怎样检验感受态细胞转化是否成功,转化之后复苏感受态细胞能用加了氨苄的LB培养基吗

2020-11-23 09:12:07 字数 2056 阅读 9222

1楼:匿名用户

转化后铺含有相应抗生素的平板,如果有菌落长出,基本就是转化成功了。

怎样检验感受态细胞转化是否成功

2楼:匿名用户

当然是利用筛选平板了。

经典的就是蓝白斑实验。不过我们上学期做的红绿荧光蛋白的,直接用普通平板,到时观察有无荧光就行了。

3楼:匿名用户

将空载体转化上去,平板筛选,看生长的克隆数

转化之后复苏感受态细胞能用加了氨苄的lb培养基吗

4楼:匿名用户

不能,如果复苏时间短,会导致比未复苏的浓度还低,以至于培养基上无法长出菌落

5楼:匿名用户

可以用,进行蓝白斑筛选

怎么检测bl21感受态

6楼:匿名用户

取50ul感受态,涂一个无抗的板,要能长满板的菌落,最好》1000个,然后涂几个常见抗生素的板,比如amp, kan,最好一个菌落都没有,至少要<10个。

7楼:匿名用户

还要检测下转化效率吧,就是找带相应抗性的质粒转入感受态,与没有质粒的板子比比

什么叫感受态细胞?什么叫转化

8楼:匿名用户

感受态细胞指的是经处理后,处于能吸收周围环境中dna分子生理状态的微生物细胞,在转基因技术操作过程中要将重组dna分子导入微生物受体细胞时就需要用感受态细胞。所谓转化是目的基因进入受体细胞并在受体细胞中维持稳定和表达的过程。

感受态细胞和宿主菌有啥区别?

9楼:匿名用户

感受态细胞(***petent cell):理化方法诱导细胞,使其处于最适摄取和容纳外来dna的生理状态。

意义:将构建好的载体转入感受态细胞进行表达,不仅可以检验重组载体是否构建成功,最主要的是感受态细胞作为重组载体的宿主可以进行后续实验,如蛋白质表达纯化等工作。

宿主菌:就是一种噬菌体,他先附着在某个细胞表面,将体内的dnf遗传基因释放到细胞核内,利用这个细胞的遗传物质进行繁殖。

如何鉴别一个质粒dna成功转入到大肠杆菌感受态细胞中

10楼:万能星球

通常使用选择培养基来筛选大肠杆菌。例如重组质粒上带有抗四环素基因,那么使用带有四环素的选择培养基,将待测大肠杆菌接种到选择培养基,只有成功转入重组质粒的大肠杆菌才能在选择培养基生长

11楼:前云岚徭唱

不对,通过转化到感受态细菌中,不是细胞.感受态的大肠杆菌,可以自己制作也可以通过购买.之后将细菌凃到含有抗生素的板子上,长出克隆后挑取单克隆,将单克隆加入含有抗生素的细菌培养基中培养,之后提取质粒,提取质粒可以购买相应的试剂盒,按照试剂盒的说明书操作即可.

质粒是带有抗性基因的,只有含有该质粒的细菌才能在含有对应抗生素的培养基中存活并增殖,这样就能确保是你的表达载体质粒.当然为了防止杂菌的污染,整个过程中最好是无菌操作.而表达载体质粒有可能出现突变等情况,所以可以在提出质粒之后,取少量质粒送测序,来确保序列的无误.

为什么扩大培养质粒要转到感受态细胞内而不可以直接用pcr扩增?

12楼:匿名用户

你要扩大的是质粒不是pcr片段,直接pcr哪能扩那么大的质粒啊,而且质粒还是环形的,怎么做pcr,所以当然是摇菌啦

13楼:苹果是最好的

质粒是环状dna分子是一个有生命活力的个体,如果需要大量的扩增,就必须用生物扩增法,就像一个生命体在不断繁殖一样,借助感受态细胞繁殖就会越来越多。pcr属于一种机械扩增,是机械性的将一个一个个体拼接起来,就像咱们化学合成一样,而且他扩增的只是一个dn**段。再者,dna本来就是生命体内的东西,那肯定是,在生物体内繁育扩增,才是最有效快捷的方法。

14楼:匿名用户

主要是效率问题, 通过菌体繁殖而进行的扩增是pcr的若干倍。