1楼：du知道君
最重要的是控制菌的od值 选对正确的方法 一定要避免表面活性剂的存在和剧烈的** 避免高温，最好全程低温 注意避免杂菌污染 一般就这几条，注意了，感受态效率应该没有问题。
制备感受态细胞时,应特别注意哪些环节?
2楼：凉了的
1、整个实验过程均需置于冰上进行。
2、选用对数生长期细胞，od600在0.4~0.5间。
3、所有操作必须做到严格无菌，防止杂菌和杂dna的污染。
4、动作不应太剧烈，减少细胞的机械损伤。
3楼：
保证感受态细胞的活性，所有操作尽量在冰上，暴露在空气中的时间尽量短。
4楼：冯雨凝
1、整个实验过程均需置于冰上进行。
2、选用对数生长期细胞，od600不应高于0.5。
感受态细胞的制备时有什么注意事项
5楼：天寂无痕
1、培养温度。较低的温度培养有利于感受态的形成，这样可以获得较高的感受态，但太低又不实用，因而产生了 inoue 的高效感受态制备方法，它实际是利用了所有有利于感受态的文献而得出的一
个非常理想方法。
2、在保存感受态时，dmso 要比甘油的效果要好，它会使感受态的效率增加。
3、液氮速冻也会使感受态的效率提高，因此推荐用液氮速冻感受态，然后保存于超低温冰箱内。
4、冻存的感受态用一次拿一管，不要反复冻融。化冻之后立即使用，不要冰上放太久。
5、操作时可以轻弹轻甩，尽量避免用移液器吹吸。
6楼：y神级第六人
（1）质粒dna的质量和浓度：
用于转化的质粒dna应主要是超螺旋态的，转化率与外源dna的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源dna的量过多或体积过大时，则会使转化率下降。一般地，dna溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5%，1ng的cccdna即可使50ul的感受态细胞达到饱和。对于以质粒为载体的重组分子而言，分子量大的转化效率低，实验证明，大于30kb的重组质粒将很难进行转化。
此外，重组dna分子的构型与转化效率也密切相关，环状重组质粒的转化率较分子量相同的线性重组质粒高10~100倍，因此重组dna大都构成环状双螺旋分子。
（2）感受态细胞的质量：
所用的cacl2等试剂均需是最高纯度的，并用最纯净的水配制，最好分装保存于4℃
（3）细胞的生长状态和密度
最好从-70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。不要用已经过多次转接，及贮存在4℃的培养菌液。细胞生长密度以每毫升培养液中的细胞数在5×107个左右为佳。
即应用对数期或对数生长前期的细菌，可通过测定培养液的od600控制。对tg1菌株，od600为0．5时，细胞密度在5×107个/ml左右。（应注意od600值与细胞数之间的关系随菌株的不同而不同）。
密度过高或不足均会使转化率下降。
（二）感受态细胞转化中的影响：
整个操作过程均应在无菌条件下进行，所用器皿，如离心管，移液枪头等最好是新的，并经高压灭菌处理。所有的试剂都要灭菌，且注意防止被其它试剂、dna酶或杂dna所污染，否则均会影响转化效率或杂dna的转入。整个操作均需在冰上进行，不能离开冰浴，否则细胞转化率将会降低。
感受态细胞制备过程中应注意什么
7楼：阿鲁巴星人
最重要的是控制菌的od值
选对正确的方法
一定要避免表面活性剂的存在和剧烈的**
避免高温，最好全程低温
注意避免杂菌污染
一般就这几条，注意了，感受态效率应该没有问题。
感受态细胞的转化要注意些什么
8楼：匿名用户
注意事项：
1．实验中所需氯化钙于冰浴后再使用
2．使用离心机前，要严格保证离心物品充分平衡，以免造成离心机损伤3．大肠杆菌感受态一定放冰上溶化
4．热激和冰浴时间要科学把握
9楼：匿名用户
此外（1）质粒dna的质量和浓度，环状重组质粒的转化率较分子量相同的线性重组质粒高10~100倍，则会使转化率下降;ml左右，且注意防止被其它试剂。（应注意od600值与细胞数之间的关系随菌株的不同而不同），大于30kb的重组质粒将很难进行转化：所用的cacl2等试剂均需是最高纯度的。
对tg1菌株。所有的试剂都要灭菌。对于以质粒为载体的重组分子而言：
用于转化的质粒dna应主要是超螺旋态的，并经高压灭菌处理，1ng的cccdna即可使50ul的感受态细胞达到饱和。一般地。细胞生长密度以每毫升培养液中的细胞数在5×107个左右为佳，所用器皿，并用最纯净的水配制，细胞密度在5×107个/：
整个操作过程均应在无菌条件下进行，分子量大的转化效率低，移液枪头等最好是新的，不能离开冰浴，重组dna分子的构型与转化效率也密切相关，否则细胞转化率将会降低，可通过测定培养液的od600控制、dna酶或杂dna所污染，转化率与外源dna的浓度在一定范围内成正比。密度过高或不足均会使转化率下降。不要用已经过多次转接。
（二）感受态细胞转化中的影响。（2）感受态细胞的质量。整个操作均需在冰上进行，但当加入的外源dna的量过多或体积过大时，dna溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5%，实验证明，及贮存在4℃的培养菌液，因此重组dna大都构成环状双螺旋分子，最好分装保存于4℃ （3）细胞的生长状态和密度 最好从-70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。
即应用对数期或对数生长前期的细菌，否则均会影响转化效率或杂dna的转入，od600为0．5时，如离心管
酵母感受态细胞的制备需要注意什么
10楼：匿名用户
酵母感受态细胞的制备
(1)从ypd平板上挑取一个新鲜的酿酒酵母eby100单克隆至10 mlypd液体培养基，30℃，250 rpm培养过夜；
(2)测定过夜培养物的od600值为3.0～5.0之间；
(3)将10 ml ypd过夜培养物稀释至od600值为0.2～0.4；
(4)在28～30℃摇床中继续培养3～6hr，使其od600值达到0.6～1.0；
(5)于室温1500g离心5 min收集酵母细胞，弃上清；
用10ml洗液洗酵母细胞，随后于室温1500g离心5 min离心收集细胞，弃上清；
(7)用1 ml te/liac重悬酵母细胞，以每管50μl分装。
酵母细胞的转化
(1)取50μl感受态细胞，再加入待转质粒各2μl，混匀；
(2)加入500μl 转化用溶液（peg/liac,二甲亚砜），弹击管壁混匀；
(3)30℃水浴1hr,隔15min弹击管壁混匀；
(4)加入1毫升ypd培养液，30℃摇床培养1小时
(5)3500g离心5 min ，留沉淀，弃上清；
沉淀用150μl te重悬，涂相应的sd平板；将平板倒置于30℃培养。
大肠杆菌感受态细胞的制备要注意哪些因素
11楼：历怀雨行茶
（1）质粒dna的质量和浓度：
用于转化的质粒dna应主要是超螺旋态的，转化率与外源dna的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源dna的量过多或体积过大时，则会使转化率下降。一般地，dna溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5%，1ng的cccdna即可使50ul的感受态细胞达到饱和。对于以质粒为载体的重组分子而言，分子量大的转化效率低，实验证明，大于30kb的重组质粒将很难进行转化。
此外，重组dna分子的构型与转化效率也密切相关，环状重组质粒的转化率较分子量相同的线性重组质粒高10~100倍，因此重组dna大都构成环状双螺旋分子。
（2）感受态细胞的质量：
所用的cacl2等试剂均需是最高纯度的，并用最纯净的水配制，最好分装保存于4℃
（3）细胞的生长状态和密度
最好从-70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。不要用已经过多次转接，及贮存在4℃的培养菌液。细胞生长密度以每毫升培养液中的细胞数在5×107个左右为佳。
即应用对数期或对数生长前期的细菌，可通过测定培养液的od600控制。对tg1菌株，od600为0．5时，细胞密度在5×107个/ml左右。（应注意od600值与细胞数之间的关系随菌株的不同而不同）。
密度过高或不足均会使转化率下降。
（二）感受态细胞转化中的影响：
整个操作过程均应在无菌条件下进行，所用器皿，如离心管，移液枪头等最好是新的，并经高压灭菌处理。所有的试剂都要灭菌，且注意防止被其它试剂、dna酶或杂dna所污染，否则均会影响转化效率或杂dna的转入。整个操作均需在冰上进行，不能离开冰浴，否则细胞转化率将会降低。
制备感受态细胞的关键是什么
12楼：anyway丶
制备感受态细胞的关键是将外源dna分子引入受体细菌，使之获得新的遗传性状。
主要原理就是通过处理使细胞的通透性变大，直观的说，使得细胞膜表面出现一些孔洞，便于外源基因或载体进入感受态细胞。由于细胞膜的流动性，这种孔洞会被细胞自身所修复。将构建好的载体转入感受态细胞进行表达，不仅可以检验重组载体是否构建成功，最主要的是感受态细胞作为重组载体的宿主可以进行后续实验，如蛋白质表达纯化等工作。
扩展资料
制作方法
cacl2法
1.将快速生长的大肠杆菌置于经低温（0℃）预处理的低渗氯化钙溶液中，便会造成细胞膨胀，同时ca2+会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构，促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来，离开所在区域，诱导细胞成为感受态细胞
细胞膜通透性发生变化，极易与外源dna相粘附并在细胞表面形成抗脱氧核糖核酸酶的羟基－磷酸钙复合物。
联合其它的二价金属离子（如mn、co）、dmso或还原剂等物质处理细菌，则可使转化率提高100～1000倍。
2.此时，将该体系转移到42℃下做短暂的热刺激（90s），细胞膜的液晶结构会发生剧烈扰动，并随机出现许多间隙，外源dna就可能被细胞吸收。进入细胞的外源dna分子通过复制、表达，实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。
3.将转化后的细胞在选择性培养基上培养，筛选出带有外源dna分子的阳性克隆。
电转法电击法不需要预先诱导细菌的感受态，依靠短暂的电击，促使dna进入细菌，转化率最高能达到109~1010转化子/ug闭环dna。
13楼：匿名用户
尽量使细胞保持在低温下，可冰浴，这样可降低细胞代谢率，防治细胞的大量死亡。因为无培养基，代谢强，则会引起大量细胞死亡。
14楼：浙大阿米巴
热激的时间和操作速度掌握好
几种感受态细胞制备的效果比较,几种感受态细胞制备 的效果比较 20
1楼 虢湛芳昂蓝 1 将培养液转入离心管中 冰上放置10分钟 然后于4 下3000g离心10分钟。 2 弃去上清 用预冷的0 05mol l的cacl2溶液10ml轻轻悬浮细胞 冰上放置15 30分钟后 4 下3000g离心10分钟。 3 弃去上清 加入4ml预冷含15 甘油的0 05mol l的c...
选择好的铁艺制品要注意哪些细节
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感受态细胞转化效率的高低与哪些因素有关
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