛋白的分子量结果需要做质谱(ms)检测
怎样测量一棵大树的树干的粗细,如何测量一棵大树的树干直径？（写出所需器材及实验步骤和相应表达式
1楼 可以用卷尺绕树干围一圈，测量出树干的圆周长，再除3 14即是树干的直径。 2楼 匿名用户 测量一棵大树树干的粗细，要在离地面一米以上的高度测量，比较通俗的做法是按照一个人的身高在胸部的高度做测量。否则会受到树头 树根的影响出现明显的误差。 如何测量一棵大树的树干直径？ 写出所需器材及实验步骤和...