做药敏试验需要什么,怎么做药敏实验

2020-11-22 22:57:06 字数 5199 阅读 7014

1楼:平哥看

药敏试验根据美国临床标准委员会(nccls)推荐的k-b琼脂法进行,药敏纸片选择中国生物制品鉴定所药敏纸片,试验所选择药物必须包括下列抗生素:氨苄西林(amp),阿莫西林/克拉维酸(amc),头孢噻吩(cft),头孢噻肟(ctx),庆大霉素(gen),萘啶酸(nal),环丙沙星(cip),四环素(tbt),利福平(***),复方新诺明(**z)。药敏结果判定标准按照nccls手册2005版。

1. 操作方法:

(1)将待检菌接种于普通营养琼脂平板,37℃培养16~18小时,然后挑取普通营养琼脂平板上的纯培养菌落,悬于3ml生理盐水中,混匀后与菌液比浊管比浊。以有黑字的白纸为背景,调整浊度与比浊管(0.5麦氏单位)相同。

(2)用无菌棉拭子蘸取菌液,在管壁上挤压去掉多余菌液。用棉拭子涂布整个m-h培养基表面,反复几次,每次将平板旋转60度,最后沿周边绕两圈,保证涂均匀。

(3)待平板上的水分被琼脂完全吸收后再贴纸片。用无菌镊子取药敏纸片贴在平板表面,纸片一贴就不可再拿起。每个平板贴5张纸片,每张纸片间距不少于24mm,纸片中心距平皿边缘不少于15mm。

在菌接种后15分钟内贴完纸片。

(4)将平板反转,孵育18~24小时后取出,用游标卡尺测量抑菌圈直径,从平板背面测量最接近的整数毫米数并记录(附表6)。抑菌环的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。有的菌株可出现蔓延生长,进入抑菌环,磺胺药在抑菌环内出现轻微生长,这些都不作为抑菌环的边缘。

结果判断依据鉴定所药敏纸片判定标准。

(5)每次药敏试验必须用atcc 25922大肠杆菌做质控。只有当质控菌株的抑菌圈直径在允许范围内测试菌株的结果才可以报告。atcc 25922的结果必须与测试菌株同时记录和报告在附表6中。

0.5麦氏比浊管配制方法:

0.048m bacl2 (1.17% w/v bacl2 . 2h2o) 0.5ml

0.36n h2so4 (1%, v/v) 99.5ml

将二液混合,置螺口试管中,放室温暗处保存。用前混匀。有效期为6个月。

2. 注意事项:

(1) 制备mh琼脂平板应用直径90mm平皿,在水平的实验台上倾注。琼脂厚为4±0.5mm(约25-30ml培养基),琼脂凝固后塑料包装放4℃保存,在5 日内用完,使用前应在37℃培养箱烤干平皿表面水滴。

倾注平皿前应用ph计测ph值是否正确(ph应为7.3)。ph过低会导致氨基糖苷类,大环内酯类失效,而青霉素活力增强。

(2) 药敏纸片长期储存应于-20℃,日常使用的小量纸片可放在4℃,但应至于含干燥剂的密封容器内。使用时从低温取出后,放置平衡到室温后才可打开,用完后应立即将纸片放回冰箱内的密封容器内。 过期纸片不能使用, 应弃去。

(3) 不稳定药物如亚胺培南, 头孢克洛, 克拉维酸复合药等, 应冷冻保存, 最好在-40 ℃以下。

(4) 保证质控菌株不变异的简便方法,将新得到的冻干菌株接种含血的m-h平板复活。然后每株细菌接种10支高层琼脂管,放置冰箱保存。每月取出一支,传出细菌供常规用。

待用剩至最后一支,可传种在m-h平板上,再接种一批高层琼脂管备用。如此可保证原始菌种永不接触抗菌素。

3.质量控制

质量控制方法 是用与常规实验相同的操作方法,测定质控菌株的抑菌环。应使用新鲜传代的菌种。接种菌液的涂布方法等均同常规操作,测定的抗菌素种类也应与常规测定的种类相同。

怎么做药敏实验

2楼:匿名用户

药敏试验根据美国临床标准委员会(nccls)推荐的k-b琼脂法进行,药敏纸片选择中国生物制品鉴定所药敏纸片,试验所选择药物必须包括下列抗生素:氨苄西林(amp),阿莫西林/克拉维酸(amc),头孢噻吩(cft),头孢噻肟(ctx),庆大霉素(gen),萘啶酸(nal),环丙沙星(cip),四环素(tbt),利福平(***),复方新诺明(**z)。药敏结果判定标准按照nccls手册2005版。

1. 操作方法:

(1)将待检菌接种于普通营养琼脂平板,37℃培养16~18小时,然后挑取普通营养琼脂平板上的纯培养菌落,悬于3ml生理盐水中,混匀后与菌液比浊管比浊。以有黑字的白纸为背景,调整浊度与比浊管(0.5麦氏单位)相同。

(2)用无菌棉拭子蘸取菌液,在管壁上挤压去掉多余菌液。用棉拭子涂布整个m-h培养基表面,反复几次,每次将平板旋转60度,最后沿周边绕两圈,保证涂均匀。

(3)待平板上的水分被琼脂完全吸收后再贴纸片。用无菌镊子取药敏纸片贴在平板表面,纸片一贴就不可再拿起。每个平板贴5张纸片,每张纸片间距不少于24mm,纸片中心距平皿边缘不少于15mm。

在菌接种后15分钟内贴完纸片。

(4)将平板反转,孵育18~24小时后取出,用游标卡尺测量抑菌圈直径,从平板背面测量最接近的整数毫米数并记录(附表6)。抑菌环的边缘以肉眼见不到细菌明显生长为限。有的菌株可出现蔓延生长,进入抑菌环,磺胺药在抑菌环内出现轻微生长,这些都不作为抑菌环的边缘。

结果判断依据鉴定所药敏纸片判定标准。

(5)每次药敏试验必须用atcc 25922大肠杆菌做质控。只有当质控菌株的抑菌圈直径在允许范围内测试菌株的结果才可以报告。atcc 25922的结果必须与测试菌株同时记录和报告在附表6中。

0.5麦氏比浊管配制方法:

0.048m bacl2 (1.17% w/v bacl2 . 2h2o) 0.5ml

0.36n h2so4 (1%, v/v) 99.5ml

将二液混合,置螺口试管中,放室温暗处保存。用前混匀。有效期为6个月。

2. 注意事项:

(1) 制备mh琼脂平板应用直径90mm平皿,在水平的实验台上倾注。琼脂厚为4±0.5mm(约25-30ml培养基),琼脂凝固后塑料包装放4℃保存,在5 日内用完,使用前应在37℃培养箱烤干平皿表面水滴。

倾注平皿前应用ph计测ph值是否正确(ph应为7.3)。ph过低会导致氨基糖苷类,大环内酯类失效,而青霉素活力增强。

(2) 药敏纸片长期储存应于-20℃,日常使用的小量纸片可放在4℃,但应至于含干燥剂的密封容器内。使用时从低温取出后,放置平衡到室温后才可打开,用完后应立即将纸片放回冰箱内的密封容器内。 过期纸片不能使用, 应弃去。

(3) 不稳定药物如亚胺培南, 头孢克洛, 克拉维酸复合药等, 应冷冻保存, 最好在-40 ℃以下。

(4) 保证质控菌株不变异的简便方法,将新得到的冻干菌株接种含血的m-h平板复活。然后每株细菌接种10支高层琼脂管,放置冰箱保存。每月取出一支,传出细菌供常规用。

待用剩至最后一支,可传种在m-h平板上,再接种一批高层琼脂管备用。如此可保证原始菌种永不接触抗菌素。

3.质量控制

质量控制方法 是用与常规实验相同的操作方法,测定质控菌株的抑菌环。应使用新鲜传代的菌种。接种菌液的涂布方法等均同常规操作,测定的抗菌素种类也应与常规测定的种类相同。

3楼:毕芙笪庚

药敏试验可分为:药敏纸片法,试管法,平皿法等。

药敏纸片法:就是买厂家的药敏纸片(也可自己做),自己制备培养基,然后采集病料涂板,通过抑菌圈的大小判断药物对病原菌的敏感性。

试管法:就是自己配制不同药物的各中浓度的药液,采集病料接种,通过试管中细菌的生长浊度判断细菌的生长。

平皿法与试管法差不多,主要用在实验室。

4楼:东郭德刀婉

药敏试验从严格要求看,

有不少要求的.

具体可参考:

临床细菌学实验室操作指南

第二版who

人民卫生出版社2006.6

如何做药敏试验

5楼:匿名用户

用药敏实验进行药物敏感度的测定,以便准确有效的利用药物进行**。但由于药敏试验要求比较严格,条件比较高,仅仅在大中专院校或科研单位有条件的可以操作,一些养殖厂或一些门诊难有条件进行药敏试验的操作。针对这个问题,农业部动物检疫所青岛易邦生物工程****动物疫病诊疗中心经过几年的总结和实践,逐渐总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法。

目前,临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法,稀释法(包括琼脂和肉汤稀释法),抗生素浓度梯度法(e-test法),和自动化仪器等。

纸片扩散法

该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上,纸片中的药物在琼脂中扩散,随着扩散距离的增加,抗菌药物的浓度呈对数减少,从而在纸片的周围形成浓度梯度。同时,纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长,而抑菌范围外的菌株则可以生长,从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈,不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同,抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度,并与该药物对测试菌的mic呈负相关。

稀释法稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性,分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。实验时,抗菌药物的浓度通常经过倍比(lg2)稀释,能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度(mic),一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点(敏感、中介和耐药)的浓度,同时也应该包含质控参考菌株的mic.

在何种情况下需要进行药敏试验?

6楼:中国农业出版社

药敏试验是指在临床防治实际中,针对那些不明特性的病原菌,或针对那些血清型多样且容易变异的病原菌,如大肠杆菌、沙门氏菌、金葡萄球菌等,为了筛选对其防治有效的药物而采用的药物敏感试验,选出抑菌力强(即病原菌对此药物高度敏感)的最佳**药物,这样防**效好,动物**快。

药敏试验的具体做法是将预先浸有定量浓度的抗菌药物试纸,放在涂有被检细菌的培养基平板上,37℃培养24小时,观察培养基上的抑菌圈,根据抑菌圈的有无和大小来确定该菌对该药的敏感度。

怎样做药敏试验

7楼:冰峰蓝雨

一、 纸片扩散法

该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上,纸片中的药物在琼脂中扩散,随着扩散距离的增加,抗菌药物的浓度呈对数减少,从而在纸片的周围形成浓度梯度。同时,纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长,二抑菌范围外的菌株则可以生长,从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈,不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同,抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度,并与该药物对测试菌的mic呈负相关。

二、稀释法

稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性,分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。实验时,抗菌药物的浓度通常经过倍比(lg2)稀释,能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度(mic),一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点(敏感、中介和耐药)的浓度,同时也应该包含质控参考菌株的mic. 2.

1 琼脂稀释法 首先制备含抗菌药物的琼脂稀释平板。再接种待测菌株,然后是结果判读。 2.

2 肉汤稀释法

三、抗生素浓度梯度法

四、自动化仪器法

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