1楼:匿名用户
荧光定copy量pcr所使用的荧光化学可分为两种:荧光探针和荧光染料。
原理: pcr扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;pcr扩增时,taq酶的5’端-3’端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条dna链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与pcr产物形成完全同步。
2楼:匿名用户
荧光定量pcr实验详细信息。
实时荧光定量pcr的原理
3楼:匿名用户
荧光定量pcr原理:随着pcr反应的进行,pcr反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。
荧光定量检测根据所使用的标记物不同可分为荧光探针(bioghc elitefast sybr kit)和荧光染料(bioghsc super probe kit)
4楼:匿名用户
所谓的实时荧光定量 pcr 就是 通过对 pcr 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。其原理是在实时荧光定量 pcr 反应中,引入了一种荧光化学物质,随着
pcr 反应的进行, pcr 反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。
实时荧光定量pcr技术原理是什么?
5楼:匿名用户
聚合酶链式反应 ( pcr) 可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增 。在扩增反应结束之后,我们可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析,也可以通过 放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析 。无论定性还是定量分析,分析的都是 pcr 终产物。
但是在许多情况下,我们所感兴趣的是未经 pcr 信号放大之前的起始模板量。例如我们想知道某一转基因动植物转基因的拷贝数或者某一特定基因在特定组织中的表达量。在这种需求下荧光定量 pcr 技术应运而生。
所谓的实时荧光定量 pcr 就是 通过对 pcr 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量 pcr 反应中,引入了一种荧光化学物质,随着 pcr 反应的进行, pcr 反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。
生物帮上面有相关知识, http://****bio1000.
***/zt/cell/201378.html 动物细胞培养, 植物细胞培养, es细胞(胚胎干细胞)培养, 细胞悬浮培养, 贴壁细胞培养。
6楼:俎新月武铃
所谓的实时荧光定量
pcr就是
通过对pcr
扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。其原理是在实时荧光定量
pcr反应中,引入了一种荧光化学物质,随着pcr反应的进行,
pcr反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。
实时定量pcr基本原理如何?
7楼:匿名用户
实时pcr(real—time polymerase chain reaction)又称荧光定量pcr或taqman pcr,是美国pe公司(perkin elmer)于1995年研制出的一种新的核酸定量技术。该技术在常规pcr基础上运用荧光能量传递(fluorescence resonance energy transfer,fret)技术,加入荧光标记探针,巧妙地把核算扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一起,借助于荧光信号来检测pcr产物。一方面提高了灵敏度,另一方面还可以做到pcr每循环一次就收集一个数据,建立实时扩增曲线,准确地确定ct值,从而根据ct值确定起始dna的拷贝数,做到真正意义上的dna定量。
另外由于ct值是一个完全客观的参数,ct值越小,模版dna的起始拷贝数越小。因此,利用ct值确定dna拷贝数实时pcr方法比普通终点定量方法更加准确。
实时荧光定量pcr技术原理是什么?
8楼:鸽子最纯
聚合酶链式反应 ( pcr) 可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增 。在扩增反应结束之后,版我们可以通过凝胶电泳权的方法对扩增产物进行定性的分析,也可以通过 放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析 。无论定性还是定量分析,分析的都是 pcr 终产物。
但是在许多情况下,我们所感兴趣的是未经 pcr 信号放大之前的起始模板量。例如我们想知道某一转基因动植物转基因的拷贝数或者某一特定基因在特定组织中的表达量。在这种需求下荧光定量 pcr 技术应运而生。
所谓的实时荧光定量 pcr 就是 通过对 pcr 扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量 pcr 反应中,引入了一种荧光化学物质,随着 pcr 反应的进行, pcr 反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。
实时荧光定量pcr与普通pcr的区别是什么?结果有何异同?能说明的问题是什么?
9楼:么破1自我
二者结果相同。都能说明生物体外的特殊dna复制的整个过程的扩增效率和溶解温度情况。
区别:1、二者系统组成不同
荧光定量pcr仪比普通的pcr仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统。
2、二者原理不同
荧光定量pcr实时监测与dna结合的荧光染料激发的荧光,普通ocr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量。
3、二者反应要求不同
荧光定量pcr对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp,普通pcr可以扩增长点的片段。
4、二者应用不同
荧光定量pcr主要是用来定量分析和确定基因转录水平的,普通的pcr仪是做定性分析和扩增基因片段,定量pcr仪可以做普通pcr仪的工作,反之不行。
5、二者测量成本不同
定量pcr仪**较为昂贵,普通的基因扩增仪(pcr仪)只能够定性地分析是否存在目标片段。但是**要低很多,而且运行成本也要低很多。
实时荧光定量pcr技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。
10楼:匿名用户
原理不同:荧光定量pcr实时监
测与dna结合的荧光染料激发的荧光;普通pcr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量,一般是紫外光。
反应要求:荧光定量对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp;普通定量可以扩增长点的片段。如果不需要检测产物分子量大小,荧光定量可以不进行电泳就对产物进行定量分析,普通pcr必须电泳。
结果:荧光定量可以实现精确定量,普通pcr则不行。荧光定量体现可以看到整个扩增过程,可以看到扩增效率,溶解温度,直接得到的标准曲线等,这些是普通pcr无法实现的。
如果还不清楚建议去丁香园等**逛逛,希望可以帮到你
11楼:匿名用户
所谓实时荧光定量pcr技术,是指在pcr反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个pcr进程,最后通过标准曲线对未知模板进行“定量分析”的方法。
记住,实时荧光定量是定量分析
12楼:匿名用户
荧光pcr是为了测量mrna表达量的 普通pcr是为了扩增目的片段的
13楼:匿名用户
荧光定量是定量的,普通pcr是定性的,结果一个是说明含有多少,另一个说明有还是没有,前者更精确一点
实时荧光定量pcr的重复性好是什么意思
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