1楼：阿鲁巴星人
加甘油的大肠杆菌感受态一般是用来电转的吧，加甘油是为了保护大肠杆菌。
感受态细胞的制备时有什么注意事项
2楼：天寂无痕
1、培养温度。较低的温度培养有利于感受态的形成，这样可以获得较高的感受态，但太低又不实用，因而产生了 inoue 的高效感受态制备方法，它实际是利用了所有有利于感受态的文献而得出的一
个非常理想方法。
2、在保存感受态时，dmso 要比甘油的效果要好，它会使感受态的效率增加。
3、液氮速冻也会使感受态的效率提高，因此推荐用液氮速冻感受态，然后保存于超低温冰箱内。
4、冻存的感受态用一次拿一管，不要反复冻融。化冻之后立即使用，不要冰上放太久。
5、操作时可以轻弹轻甩，尽量避免用移液器吹吸。
3楼：y神级第六人
（1）质粒dna的质量和浓度：
用于转化的质粒dna应主要是超螺旋态的，转化率与外源dna的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源dna的量过多或体积过大时，则会使转化率下降。一般地，dna溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5%，1ng的cccdna即可使50ul的感受态细胞达到饱和。对于以质粒为载体的重组分子而言，分子量大的转化效率低，实验证明，大于30kb的重组质粒将很难进行转化。
此外，重组dna分子的构型与转化效率也密切相关，环状重组质粒的转化率较分子量相同的线性重组质粒高10~100倍，因此重组dna大都构成环状双螺旋分子。
（2）感受态细胞的质量：
所用的cacl2等试剂均需是最高纯度的，并用最纯净的水配制，最好分装保存于4℃
（3）细胞的生长状态和密度
最好从-70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。不要用已经过多次转接，及贮存在4℃的培养菌液。细胞生长密度以每毫升培养液中的细胞数在5×107个左右为佳。
即应用对数期或对数生长前期的细菌，可通过测定培养液的od600控制。对tg1菌株，od600为0．5时，细胞密度在5×107个/ml左右。（应注意od600值与细胞数之间的关系随菌株的不同而不同）。
密度过高或不足均会使转化率下降。
（二）感受态细胞转化中的影响：
整个操作过程均应在无菌条件下进行，所用器皿，如离心管，移液枪头等最好是新的，并经高压灭菌处理。所有的试剂都要灭菌，且注意防止被其它试剂、dna酶或杂dna所污染，否则均会影响转化效率或杂dna的转入。整个操作均需在冰上进行，不能离开冰浴，否则细胞转化率将会降低。
如何制备大肠杆菌感受态细胞
4楼：匿名用户
（1）挑取大肠杆菌单菌落，接种于5 ml无抗生素的lb液体培养基中，37℃下振荡培养13h，至对数生长后期。将该菌悬液以1:50 的比例接种于100 ml lb 液体培养基中，37℃振荡培养2-3h至od600＝0.
5。（2）在无菌条件下将培养液转入离心管中，冰上放置10 min，使培养物冷却至0℃，然后4℃，4000rpm离心10min；
（3）弃去上清，倒置1 min，以便将培养液流尽；
（4）用冰预冷的0.1 mol/l的cacl2溶液10 ml轻轻悬浮细胞，充分混匀，冰上放置30 min后，4℃下4000rpm离心10min；
（5）弃去上清，并倒置1 min，以便最后的痕量培养液流尽；
（6）加入4 ml预冷含15%甘油的0.1 mol/l的cacl2溶液，轻轻悬浮细胞，冰上放置几分钟，即成感受态细胞悬液；
（7）感受态细胞100 μl分装，贮存于-70 ℃保存备用。
感受态细胞在什么时候加甘油比较好
5楼：匿名用户
甘油就可以了,dmso是用来保护细胞这种比较娇嫩的,大肠杆菌就用便宜一点的好了. 有问题一起讨论解决哦~
如何制备大肠杆菌感受态细胞
6楼：匿名用户
大肠杆菌感受态细胞的制备和转化
准备：一. 材料
e. coli dh5α菌株: rˉ,mˉ,ampˉ；pbs质粒dna: 购买或实验室自制，eppendorf管。
二. 设备
恒温摇床,电热恒温培养箱,台式高速离心机,无菌工作台,低温冰箱, 恒温水浴锅, 制冰机, 分光光度计,微量移液枪。
三. 试剂
1.lb固体和液体培养基
2.amp母液
3.含amp的lb固体培养基:将配好的lb固体培养基高压灭菌后冷却至60℃左右,加入amp储存液,使终浓度为50ug/ml,摇匀后铺板。
4.麦康凯培养基(maconkey agar):取52g麦康凯琼脂,加蒸馏水1000ml,微火煮沸至完全溶解,高压灭菌，待冷至60℃左右加入amp储存液使终浓度为50ug/ml,然后摇匀后涂板。
5.0.05mol/l cacl2溶液:称取0.28g cacl2(无水,分析纯),溶于50ml重蒸水中,定容至100ml,高压灭菌。
6.含15%甘油的0.05mol/l cacl2: 称取0.28g cacl2(无水,分析纯),溶于50ml重蒸水中,加入15ml甘油,定容至100ml,高压灭菌。
操作步骤：
一、 受体菌的培养
从lb平板上挑取新活化的e. coli dh5α单菌落,接种于3-5ml lb液体培养基中,37℃下振荡培养12小时左右,直至对数生长后期。将该菌悬液以1:
100-1:50的比例接种于100ml lb液体培养基中,37℃振荡培养2-3小时至od600 ＝0.5左右。
二、 感受态细胞的制备 ( cacl2 法)
1、将培养液转入离心管中,冰上放置10分钟,然后于4℃下3000g离心10分钟。
2、 弃去上清,用预冷的0.05mol/l的cacl2 溶液10ml轻轻悬浮细胞,冰上放置15-30分钟后,4℃下3000g离心10分钟。
3、弃去上清,加入4ml预冷含15%甘油的0.05mol/l的cacl2 溶液,轻轻悬浮细胞,冰上放置几分钟,即成感受态细胞悬液。
4、 感受态细胞分装成200μl的小份,贮存于-70℃可保存半年。
三、 转化
1、从-70℃冰箱中取200μl感受态细胞悬液,室温下使其解冻,解冻后立即置冰上。
2、 加入pbs质粒dna溶液(含量不超过50ng,体积不超过10μl),轻轻摇匀,冰上放置30分钟后。
3、42℃水浴中热击90秒或37℃水浴5分钟,热击后迅速置于冰上冷却3-5分钟。
4、向管中加入1ml lb液体培养基(不含amp),混匀后37℃振荡培养1小时,使细菌恢复正常生长状态,并表达质粒编码的抗生素抗性基因(ampr )。
5、将上述菌液摇匀后取100μl 涂布于含amp的筛选平板上,正面向上放置半小时,待菌液完全被培养基吸收后倒置培养皿,37℃培养16-24小时。
同时做两个对照:
对照组1: 以同体积的无菌双蒸水代替dna溶液,其它操作与上面相同。此组正常情况下在含抗生素的lb平板上应没有菌落出现。
对照组2: 以同体积的无菌双蒸水代替dna溶液,但涂板时只取5μl 菌液涂布于不含抗生素的lb平板上，此组正常情况下应产生大量菌落。
四、 计算转化率
统计每个培养皿中的菌落数。
转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子，根据此皿中的菌落数可计算出转化子总数和转化频率，公式如下：
转化子总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积／涂板菌液体积
转化频率**化子数／每mg质粒dna）＝转化子总数／质粒dna加入量(mg)
感受态细胞总数＝对照组2菌落数×稀释倍数×菌液总体积／涂板菌液体积
感受态细胞转化效率＝转化子总数／感受态细胞总数
[注意] 本实验方法也适用于其它e.coli受体菌株的不同的质粒dna的转化。但它们的转化效率并不一定一样。
有的转化效率高，需将转化液进行多梯度稀释涂板才能得到单菌落平板,而有的转化效率低,涂板时必须将菌液浓缩(如离心),才能较准确的计算转化率。
感受态细胞的制备和转化中 为什么要加两次cacl2？cacl2为什么要预冷
7楼：就喜欢理财
方法一： 细菌转化的方法多以mendel和higa（1970）的发现为基础，其基本方法是用冰预冷的cacl2或多种2价阳离子等处理细菌，使之进入感受态得以转化。 用cacl2制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞，常用于成批制备感受态细菌。
如何制备大肠杆菌感受态细胞,CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞原理？
1楼 匿名用户 1 挑取大肠杆菌单菌落，接种于5 ml无抗生素的lb液体培养基中，37 下振荡培养13h，至对数生长后期。将该菌悬液以1 50 的比例接种于100 ml lb 液体培养基中，37 振荡培养2 3h至od600 0 5。 2 在无菌条件下将培养液转入离心管中，冰上放置10 min，使培...