1楼:uu别惹我
复性:是指变性的蛋白质在使
2楼:易君真荡
蛋白质复性的最大问题,是在复性过程中形成中间体和多聚体,中间体阻碍作用大的使蛋白质正确折叠困难,复性就困难;阻碍小或无阻碍的容易复性。降低蛋白浓度可以减少中间体形成提高复性率。减少中间体的形成,可选用添加小分子物质,又叫分子伴侣,如精氨酸、甘油、peg等小分子物质帮助蛋白质正确折叠。
避免多聚体的形成可以加入氧化还原剂(dtt、-me、还原型谷胱甘肽、氧化型谷胱甘肽、cu2+等),帮助蛋白质复性中二硫键的正确配对,减少错配率。
复性缓冲液的ph要远离等电点,离子强度不易过高,10-50mmol/l,离子强度太高蛋白质易发生沉淀,也不利于离子交换层析的分离;复性液温度不易过高在4℃-10℃较合适对于耐热蛋白也可以室温复性。复性时间,以天然表达的重组蛋白复性应在6hr以上,需要进行酶切的融和表达重组蛋白,至少要复性1hr以上,方可进行进一步的酶切。
复性方式:常用的有透析复性和稀释复性。透析复性适用于小样品制备;对于大样品制备,采用稀释复性法简便、实用。
一般包含体蛋白的复性浓度不易过大,不同的蛋白质有所区别,一般掌握在100-200ug/ml较合适,蛋白浓度太稀使纯化流程过长,蛋白浓度太浓,蛋白质复性不完全,会直接影响蛋白的**率。直接稀释有困难的,也可以试用分段稀释法。
蛋白质的复性是重组蛋白纯化中最关键和最复杂的问题。蛋白质的性质不同,所处的环境不同,使其复性条件大不相同。任何一个蛋白质都有一个最佳的复性条件,这个最佳条件的选择是靠大量的实验来完成的。
只有选择到了合适的复性缓冲液,使蛋白得以正确折叠,才能使进一步的层析分离得以顺利完成。
什么是蛋白质的复性和变性
3楼:喵喵喵啊
在变性条件不剧烈,变性蛋白质内部结构变化不大时,除去变性因素,在适当条件下变性蛋白质可恢复其天然构象和生物活性,这种现象称为蛋白质的复性(renaturation)。
蛋白质变性(protein denaturation)是指蛋白质分子中的酰氧原子核外电子,受质子的影响,向质子移动,相邻的碳原子核外电子向氧移动,相对裸露的碳原子核,被亲核加成,使分子变大,流动性变差。
蛋白质因受某些物理或化学因素的影响,分子的空间构象被破坏,从而导致其理化性质发生改变并失去原有的生物学活性的现象称为蛋白质的变性作用。变性作用并不引起蛋白质一级结构的破坏,而是二级结构及以上的高级结构的破坏,变性后的蛋白质称为变性蛋白。
扩展资料
蛋白质变性后,分子结构松散,不能形成结晶,易被蛋白酶水解。蛋白质的变性作用主要是由于蛋白质分子内部的结构被破坏。
天然蛋白质的空间结构是通过氢键等次级键维持的,而变性后次级键被破坏,蛋白质分子就从原来有序的卷曲的紧密结构变为无序的松散的伸展状结构(但一级结构并未改变)。
所以,原来处于分子内部的疏水基团大量暴露在分子表面,而亲水基团在表面的分布则相对减少,至使蛋白质颗粒不能与水相溶而失去水膜,很容易引起分子间相互碰撞而聚集沉淀。
4楼:勇敢一点
蛋白质变性(protein denaturation)是指蛋白质在某些物理和化学因素作用下其特定的空间构象被改变,从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失,这种现象称为蛋白质变性。
如果变性条件剧烈持久,蛋白质的变性是不可逆的。如果变性条件不剧烈,这种变性作用是可逆的,说明蛋白质分子内部结构的变化不大。这时,如果除去变性因素,在适当条件下变性蛋白质可恢复其天然构象和生物活性,这种现象称为蛋白质的复性(renaturation)。
5楼:倒离
这个问题可以从生物和化学两个角度去讲。
从生物上讲,楼主要注意的是酶,绝大多数酶是蛋白质,这里有个易错点或者说要点,就是,酶高温会变性,而低温不会变性,只是活性受到抑制,这常考,得非常注意。
广义上讲,也就从化学讲,对于所有蛋白质,刚才说的现象的原因就是高温会使蛋白质的结构改变,因此蛋白质就失去功能,这是不可逆的过程,而低温不会引起结构改变。能使蛋白质变性,也就是使其结构改变,彻底失去功能的除了高温外还有一个就是重金属盐或重金属离子,什么铜啊银啊铅啊等等,这些重金属组成的化合物如cuso4等都会使蛋白质失去活性,因此如果误服重金属盐会破坏人体组织细胞,重则性命垂危,要及时吃下其他富含蛋白质的东西缓解,如牛奶。这里又有易错点,就是口服硫酸钡(baso4),或者叫钡餐,是不会中毒的,因为这东西难溶,即使在胃酸作用下也不会溶解,因此不会危害人体,所以医院常用它做显影剂,吃下去后用x光照胃部就能得到更清晰的影像。
以上都是经验之谈,楼主体谅我的辛苦,给分吧
6楼:光之翼特级号
变形好说,就是蛋白质失去其生理活性,加热,紫外线照射,酸碱等都可以是蛋白质变性。
复性一般是指蛋白质的盐析现象,蛋白质在低浓度盐溶液中溶解(一般至饱和),然后加入可溶性盐类(无毒,一般是钠盐),然后蛋白质在盐溶液中结晶析出,但加入水后,蛋白质又溶解。说明加入盐只是使蛋白质在盐溶液中溶解度降低,但仍保持其生理活性。还有一种现象,就是把冷却后的蛋白质在回温,其生理活性也不变。
这也叫复性,总之就是蛋白质生理活性下降,但恢复条件其生理活性又恢复的现象就叫蛋白质的复性。
7楼:迷上天蝎
蛋白质的变性就是天然蛋白质在物理化学因素的作用下,的空间构象改变、高级结构被破坏,变成一级结构,不具备生物学功能了。
蛋白质复性就是去除变性因素后,蛋白质恢复其空间构象,从而恢复生物学功能的现象。
8楼:momo韬光养晦
变性,就是生鸡蛋煮成熟鸡蛋。复性,是蛋白质变性后,去除了使之变性的因素,又能恢复原性质。
何为蛋白质的变性和复性作用
9楼:妖孽東
变性作用是蛋白质受物理或化学因素的影响,改变其分子内部结构和性质的作用。一般认为蛋白质的二级结构和**结构有了改变或遭到破坏,都是变性的结果。能使蛋白质变性的化学方法有加强酸、强碱、重金属盐、尿素、丙酮等;能使蛋白质变性的物理方法有加热(高温)、紫外线及x射线照射、超声波、剧烈振荡或搅拌等。
复性作用:在变性条件不剧烈,变性蛋白质内部结构变化不大时,除去变性因素,在适当条件下变性蛋白质可恢复其天然构象和生物活性,这种现象称为蛋白质的复性。
10楼:景怀雨酒书
这是高中知识吧~蛋
白质变性是指蛋白质在某些物理和化学因素作用下其特定的空间构象被改变,从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失,这种现象称为蛋白质变性.
如果变性条件剧烈持久,蛋白质的变性是不可逆的.如果变性条件不剧烈,这种变性作用是可逆的,说明蛋白质分子内部结构的变化不大.这时,如果除去变性因素,在适当条件下变性蛋白质可恢复其天然构象和生物活性,这种现象称为蛋白质的复性
11楼:卜爱景养女
蛋白质变性:指蛋白质在某些物理和化学因素作用下其特定的空间构象被改变,从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失,这种现象称为蛋白质变性。
蛋白质的复性:如果变性条件剧烈持久,蛋白质的变性是不可逆的。如果变性条件不剧烈,这种变性作用是可逆的,说明蛋白质分子内部结构的变化不大。
这时,如果除去变性因素,在适当条件下变性蛋白质可恢复其天然构象和生物活性,这种现象称为蛋白质的复性。
蛋白质复性的实际意义
12楼:庚的灵儿
所谓复性是指恢复活性。
即很多蛋白质在表达和合成的过程中,从一级结构是氨基酸链折叠为二,三,四级立体结构时,由于折叠速度,iptg诱导剂的量和蛋白质动力学影响因素等等不同原因有可能造成蛋白质错误折叠或形成不溶解的包涵体,使本来有活性的蛋白质失去活性。复性一般首先采用变性剂把蛋白质打开成为氨基酸链,继而在温和的环境下经过稀释和透析等使蛋白质重新折叠,由于蛋白质动力学的影响,蛋白质会自认折叠为这种蛋白质固有的结构,从而重新折叠成有活性的蛋白质。这是复性的实际意义。
蛋白质的复性与dna的复性有何不同?请说的具体点
13楼:***
一般来说,蛋白质复性比dna要难很多。
蛋白要恢复二级、**甚至四级结构,dna只需要恢复二级结构(双螺旋)。
蛋白质的构件有二十种,而且性质各异;dna只有四种构件,性质相近。
dna的高级结构是简单重复的,线性的;蛋白质是三维的,复杂多变。可能还需要前体、分子伴侣等。
所以,按一般实验室复性的要求来说,蛋白质复性困难,没有特定程序可以依照。
不过,如果把染色体整个解聚、变性,恐怕就难以复性了--实在太大了。
14楼:狂飞阳
蛋白质复性是指恢复原有的高级结构(变性是空间结构改变,失去活性)
dna复性是指碱基重新互补配对形成双链(变性是双链打开)
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