1楼:义翘神州加油
可能是蛋白发生了降解,在表达后期、纯化前期需要加入蛋白酶抑制剂。
蛋白表达纯化实验中,如原核表达纯化,蛋白总是包涵体该怎么办?请大神帮忙解答啊,,
2楼:血薇夕影之歌
原核蛋白表达纯bai化是du很容易形成包涵体的zhi,在现阶段可dao以采用俩种版手段,一是预防,二是复权性。
先说“预防”,预防就是指在蛋白过表达形成包涵体前,对表达环境进行优化的一些手段,来降低重组蛋白合成的速率。例如:密码子优化,表达温度的选择,与分子伴侣或折叠酶共表达等等;而蛋白质的复性则是指:
在变性条件不剧烈,变性蛋白质内部结构变化不大时,除去变性因素,在适当条件下变性蛋白质可恢复其天然构象和生物活性的方法。
这俩种方法说起来都比较麻烦,涉及的知识点和概念比较多,建议先看一些资料比较好。
如果觉得回答的不错,请采纳,谢谢!
原核表达蛋白降解问题 20
3楼:匿名用户
iptg induction and his-tag protein purification?
问学长姊比较快
求助:关于原核表达包涵体蛋白纯化
4楼:匿名用户
蛋白质表达、分离、纯化可以:(1)探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理;(2)供作结构与功能的研究;(3)作为催化剂、营养剂等。
实验方法原理
携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌bl21中,在 37°C,iptg诱导下,超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白,该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸(nta)使镍离子(ni2+)固相化的层析介质加以提纯,实为金属熬合亲和层析(mcac)。蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。
实验材料
大肠杆菌bl21
试剂、试剂盒
lb液体培养基氨苄青霉素washing bufferelution bufferiptg蒸馏水胰蛋白胨酵母粉氯化钠
仪器、耗材
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