1楼：匿名用户
1．细菌的生长状态：实验中应密切注视细菌的生长状态和密度，尽量使用对数生长期的细胞（一般通过检测od600来控制。dh5α菌株 od600为 0.
5 时细胞密度是 5 × 107/ml ）；
2．所有操作均应在无菌条件和冰上进行；
3．经 cacl2处理的细胞，在低温条件下，一定的时间内转化率随时间的推移而增加， 24小时达到最高，之后转化率再下降（这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的）；
4．化合物及无机离子的影响：在 ca2+的基础上联合其他二价金属离子（如 mn2+或 co2+）、 dmso 或还原剂等物质处理细菌，可使转化效率大大提高,一般来讲 cacl2 /cocl2法及二甲基亚砜(dmso)等可以提高转化率很多倍(100-1000)；
5．所使用的器皿必须干净。迹量的去污剂或其它化学物质的存在可能大大降低细菌的转化效率；
6．质粒的大小及构型的影响：用于转化的应主要是超螺旋的 dna ；
影响感受态细胞转化效率的因素有哪些
2楼：匿名用户
1.感受态细胞的质量，比如超级感受态比普通感受态转化效率高很多；2.质粒浓度及质量，连接产物因为质粒浓度低，纯度低转化效率比纯的质粒低很多；3.
转化条件，如热激冷激的温度时间等；4.活化培养的条件，soc培养基优于lb培养基；5.涂布用的培养基及抗生素浓度等。
要提高质粒的转化效率, 实验中要考虑几个重要因素？求大神赐教
3楼：匿名用户
一般要考虑以下几点 1. 细胞生长状态和密度: 不要用经过多次转接或储于4℃的培养菌，最好从－70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。
细胞生长密度以刚进入对数生长期时为好，可通过监测培养液的od600 来控制。dh5α菌株的od600 为0.5时,细胞密度在5×107 个/ml左右(不同的菌株情况有所不同),这时比较合适。
密度过高或不足均会影响转化效率.
2. 质粒的质量和浓度: 用于转化的质粒dna应主要是超螺旋态dna(cccdna)。
转化效率与外源dna的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源dna的量过多或体积过大时,转化效率就会降低。1ng的cccdna即可使50μl 的感受态细胞达到饱和。一般情况下,dna溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5％。
3. 试剂的质量: 所用的试剂,如cacl2 等均需是最高纯度的(gr.或ar.),并用超纯水配制,最好分装保存于干燥的冷暗处。
4. 防止杂菌和杂dna的污染：整个操作过程均应在无菌条件下进行, 所用器皿, 如离心管, tip头等最好是新的,并经高压灭菌处理,所有的试剂都要灭菌,且注意防止被其它试剂、dna酶或杂dna所污染, 否则均会影响转化效率或杂dna的转入, 为以后的筛选、鉴定带来不必要的麻烦。
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影响淋巴细胞转化试验细胞转化率的因素有哪些
4楼：匿名用户
⑴、受体细胞转化的受体细胞一般是限制-修饰系统缺陷的突变株，即不含限制性内切酶和甲基化酶的突变株，它可容忍外源dna分子进入体内并稳定地遗传给后代。另外还应根据载体的性质及实验的目的选择合适的宿主。此外，受体细胞生长状态和密度也很重要。
不要使用经过多次转接或储存于4℃的培养菌。细胞生长密度以刚进入对数生长期时为好，密度过高或不足均会影响转化率。⑵、载体dna和重组dna方面载体本身性质决定了转化的高低，不同的载体dna转化同一受体细胞，其转化效率不同。
载体的空间构象也有明显影响，超螺旋结构的载体质粒往往有较高的转化率，经体外酶切连接操作后的载体dna或重组dna由于空间上难以恢复，其转化率常比cccdna低两个数量级。对以质粒为载体的重组分子而言，分子量大的转化效率低。⑶、操作方面感受态细胞的制备对转化率影响较大。
一般未经特殊处理的培养细胞对重组dna分子不敏感，难以转化成功。为防止杂菌和杂dna的污染，整个操作均应在无菌条件下进行，所有器皿最好是新的，并经高压灭菌处理，所有试剂也都要灭菌处理。⑷、转化体系中重组dna的浓度与纯度转化体系中重组dna的浓度与纯度对转化率也有一定影响。
在一定浓度范围内，浓度越高，转化率越高，重组dna纯度越高，转化率越高。⑸、外源基因与宿主染色体的同源性外源基因**与宿主亲缘关系越近，越易整合到宿主染色体中，转化率越高，否则易被宿主核酸酶降解而降低转化率。
验证感受态细胞转化效率时为什么用puc19质粒
5楼：阿鲁巴星人
因为质粒小，好转染
而且大家都用它，已经作为一个标准了
制备化转感受态细胞od低于0.3会影响转化效率么 40
6楼：阿鲁巴星人
当然会。
低于0.3细菌都没正式进入对数期，细菌状态不好，且菌量少，转化效率基本上不会高。
感受态细胞的转化要注意些什么
7楼：匿名用户
注意事项：
1．实验中所需氯化钙于冰浴后再使用
2．使用离心机前，要严格保证离心物品充分平衡，以免造成离心机损伤3．大肠杆菌感受态一定放冰上溶化
4．热激和冰浴时间要科学把握
8楼：匿名用户
此外（1）质粒dna的质量和浓度，环状重组质粒的转化率较分子量相同的线性重组质粒高10~100倍，则会使转化率下降;ml左右，且注意防止被其它试剂。（应注意od600值与细胞数之间的关系随菌株的不同而不同），大于30kb的重组质粒将很难进行转化：所用的cacl2等试剂均需是最高纯度的。
对tg1菌株。所有的试剂都要灭菌。对于以质粒为载体的重组分子而言：
用于转化的质粒dna应主要是超螺旋态的，并经高压灭菌处理，1ng的cccdna即可使50ul的感受态细胞达到饱和。一般地。细胞生长密度以每毫升培养液中的细胞数在5×107个左右为佳，所用器皿，并用最纯净的水配制，细胞密度在5×107个/：
整个操作过程均应在无菌条件下进行，分子量大的转化效率低，移液枪头等最好是新的，不能离开冰浴，重组dna分子的构型与转化效率也密切相关，否则细胞转化率将会降低，可通过测定培养液的od600控制、dna酶或杂dna所污染，转化率与外源dna的浓度在一定范围内成正比。密度过高或不足均会使转化率下降。不要用已经过多次转接。
（二）感受态细胞转化中的影响。（2）感受态细胞的质量。整个操作均需在冰上进行，但当加入的外源dna的量过多或体积过大时，dna溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5%，实验证明，及贮存在4℃的培养菌液，因此重组dna大都构成环状双螺旋分子，最好分装保存于4℃ （3）细胞的生长状态和密度 最好从-70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。
即应用对数期或对数生长前期的细菌，否则均会影响转化效率或杂dna的转入，od600为0．5时，如离心管
感受态细胞的制备时有什么注意事项
9楼：天寂无痕
1、培养温度。较低的温度培养有利于感受态的形成，这样可以获得较高的感受态，但太低又不实用，因而产生了 inoue 的高效感受态制备方法，它实际是利用了所有有利于感受态的文献而得出的一
个非常理想方法。
2、在保存感受态时，dmso 要比甘油的效果要好，它会使感受态的效率增加。
3、液氮速冻也会使感受态的效率提高，因此推荐用液氮速冻感受态，然后保存于超低温冰箱内。
4、冻存的感受态用一次拿一管，不要反复冻融。化冻之后立即使用，不要冰上放太久。
5、操作时可以轻弹轻甩，尽量避免用移液器吹吸。
10楼：y神级第六人
（1）质粒dna的质量和浓度：
用于转化的质粒dna应主要是超螺旋态的，转化率与外源dna的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源dna的量过多或体积过大时，则会使转化率下降。一般地，dna溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5%，1ng的cccdna即可使50ul的感受态细胞达到饱和。对于以质粒为载体的重组分子而言，分子量大的转化效率低，实验证明，大于30kb的重组质粒将很难进行转化。
此外，重组dna分子的构型与转化效率也密切相关，环状重组质粒的转化率较分子量相同的线性重组质粒高10~100倍，因此重组dna大都构成环状双螺旋分子。
（2）感受态细胞的质量：
所用的cacl2等试剂均需是最高纯度的，并用最纯净的水配制，最好分装保存于4℃
（3）细胞的生长状态和密度
最好从-70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。不要用已经过多次转接，及贮存在4℃的培养菌液。细胞生长密度以每毫升培养液中的细胞数在5×107个左右为佳。
即应用对数期或对数生长前期的细菌，可通过测定培养液的od600控制。对tg1菌株，od600为0．5时，细胞密度在5×107个/ml左右。（应注意od600值与细胞数之间的关系随菌株的不同而不同）。
密度过高或不足均会使转化率下降。
（二）感受态细胞转化中的影响：
整个操作过程均应在无菌条件下进行，所用器皿，如离心管，移液枪头等最好是新的，并经高压灭菌处理。所有的试剂都要灭菌，且注意防止被其它试剂、dna酶或杂dna所污染，否则均会影响转化效率或杂dna的转入。整个操作均需在冰上进行，不能离开冰浴，否则细胞转化率将会降低。
怎样检验感受态细胞转化是否成功,转化之后复苏感受态细胞能用加了氨苄的LB培养基吗
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