1楼：匿名用户
这个实验有几个问题：
在fsc ssc这个图上没有看到明显的细胞群，有可能是pmt电压没有设置好，或者是细胞因为处理的太过，都死了，成为碎片。
第二个图的pi染色，既然你说是要做凋亡检测，目前pi单染看凋亡，只有是测sub g1期。这个横坐标应该设为线性而不是对数。
所以说你整个实验都设置错了。只有重做了。
怎样利用pi单染色法进行流式细胞仪检测细胞凋亡
2楼：匿名用户
pi 单染并不是很好的看凋亡的方法。一般可以作为早期的筛选实验，因为特异性不好
方法和做细胞周期是一样的，你可以查一下做细胞周期的实验方法，我这里就不贴了。
几点注意：
一定要设置单细胞gate，以防多聚细胞核杂质的干扰rna酶不要忘记了
固定时间半小时足以，千万不要在酒精中过夜，不然会产生大量碎片
怎样利用pi单染色法进行流式细胞仪检测细胞凋亡？
3楼：匿名用户
这个方法看凋亡，主要是看sub-g1期的细胞数量。原理就是凋亡的细胞，由于dna正在降内解，所以含量比正容
常细胞要少。
在以pi荧光强度（代表dna量）为横坐标的柱状图上，一般会有2个峰，g1和g2，g1就是正常细胞，g2是正在**的2倍体。2者间是s期细胞。如果有凋亡的细胞，在g1前会有细胞出现，就是dna含量少于正常细胞的凋亡细胞。
4楼：齐进訾昆琦
基本bai原理
流式细胞仪检测细胞凋亡
du：pi单染色法其原
zhi理主dao
要是根据细胞凋亡时在细胞、亚版细胞和分子水权平上所发生的特征性改变。这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等，其中细胞核的改变最具特征性，主要包括以下几个方面：
1、细胞核的改变
由于凋亡细胞核的改变，造成各种染色体荧光染料对凋亡细胞dna可染性发生改变。研究表明，用各种染色体荧光染料对经固定的凋亡细胞进行染色，其dna可染性降低。许多学者把这种dna可染性的降低认为是凋亡细胞的标志之一。
生物帮上面有详细的介绍，shrna
设计原则
http://****bio1000.***/experiment/hesuan/241863.html
一份流式细胞仪pi单染的读图
5楼：匿名用户
你这些**的坐标没有标记清楚，只有颜色，但没有标记染的是什么，而且看起来不是pi单染的图。
请问流式细胞仪检测细胞凋亡的原理是什么？
6楼：匿名用户
一、原理
在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（ps）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（ps）由脂膜内侧翻向外侧。annexin v是一种分子量为35~36kd的ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此annexin v被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。
将annexin v进行荧光素（egfp、fitc）标记，以标记了的annexin v作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。
碘化丙啶（propidium iodide, pi）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，pi能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将annexin v与pi匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。
二、注意事项
1、必须活细胞检测，不能用能破坏细胞膜完整性的固定剂和穿透剂固定或穿膜。
2、特殊细胞的染色方法：在消化或吹打时，有些细胞（如神经元细胞）很容易受到损伤，导致晚期凋亡或坏死比例非常高，不能反映真实结果。实验的解决方法：
先低速离心，吸取细胞培养板中的液体，留少许液体，加入适量pi和annexin-v染色10min后，将漂浮细胞吸至离心管中，离心洗涤两次，用pbs漂洗贴壁细胞两次，加胰酶消化后将细胞悬液移至另一离心管中，离心洗涤，再与漂浮细胞合并后上流式细胞仪检测。应用该法可降低晚期凋亡和坏死比例，增加早期凋亡细胞比例。
3、由于annexin-v为钙离子依赖的磷脂结合蛋白，只有在钙离子存在的情况下与ps的亲和力才大，因而在消化细胞时，建议一般不采用含edta的消化液。
4、必须设置阴性对照和补偿对照（分别单染）。
7楼：匿名用户
最常用的是annexinv /pi双染检测凋亡，凋亡的细胞膜上的ps（磷脂酰丝氨酸蛋白）会从膜内转移到膜外，我们利用annexinv抗体即可与之结合，有结和得说明这个细胞有凋亡，pi是用来区分死活细胞的，一般认为annexinv阳性，pi阴性的那群细胞即为早期凋亡细胞。
流式细胞仪 fitc-pi双染hek293t细胞 空白组细胞凋亡率很高
8楼：匿名用户
做这个实验，有几个要求：
第一，贴壁培养的细胞要处理的非常轻柔专，不然会导致大量假阳属性（annexin v 阳性）。这个方法最好是由于悬浮培养的，比如淋巴细胞
第二，从图上看，你的电压设置的过低，第一个图阴性无染色的细胞都被压倒一起，而不是位于左下象限的中间。另外，你的阳性对照的细胞，用的是已知确定凋亡死亡的细胞吗？pi的染色看起来很弱
第三，annexin v单染没有强阳性，而且这个细胞群都有右移，这个提示很可能是你处理细胞过头导致的假阳性。
第四，你没有贴fsc-ssc的图。真有凋亡发生，那个图也会有变化的。
第五，你的单染对照因为设置的电压过低，没有做对双色补偿，所以你这个实验数据时无效的。
急求流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡的结果图6张！ 50
9楼：匿名用户
你是要这些图来伪造数据吧。我看还是老老实实的做实验吧。细胞周期和凋亡用流式细胞仪做都很简单，全部试验1-2天就全部搞定了。
做研究还是要诚实为大
10楼：缘起缘灭
这没什么好参考bai价值的啊，你做不du
同的细胞出来的zhi**差异很大的，我做过dao
心脏和肝脏的，就内差别很大。容而且你做的染色和处理也是前提。一般凋亡小体是能看出来的，就是细胞周围有一些很透明的小泡。
这是张网络上的图。做流式细胞的单位并不多，很少会有人敢把图给你的，除非是仪器公司的样本图
流式细胞仪细胞凋亡的结果怎么分析
11楼：匿名用户
流式检测凋亡的方法有好多种，你用的是那个方法呢？
【求助】流式细胞仪检测细胞凋亡结果该怎样分析
12楼：憕
已经做完流
bai式，看到结果却不知该怎du样分析了zhi。我用的是annexinv-fitc 凋亡试剂盒 ，daoannexinv/pi双染检测细版胞凋亡。请教各位权，凋亡散点图中第1，2，4象限到底分别代表什么细胞？
手里的资料说法都不相同。试剂盒说明书：1代表细胞收集过程中机械性损伤的细胞，2 代表继发性坏死细胞，4代表凋亡细胞。
有资料说：1代表坏死细胞，2代表晚期凋亡细胞，4代表早期凋亡细胞。我就不明白了，既然是凋亡，就算是晚期，细胞膜也会破坏？
还有的认为，2象限代表晚期凋亡和继发性坏死的细胞。
我用的是美国beckman-coulter公司试剂盒，它的说明说上就是这么写的：
quadrant 3：viable cellsquadrant 4：apoptotic cellsquadrant 2：secondary necrotic cells
这种说法在园子里还没见过。
应该以说明书为准吗？我很迷茫。请您指点。
流式细胞仪检测图怎么看flowjo
1楼 匿名用户 flowjo可以读取fcs格式的文件，一般的流式细胞仪都产生这个格式的文件。把fcs文件导入flowjo后，双击导入的文件，默认打开的是fsc，ssc 点状图，你可以根据具体的使用更换坐标，或者设定gate 怎么使用flowjo分析凋亡图 2楼 要看你是什么bai 染料标记了例如临床...