免疫共沉淀用纯化的抗体好还是用血清好

2021-01-10 12:22:15 字数 2806 阅读 4602

1楼:匿名用户

通常情况下,为了最大限度的保证免疫共沉淀的特异性,最好是用纯化的抗体,血清里面杂质太多了,非常容易引起非特异吸附。

当然,如果做的是过表达的重组蛋白的互做,并且只是做验证工作,也可以用血清试一下。不过可能还是会出现背景高的问题。

其实决定免疫沉淀成败最关键的点就是抗体的质量,包括纯度和特异性。

怎么分辨抗体是否可以用来做免疫共沉淀

2楼:

通常情况下来,为了最大限源度的保证免疫共沉淀的特异性,最好是用纯化的抗体,血清里面杂质

太多了,非常容易引起非特异吸附。

当然,如果做的是过表达的重组蛋白的互做,并且只是做验证工作,也可以用血清试一下。不过可能还是会出现背景高的问题。

其实决定免疫沉淀成败最关键的点就是抗体的质量,包括纯度和特异性。

求助,免疫共沉淀第一抗体应加多少较为合适

3楼:

不需要。或者说需要分开一个个证明。用一个抗体去做

ip,然后分别用3个抗体做ib,看你抓下的蛋白是否是3个蛋白复合物。

抗体(antibody)指机体的免疫系统在抗原刺激下,由b淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。主要分布在血清中,也分布于组织液及外分泌液中。 抗体通常由一些基础单元组成,每一个抗体包括:

两个长(大)的重链,以及两个短(小)的轻链。而轻链和重链之间以双硫键连接。轻链和重链又分为可变区和恒定区,而不同类型的重链恒定区,将会导致抗体种型的不同。

免疫共沉淀抗体的选择

4楼:小豪

可以用兔抗人的其他抗体做对照,已知不与你的目的蛋白有结合的

希望能解决您的问题。

免疫共沉淀两个抗体需要不同种源吗

5楼:神级人氏

不需要。或者说需要分开一个个证明。用一个抗体去做ip,然后分别用3个抗体做ib,看你抓下的蛋白是否是3个蛋白复合物。

抗体(antibody)指机体的免疫系统在抗原刺激下,由b淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。主要分布在血清中,也分布于组织液及外分泌液中。 抗体通常由一些基础单元组成,每一个抗体包括:

两个长(大)的重链,以及两个短(小)的轻链。而轻链和重链之间以双硫键连接。轻链和重链又分为可变区和恒定区,而不同类型的重链恒定区,将会导致抗体种型的不同。

免疫共沉淀怎么做

6楼:

简单地说elisa是检测是否存在某物质(如某种蛋白),而免疫共沉淀是为了检测目标蛋白与其他蛋白是否相互作用。elisa一般方法是将目的物质的抗体加入,再加入能够结合该抗体的另一种被修饰的抗体,后者修饰部分是具有一种酶活性可将某种物质催化形成有色物质,因此显色阳性反应说明存在目标物质。而免疫共沉淀是将蛋白x抗体结合在固定相上,将细胞非变性裂解后浸泡固定相,吸取没有结合的杂质后检测被结合组分,这样所有在细胞中能结合x的蛋白质就一起被分离出来,因此可确定体内条件下蛋白x是否和其他蛋白相互作用。

请教:免疫共沉淀

7楼:不能给狗狗

染色体免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,chip)是基于体内分析发展起来的方法,也称结合位点分析法,在过去十年已经成为表观遗传信息研究的主要方法。这项技术帮助研究者判断在细胞核中基因组的某一特定位置会出现何种组蛋白修饰。chip不仅可以检测体内反式因子与dna的动态作用,还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。

近年来,这种技术得到不断的发展和完善。采用结合微阵列技术在染色体基因表达调控区域检查染色体活性,是深入分析癌症、心血管疾病以及**神经系统紊乱等疾病的主要代谢通路的一种非常有效的工具。

请问:做免疫共沉淀怎么选择抗体和beads,用哪个公司的试剂盒比较好?

8楼:匿名用户

康体生命的anti-gfp beads效果非常不错,可以试一下,打开网页链接可以查看gfp beads的介绍页面

网页链接

单域抗体(single domain antibody, sdab),又称为纳米抗体(nanobody)或者vhh(variable domain of heavy chain),只含一条多肽链,是现今发现的能与抗原特异结合的最小抗体(~15kd)。第一个单域抗体截取自驼类重链抗体(heavy chain antibody,hcab)的可变区。重链抗体没有轻链,仅由两条重链组成,并通过重链上的单个可变区结合抗原。

相较于传统抗体,单域抗体具有多个优势,包括亲合力高(nm-pm)、特异性强,分子量小等,并且可在极端温度与ph条件下保持稳定。此外,单域抗体可以高质量稳定生产,避免了传统抗体的批次间差异问题。

绿色荧光蛋白(gfp)广泛应用于蛋白定位和蛋白动力学分析。anti-gfpagarosebeads提供快速有效的一步免疫沉淀,可以从细胞和组织中特异的分离gfp标记的目标蛋白及其相互作用因子。分离产物可用于核酸分析,蛋白分析,质谱分析,酶活检定等后续生物物理化学分析。

适用于多种生化反应分析:

1. immunoprecipitation (ip) / co-ip

2. mass spectrometry

3. enzyme activity measurements

4. chip / rip analysis

9楼:匿名用户

免疫共沉淀解决不了你的需求,共沉淀下来的未知蛋白你怎么检测呢,这种目的的研究应该用酵母双杂交比较有针对性