流式细胞仪检测细胞周期图怎么看,流式细胞仪测细胞周期图怎样分析

2020-12-09 12:23:28 字数 4338 阅读 2585

1楼:匿名用户

这个要根据是dna单染还是dna+核苷酸模拟物双染来区别。你的图呢?

流式细胞仪测细胞周期图怎样分析

2楼:潇洒的热心网友

(1)细胞

培养bai

取对数生长du

期的细胞,按1x106个/ml以1ml体积zhi接种dao于6孔板内

。培养24h后,加入版不权同浓度样品。在37 ℃、5 % 的co2恒温箱中培养24h后终止。

(2)细胞固定

胰酶消化并离心收集细胞(800rpm/min),弃上清,用预冷pbs洗细胞两次,加入预冷70%乙醇, -20℃固定保存。

(3) 细胞染色

离心收集细胞(800rpm/min),以1ml的pbs洗细胞一次,加入500ulpbs含50ug/ml溴化乙锭(pi),100ug/ml rnase a, 4℃避光孵育20分钟。

(4)检测

以标准程序用流式细胞仪检测,汞激发波长488nm,计数8千个细胞,结果用软件winmdi version 2.9分析。

流式细胞仪检测细胞周期dna含量结果图怎样分析和说明

3楼:匿名用户

流式细胞仪检测细胞周期dna含量结果图怎样分析和说明已经做完流式,看到结果却不知该怎样分析了。我用的是annexinv-fitc 凋亡试剂盒 ,annexinv/pi双染检测细胞凋亡。请教各位,凋亡散点图中第1,2,4象限到底分别代表什么细胞?

手里的资料说法都不相同。试剂盒说明书:1代表细胞收集过程中机械性损伤的细胞,2 代表继发性坏死细胞,4代表凋亡细胞。

有资料说:1代表坏死细胞,2代表晚期凋亡细胞,4代表早期凋亡细胞。我就不明白了,既然是凋亡,就算是晚期,细胞膜也会破坏?

还有的认为,2象限代表晚期凋亡和继发性坏死的细胞。

我用的是美国beckman-coulter公司试剂盒,它的说明说上就是这么写的:

quadrant 3:viable cellsquadrant 4:apoptotic cellsquadrant 2:secondary necrotic cells

急求流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡的结果图6张! 50

4楼:匿名用户

你是要这些图来伪造数据吧。我看还是老老实实的做实验吧。细胞周期和凋亡用流式细胞仪做都很简单,全部试验1-2天就全部搞定了。

做研究还是要诚实为大

5楼:缘起缘灭

这没什么好参考bai价值的啊,你做不du

同的细胞出来的zhi**差异很大的,我做过dao

心脏和肝脏的,就内差别很大。容而且你做的染色和处理也是前提。一般凋亡小体是能看出来的,就是细胞周围有一些很透明的小泡。

这是张网络上的图。做流式细胞的单位并不多,很少会有人敢把图给你的,除非是仪器公司的样本图

如何看流式细胞周期结果图?

6楼:匿名用户

博凌科为解答:流式细胞术在许多研究生课题中常用到,但对其结果的分析却不是很清楚。在此收集点相关资料并以实验中的一张**为例,大家共同学习。

图中白色箭头及尾部g1,g2,s是我用ps加上去的,方便讨论。流式细胞术分析细胞周期结果示图 首先来认识下图:1、纵坐标cell number:

即计数到的有效细胞数;2、横坐标dna content:即dna量,为什么用dna量来区别各周期我们等下再讲;3、g1、g2、s三期在上图已经用箭头标示;4、右侧数字含义:mean g1=195.

4即g1期dna含量平均值为195.4;%g1=73.6即g1期细胞数占总数的73.

6%;以此类推关于结果的具体分析我们会在接下来一起学习讨论。主要从细胞周期的角度看各参数的意义:1、细胞周期指由细胞**结束到下一次细胞**结束所经历的过程,所需的时间叫细胞周期时间。

可分为四个阶段(见图):① g1期(gap1),指从有丝**完成到期dna复制之前的间隙时间;② s期(synthesis phase),指dna复制的时期;③ g2期(gap2),指dna复制完成到有丝**开始之前的一段时间;④ m期又称d期(mitosis or division),细胞**开始到结束。细胞周期图示 2、从增殖的角度来看,可将高等动物的细胞分为三类:

①连续**细胞,在细胞周期中连续运转因而又称为周期细胞,如表皮生发层细胞、部分骨髓细胞。②休眠细胞暂不**,但在适当的刺激下可重新进入细胞周期,称g0期细胞,如淋巴细胞、肝、肾细胞等。③不**细胞,指不可逆地脱离细胞周期,不再**的细胞,又称终端细胞,如神经、肌肉、多形核细胞等等。

细胞周期的时间长短与物种的细胞类型有关,如:小鼠十二指肠上皮细胞的周期为10小时,人类胃上皮细胞24小时,骨髓细胞18小时,培养的人了成纤维 细胞18小时,cho细胞14小时,hela细胞21小时。不同类型细胞的g1长短不同,是造成细胞周期差异的主要原因。

3、流式细胞结果图各参数的意义:常用的流式细胞术分析细胞周期的方法是依据细胞dna含量(横坐标)来分析的:g1期:

细胞dna复制还没有开始,也是dna含量最少的,即流式检测结果图的第一个峰;s 期:细胞开始复制,到完成复制,是一个一倍dna到二倍dna的过程,在流式结果图中显示期跨度特别大(第二个不高但很宽的峰);g2期:dna复制完成至**的一段时间,此时细胞内含二倍dna,在流式结果图中的第二个峰;m期:

细胞**过程,此时细胞内也是二倍dna,用dna含量的方法是无法与g2期分开,所以有第三峰明显升高时报告:g2/m期阻滞。

7楼:sks精品本本

g1期 s期 g2期各占的比例啊

流式细胞仪检测细胞周期四个直方图怎样建立

8楼:匿名用户

对于pi单染的细胞周期,只需要一个直方图,而对于brdu/edu+pi双染的,只要做散点图。没有哪个需要四个直方图的。

你问的到底是什么?贴个图来看看,会比较明白

流式细胞仪观察细胞周期样品怎样准备

9楼:匿名用户

根据你所购买的试剂盒而定,一般是先用70%乙醇先固定,然后加rna酶和pi,半个小时左右上内机检测就可以了.需要注意容的就是加酒精固定的时候要用四度预冷的酒精,缓慢的加,边加边晃动细胞,避免细胞黏连在一起.

(1)细胞培养

取对数生长期的细胞,按1x106个/ml以1ml体积接种于6孔板内。培养24h后,加入不同浓度样品。在37 ℃、5 % 的co2恒温箱中培养24h后终止。

(2)细胞固定

胰酶消化并离心收集细胞(800rpm/min),弃上清,用预冷pbs洗细胞两次,加入预冷70%乙醇, -20℃固定保存。

(3) 细胞染色

离心收集细胞(800rpm/min),以1ml的pbs洗细胞一次,加入500ulpbs含50ug/ml溴化乙锭(pi),100ug/ml rnase a, 4℃避光孵育20分钟。

(4)检测

以标准程序用流式细胞仪检测,汞激发波长488nm,计数8千个细胞,结果用软件winmdi version 2.9分析。

流式细胞仪测定细胞周期各时相的原理和基本步骤(不用说具体使用的量)

10楼:匿名用户

在细胞培养液中加入模拟核苷酸edu (比较老的方法也可以用brdu)。培养一小时 后,更换为正常的培养液继续培养。模拟核苷酸可以像天然核苷酸一样被细胞摄取并整合入新合成的dna。

培养一段时间后(一般小于一个细胞周期),固定细胞。根据所使用模拟核苷酸的不同,使用不同的方法。edu,改变缓冲液的ph值,就会发出荧光。

而brdu则需用荧光抗体识别,需要对细胞膜和核膜进行通透处理。

再加入pi对dna染色。

在二维坐标图上,横坐标设为线性pi荧光强度,纵坐标设为模拟核苷酸的荧光强度(log)。

典型的图就像下面一样:

g1, g2 和s期就按照图中的划分来做。g1期的细胞没有新合成dna,所以brdu信号是阴性,而pi的信号位于1倍体期。s期是正在合成dna,所以brdu都是阳性。

g2期是已经合成好了2倍的dna,所以位于2倍体期,信号是g1期的一倍。这个图中,g1 pi信号是300, g2就是600.

流式细胞周期结果 怎么分析

11楼:匿名用户

细胞周期至少有两种做法,最常见的如下图分析:

这个是brdu和7-aad方法检测细胞周期。红色的gate就是g1期,绿色的就是s期,橙色的就是g2/m期。brdu, pi, 或者edu方法和这个一样分析

如果单用pi等dna染料染色,需要专业软件来分析计算了。

比如这个图,是dna染料单染,其中粉色部分是g1期,黄色部分是s期,绿色部分是g2/m期。中间的分布一般是通过flowjo这样的软件计算自动生成的。

流式细胞仪检测图怎么看flowjo

1楼 匿名用户 flowjo可以读取fcs格式的文件,一般的流式细胞仪都产生这个格式的文件。把fcs文件导入flowjo后,双击导入的文件,默认打开的是fsc,ssc 点状图,你可以根据具体的使用更换坐标,或者设定gate 怎么使用flowjo分析凋亡图 2楼 要看你是什么bai 染料标记了例如临床...

PI染色流式细胞仪结果图分析,只是看细胞凋亡,多谢

1楼 匿名用户 这个实验有几个问题 在fsc ssc这个图上没有看到明显的细胞群,有可能是pmt电压没有设置好,或者是细胞因为处理的太过,都死了,成为碎片。 第二个图的pi染色,既然你说是要做凋亡检测,目前pi单染看凋亡,只有是测sub g1期。这个横坐标应该设为线性而不是对数。 所以说你整个实验都...

流式细胞仪横坐标pea什么意思

1楼 匿名用户 横坐标代表的是pe的荧光强度。每个细胞在通过激光束的时候,机器会记录一个信号。这个信号可以用一个曲线来标示。 曲线的高度h,代表了最高的强度,曲线的宽度w,代表了通过的时间 细胞的大小 ,曲线下面积a,是这个信号的综合体现。pe a,就是把每个信号的曲线下面积 a 记录作图得到的。 ...