1楼:匿名用户
其实这个有几个制约因素!首先是引物,要是引物设计的比较好专扩增效率高pcr自然能扩得漂属亮。还有一个最最重要的就是模板,首先要保证模板的纯度,第二个是要保证模板中目的基因的含量!
还有一个就是酶,pcr中使用酶是根据不同需求使用不同的酶的!
影响pcr反应效率的因素有哪些?如何有效地提高pcr反应的效率
2楼:g年轮
模板纯来度,有较多蛋白或其自他杂质时,会一bai定程度影响pcr效率;
模板量du,过高zhi的模板量反而会降低pcr效率和特异性;
引物,引物的长度需要再效率和特异性间获得优化,其次要控制引物gc含量;
聚合酶,要考虑酶的保真率和速度;
mg离子浓度,mg离子浓度过高会降低特异性,浓度过低会降低效dao率;
退火温度:退火温度低,效率会高,但特异性降低;退火温度高,效率降低,但特异性会提高;需优化.
影响pcr扩增效率的因素有哪些
3楼:匿名用户
主要考bai虑是否在模板稀释过程中出现问du题,是否存在zhi高浓度样品污染低浓
dao度样品的情况。具回体的要看了你的扩增
答曲线、溶解曲线以及标准曲线的结果才能判断。其次题主提到的两个问题1、模板浓度过高会抑制pcr反应,可能会导致扩增效率降低。但同时可能会出现非特异性扩增导致结果的ct值不可信,最终导致扩增效率不可信。
2、在一定范围内提高退火温度不会太影响扩增效率。
如何有效的提高pcr反应的效率
4楼:匿名用户
1,科学设计引物,注意末端匹配度,无不必要互补,cg含量,酶切位点等。
2,增加循环数
3,提纯模板
4,用好的taq酶
5,降低退火温度(可能降低特异性)
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