1楼:匿名用户
可能是保藏菌种出了问题,带有质粒的重组菌甘油浓度超过一定程度会影响质粒稳定性。可以重新做质粒转化提高表达量
另外就是表达的条件控制了,发酵过程中可能会因为时间,温度等等条件变化影响到蛋白的表达
原核表达菌之前可以表达蛋白,为什么放一段时间不表达蛋白了
2楼:匿名用户
应该是原核表达宿主菌比较准确
原核表达宿主菌之前可以表达蛋白,放一段时间不表达蛋白原因很多首先要确认其他条件是否也有改变,比如其他基因,质粒载体,表达条件等等原核表达宿主菌保存条件没有控制好可能导致宿主菌退化,被污染等等,结果就造成蛋白表达变少或者不表达。
毕赤酵母蛋白不表达是什么原因?
3楼:匿名用户
1、 菌株:用gs115表达不出蛋白,换km71h后,大部分克隆能表达。
2、温度:在28度和室温下诱导表达,表达水平可能都不低。
3、ph:手册上用6.0,ph提高到6.
8,不表达的蛋白可能就表达出来。bmmy的ph7.0-7.
5比较合适。国内外做的最好的rhsa,最适ph大概5-6左右。ph3的时候yeast和peptone好像会沉淀的,可以用磷酸和磷酸二氢钾调,具体比例自己去试试。
sirna酶: http://product.bio1000.***/116052/ 生物帮上面有这方面的资料。
做蛋白的原核表达时为什么总是不稳定,明明上次已经有表达了,现在又老做不出来?
4楼:匿名用户
这个很正常,我也碰到过,有时候是找不出原因的,只能再转化,设置重新开始,筛选稳定的了。
5楼:匿名用户
有的时候菌株也会有影响的
原来表达目的蛋白的菌株现在怎么不表达了
6楼:匿名用户
诱导表达没有目的蛋白产生原因无非两种 一是诱导条件不适合目的蛋白的表达,可通过改变培养基,温度,诱导剂等条件重新摸索出合适的诱导条件。 二是目的蛋白的菌种有问题,可通过涂板挑选单克隆菌落重新培养,或者质粒重新转化表达菌株等方法优化菌种。
真核细胞转染后蛋白不表达是怎么回事
7楼:阿鲁巴星人
转染效率可能太低
启动子在宿主细胞中是否合适
检测蛋白的方法是否得当
你的construction是否有问题
pet28a做表达载体,蛋白就是不表达,求助
8楼:匿名用户
蛋白不表达的原因很多,有载体的原因,但肯不定不完全是载体的原因。
可以试试不同的表达菌株,诱导浓度,诱导温度,诱导时间等等。
蛋白未表达有什么原因
9楼:匿名用户
被抑制没有rna聚合酶上去参与转录
10楼:旖
在转录或翻译过程中出现差错。
我最近构建真核表达质粒,测序后序列是正确但的,但就是不表达。表达蛋白抗体和标签抗体都检测不到。
11楼:匿名用户
你再多挑些斑试试,真核质粒不表达,很多时候是因为转染效率太低。我们这有挑了将近100个才找到表达的
12楼:匿名用户
其实密码子atg前面的碱基是什么?
13楼:匿名用户
先做个real time看有没有转录呗
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