1楼:pauland益
细胞膜通透性发生改变,
2楼:匿名用户
一般细胞膜的透性变大,处于易接受外源dna的状态,称为感受态细胞
用钙离子处理成为感受态细胞的转化方法
3楼:匿名用户
原因:目的基因导入植物细胞时,由于没有经过钙离子处理没有变成感受态细胞,细胞的通透性小,目的基因难以进入细胞。
感受态细胞主要原理:
1、通过处理使细胞的通透性变大。
2、使得细胞膜表面出现一些孔洞,便于外源基因或载体进入感受态细胞。
3、由于细胞膜的流动性,这种孔洞会被细胞自身所修复。
扩展资料:
氯化钙法:
1、将快速生长的大肠杆菌置于经低温(0℃)预处理的低渗氯化钙溶液中,便会造成细胞膨胀,同时ca2+会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构,促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来,离开所在区域,诱导细胞成为感受态细胞。
2、此时,将该体系转移到42℃下做短暂的热刺激(90s),细胞膜的液晶结构会发生剧烈扰动,并随机出现许多间隙,外源dna就可能被细胞吸收。进入细胞的外源dna分子通过复制、表达,实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。
3、将转化后的细胞在选择性培养基上培养,筛选出带有外源dna分子的阳性克隆。
4楼:无语翘楚
感受态细胞(***petent cell):理化方法诱导细胞,使其处于最适摄取和容纳外来dna的生理状态。
主要原理就是通过处理使细胞的通透性变大,直观的说,使得细胞膜表面出现一些孔洞,便于外源基因或载体进入感受态细胞。由于细胞膜的流动性,这种孔洞会被细胞自身所修复。
1. 将快速生长的大肠杆菌置于经低温(0℃)预处理的低渗氯化钙溶液中,便会造成细胞膨胀;
ca离子会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构,促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来,离开所在区域,诱导细胞成为感受态细胞细胞膜通透性发生变化,极易与外源dna相粘附并在细胞表面形成抗脱氧核糖核酸酶的羟基-磷酸钙复合物。
联合其它的二价金属离子(如mn、co)、dmso或还原剂等物质处理,可使转化率提高100~1000倍。
2. 将该体系转移到42℃下做短暂的热刺激(90s),细胞膜的液晶结构会发生剧烈扰动,并随机出现许多间隙,外源dna就可能被细胞吸收。进入细胞的外源dna分子通过复制、表达,实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。
3.将转化后的细胞在选择性培养基上培养,筛选出带有外源dna分子的阳性克隆。
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总之ca离子使dna沉淀于细胞表面(类似真核转染的磷酸钙共沉淀),0-42℃的热冲击使得膜表面出现裂痕(很快会被自动修复-疏水作用)使得膜表面dna被摄入。
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大肠杆菌是格兰阴性,细胞壁就是肽聚糖+外膜(脂蛋白、脂质双层、脂多糖)
这种细胞壁结构除了作为内毒素使机体发热、白细胞增加之外(当然还可以为此细菌形态、耐药性、结合mg2+维持离子平衡),与细胞膜出现裂痕吸收dna并没有什么关系。
5楼:匿名用户
用钙离子处理成为感受态细胞的转化只是使得细菌处于敏感状态,并没有涉及到基因的转移。
6楼:为水情狂
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