1楼：灬芸丿丶
用来进行植物原生质体的培养的一种方法
2楼：匿名用户
没有听书过，我只听说过琼脂糖凝胶电泳技术。
请问高手，免疫共沉淀中protein a 琼脂糖珠的作用原理？谢谢
3楼：笑起来露16颗牙
prorein a或者 protein g能特异性地结合到免疫球蛋白的fc片段，所以能和抗体结合，抗体和你的目标蛋白结合，目标蛋白和相互作用的蛋白结合。
4楼：匿名用户
protein a 可以特异性的和igg结合。
pcr的原理是什么
5楼：凯是凯喵的凯
pcr（聚合酶链式反应）技术的基本原理类似于dna的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。pcr由变性→退火→延伸三个基本反应步骤构成：
①模板dna的变性：模板dna经加热至93℃左右一定时间后，使模板dna双链或经pcr扩增形成的双链dna解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。
②模板dna与引物的退火（复性）：模板dna经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板dna单链的互补序列配对结合。
③引物的延伸：dna模板--引物结合物在72℃、dna聚合酶（如taqdna聚合酶）的作用下，以dntp为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板dna链互补的半保留复制链。
重复循环变性→退火→延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
6楼：demon陌
pcr原理：
dna的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链dna在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在dna聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。
pcr技术的基本原理类似于dna的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。
pcr由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：
①模板dna的变性：模板dna经加热至93℃左右一定时间后，使模板dna双链或经pcr扩增形成的双链dna解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；
②模板dna与引物的退火（复性）：模板dna经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板dna单链的互补序列配对结合；
③引物的延伸：dna模板--引物结合物在72℃、dna聚合酶（如taqdna聚合酶）的作用下，以dntp为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板dna链互补的半保留复制链。
重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
7楼：次次次蛋黄米亚
pcr技术的基本原理：
该技术是在模板dna、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依靠于dna聚合酶的酶促合成反应。dna聚合酶以单链dna为模板，借助一小段双链dna来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链dna模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。
在适宜的温度和环境下，dna聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3-oh末端，并以此为起始点，沿模板5→3方向延伸，合成一条新的dna互补链。
8楼：恏乄亖
pcr的原理：
该技术是在模板dna、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于dna聚合酶的酶促合成反应。dna聚合酶以单链dna为模板，借助一小段双链dna来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链dna模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，dna聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3-oh末端，并以此为起始点，沿模板5→3方向延伸，合成一条新的dna互补链。
拓展资料：
聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的dn**段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊dna复制，pcr的最大特点，是能将微量的dna大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前**案中**所遗留的毛发、**或血液，只要能分离出一丁点的dna，就能用pcr加以放大，进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。
9楼：就是月酱
pcr(聚合酶链式反应)是利用dna在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温(经常是60°c左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至dna聚合酶最适反应温度(72°c左右)，dna聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的pcr仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。
知识拓展：
聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的dn**段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊dna复制，pcr的最大特点，是能将微量的dna大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前**案中**所遗留的毛发、**或血液，只要能分离出一丁点的dna，就能用pcr加以放大，进行比对。
这也是"微量证据"的威力之所在。由1983年美国mullis首先提出设想，1985年由其发明了聚合酶链反应，即简易dna扩增法，意味着pcr技术的真正诞生。到如今2013年，pcr已发展到第三代技术。
1973 年，台籍科学家钱嘉韵，发现了稳定的taq dna聚合酶，为pcr技术发展也做出了基础性贡献。
10楼：薄荷
聚合酶链式反应（英文：polymerase chain reaction，缩写：pcr），是一种分子生物学技术，用于扩增特定的dn**段，这种方法可在生物体外进行，不必依赖大肠杆菌或酵母菌等生物体。
这种方法由凯利·穆利斯（kary mullis）于1983年开发，当时他是cetus公司的雇员，也是1993年诺贝尔化学奖的获得者，它是一种简单，廉价和可靠的方法复制dn**段，这个概念适用于现代生物学和相关科学的许多领域。 pcr可能是分子生物学中使用最广泛的技术。这种技术被用于生物医学研究，犯罪取证和分子考古学 。
拓展资料：
微生物复制是一个费时耗力的流程，首先要将dna经限制酶剪裁，再利用连接酶（ligase）加到载体（vector）中，之后利用瞬间电击（electroporation）或是热休克（heat shock）的方式，送到大肠杆菌感受态细胞（***petent cell）中，将此菌于培养皿大量繁殖培养，再经过繁复的分离、纯化过程，时间通常需要近一周，才能大量复制片段。
所以仅需一小时的pcr能节省大量时间和繁复的操作，聚合酶链式反应技术被广泛地运用在医学和生物学的实验室，例如用于判断检体中是否会表现某遗传疾病的图谱、传染病的诊断、基因复制，以及亲子鉴定。
11楼：北京索莱宝科技****
pcr技术必须有人工合成的合理引物和提取的样品dna,然后才进行自动热循环,最后进行产物鉴定与分析.引物设计与合成目前只能在少数技术力量较强的研究院、所进行,临床应用只需购买pcr检测试剂盒就可开展工作,pcr自动热循环中影响因素很多,对不同的dna样品,pcr反应中各种成份加入量和温度循环参数均不一致.现将几种主要影响因素介绍如下.
一、温度循环参数
在pcr自动热循环中,最关键的因素是变性与退火的温度.如操作范例所示,其变性、退火、延伸的条件是：94℃60s, 37℃60s, 72℃120s,共25～30个循环,扩增片段500bp.
在这里,每一步的时间应从反应混合液达到所要求的温度后开始计算.在自动热循环仪内由混合液原温度变至所要求温度的时间需要30～60s,这一迟滞时间的长短取决于几个因素,包括反应管类型、壁厚、反应混合液体积、热源（水浴或加热块）以及两步骤间的温度差,在设置热循环时应充分给以重视和考虑,对每一仪器均应进行实测.
关于热循环时间的另一个重要考虑是两条引物之间的距离；距离越远,合成靶序列全长所需的时间也越长,前文给出的反应时间是按最适于合成长度500bp的靶序列拟定的.下面就各种温度的选择作一介绍.
1．模板变性温度变性温度是决定pcr反应中双链dna解链的温度,达不到变性温度就不会产生单链dna模板,pcr也就不会启动.变性温度低则变性不完全,dna双链会很快复性,因而减少产量.一般取90～95℃.
样品一旦到达此温度宜迅速冷却到退火温度.dna变性只需要几秒种,时间过久没有必要；反之,在高温时间应尽量缩短,以保持taq dna聚合酶的活力,加入taq dna聚合酶后最高变性温度不宜超过95℃.
2．引物退火温度退火温度决定pcr特异性与产量；温度高特异性强,但过高则引物不能与模板牢固结合,dna扩增效率下降；温度低产量高,但过低可造成引物与模板错配,非特异性产物增加.一般先由37℃反应条件开始,设置一系列对照反应,以确定某一特定反应的最适退火温度.也可根据引物的（g+c）%含量进行推测,把握试验的起始点,一般试验中退火温度ta(annealing temperature)比扩增引物的融解温度ttm(melting temperature)低5℃,可按公式进行计算：
ta = tm - 5℃= 4(g+c)+ 2(a+t) -5℃
其中a,t,g,c分别表示相应碱基的个数.例如,20个碱基的引物,如果（g+c）%含量为50%时,则ta的起点可设在55℃.在典型的引物浓度时（如0.
2μmol/l）,退火反应数秒即可完成,长时间退火没有必要.
3．引物延伸温度温度的选择取决于taq dna聚合酶的最适温度.一般取70～75℃,在72℃时酶催化核苷酸的标准速率可达35～100个核苷酸/秒.每分钟可延伸1kb的长度,其速度取决于缓冲溶液的组成、ph值、盐浓度与dna模板的性质.
扩增片段如短于150bp,则可省略延伸这一步,而成为双温循环,因taq dna聚合酶在退火温度下足以完成短序列的合成.对于100～300bp之间的短序列片段,采用快速、简便的双温循环是行之有效的.此时,引物延伸温度与退火温度相同.
对于1kb以上的dn**段,可根据片段长度将延伸时间控制在1～7min,与此同时,在pcr缓冲液中需加入明胶或bsa试剂,使taq dna聚合酶在长时间内保持良好的活性与稳定性；15%～20%的甘油有助于扩增2.5kb左右或较长dn**段.
4．循环次数常规pcr一般为25～40个周期.一般的错误是循环次数过多,非特异性背景严重,复杂度增加.当然循环反应的次数太少,则产率偏低.
所以,在保证产物得率前提下,应尽量减少循环次数.
扩增结束后,样品冷却并置4℃保存.
二、引物引物设计
要扩增模板dna,首先要设计两条寡核苷酸引物,所谓引物,实际上就是两段与待扩增靶dna序列互补的寡核苷酸片段,两引物间距离决定扩增片段的长度,两引物的5’端决定扩增产物的两个5’末端位置.由此可见,引物是决定pcr扩增片段长度、位置和结果的关键,引物设计也就更为重要.
引物设计的必要条件是与引物互补的靶dna序列必须是已知的,两引物之间的序列未必清楚,这两段已知序列一般为15～20个碱基,可以用dna合成仪合成与其对应互补的二条引物,除此之外,引物设计一般遵循的原则包括：
1．引物长度根据统计学计算,长约17个碱基的寡核苷酸序列在人的基因组中可能出现的机率的为1次.因此,引物长度一般最低不少于16个核苷酸,而最高不超过30个核苷酸,最佳长度为20～24个核苷酸.这样短的寡核苷酸在聚合反应温度（通过72℃）下不会形成稳定的杂合体.
有时可在5’端添加不与模板互补的序列,如限制性酶切位点或启动因子等,以完成基因克隆和其他特殊需要；引物5’端生物素标记或荧光标记可用于微生物检测等各种目的.
有时引物不起作用,理由不明,可移动位置来解决.
2．（g+c）%含量引物的组成应均匀,尽量避免含有相同的碱基多聚体.两个引物中（g+c）%含量应尽量相似,在已知扩增片段（g+c）%含量时宜接近于待扩增片段,一般以40%～60%为佳.
3．引物内部应避免内部形成明显的次级结构,尤其是发夹结构（hairpin structures）.例如：
4．引物之间两个引物之间不应发生互补,特别是在引物3’端,即使无法避免,其3’端互补碱基也不应大于2个碱基,否则易生成“引物二聚体”或“引物二倍体”（primer dimer）.所谓引物二聚体实质上是在dna聚合酶作用下,一条引物在另一条引物序列上进行延伸所形成的与二条引物长度相近的双链dn**段,是pcr常见的副产品,有时甚至成为主要产物.
另外,两条引物之间避免有同源序列,尤为连续6个以上相同碱基的寡核苷酸片段,否则两条引物会相互竞争模板的同一位点；同样,引物与待扩增靶dna或样品dna的其它序列也不能存在6个以上碱基的同源序列.否则,引物就会与其它位点结合,使特异扩增减少,非特异扩增增加.
5．引物3’端配对dna聚合酶是在引物3’端添加单核苷酸,所以,引物3’端5～6个碱基与靶dna的配对要求必须精确和严格,这样才能保证pcr有效扩增.
引物设计是否合理可用pcrdesn软件和美国primer软件进行计算机检索来核定.
人工合成的寡核苷酸引于最好经过色谱（层析）纯化或page纯化,以除去未能合成至全长的短链等杂质.纯化引物在25%乙腈溶液中4℃保存可阻止微生物的生长；一般情况下,不用的引物应保存在-20℃冰箱中,在液体中引物能保存6个月,冻干后可保存1～2年.
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