ELISA,阴性对照,阳性对照及空白对照是怎么回事

2021-03-06 18:42:50 字数 3840 阅读 9759

1楼:南京金益柏

什么是“有效性”(validity)?要获得准确的检测结果“有效性”评价,就会关系到:为什么要设置“阴性、阳性和空白”等不可缺少的三项对照?

要用什么样的物质担当“阴性、阳性和空白对照(品)”?这“三项对照”如何设置、需要设置几个孔位?获得的测定值如何“认可、取舍与计算”?

随后,又如何依照阳性对照均值(pcx)与阴性对照均值(ncx)的差值(p-n,或n-p)大小做出“试验结果有效性”的最终裁决呢?…等等。

elisa检测,按照试剂说明书要求,每次试验、每块扳上都要设置以下3项对照和用途:

2.阴性对照(品):

(1)阴性对照(品)的概念与要求:所谓阴性对照(品),应当是本项检测试验中采用与待捡物(样品、人用试剂就是人的血清等)具有同源性和同质性,又不含有待检物质,并能客观比较和鉴别处理因素(血清免疫学试验中有特异性抗原与抗体反应)之间的差异。因此,用动物血清或其制品(如牛血清白蛋白等)代替阴性人血清作为对照品,从理论和实践上都是不可取的,弊端甚多,无须细述。

注意:据我所知,国产elisa试剂中,有的厂牌是用动物血清制品稀释配置、或与部分人血清混合配置的;其二,阴性对照读数,并非是“越低越好”。ncx值接近0.

00x水平,这是假象!试想一下,真正采用“阴性人血清”的阴性对照品,ncx值会如此之低吗?举个例子,雅培乙肝六项eia试剂的ncx值,分别为:

0.010(hbsag)、0.027(抗—hbs)、0.

035(hbeag)、1.083(抗—hbe)、1.065(抗—hbc)、0.

045(抗hbc-igm)。生物梅里埃的hiv试剂ncx是0.091。

辨别试剂ncx值是否合理的一个很简单的方法,只要对比大量阴性样本的实际读数就“一目了然”啦!

一个题外插曲:表明elisa试剂内在质量的一个重要统计标志,就是要看:阴性样本的的上限不应当大于、必须小于c.

o.i.=1.

00;反之,阳性样本的的下限不可小于、应当大于c.o.i.

=1.00!

(2)阴性对照(品)分为两类

一是代表受检人血清中并不含有、或方法学灵敏度未能检出的待检物的基准水平,并且是结果判断值(cut off)计算式中决定“是”(阳性)、或“否”(阴性)的唯一可变值。阴性对照值高,导致假阴性;反之,导致假阳性。如:

hbsag、hbeag、抗—hbc等。二是阴性对照设置,在方法学上要求加入指示性定量标准品,如中和剂hbeag,定量hbcag等,用以检测抗—hbe、抗—hbc。或者,选取代表平均水平的正常人血清用作阴性对照,如检测抗—hbc igm。

此类cut off 值计算时,多数均包括阴性和阳性对照值2个可变值。

3.阳性对照(品):

(1)阳性对照(品)的概念与要求:同阴性对照(品),只是采用“精选”的含有待检物质的人血清制备而成。所谓“精选”,就是把收集的阳性人血清经过数种试验进行“筛试”、把含有“干扰性物质”的血清剔除、不用,以避免出现“假阳性”干扰试验结果。

(2)阳性对照(品)设置,也可区分为两种类型与用途:

一是阳性对照主要用于评价该项试验结果是否有效和试验结果的稳定性与可比性。而所设的阳性对照的测量值不列入cut off值计算、但是不可不做。如hbsag、抗—hbs、hbeag等。

二是阳性对照的设置,不仅用于评价试验结果是否有效和试验结果的稳定性与可比性,而且计入cut off的计算。此时的cut off值的含义是代表该标志物在健康(正常)人群中正常值范围的上限。待检样本检测值超过该上限(cut off)时表示有诊断意义。

例如抗—hbe、抗—hbc、抗—hbc igm等。

elisa 试验中 阴性 对照的 目的和作用? 阳性 对照的 目的和作用? 空白的 目的和作用?

2楼:糟油酒丸

阴性对照的目的是排除假阳性,阴性对照就是一个确定肯定已知是阴性的东专西,属如果结果出来这个样本显示阳性了,那你elisa就做出问题了。其他未知样本,数值同它一样或者更低的,全部认为是阴性结果。

阳性对照的目的是排除假阴性,阳性对照就是一个确定肯定已知是阳性的东西,如果结果出来这个样本测不出阳性反应,那你elisa就做出问题了。

空白有的时候可以当作是一种阴性对照。空白的特别意义在于测定实验的背景噪声。也就是说,空白样本被测得到的数值,告诉你未知样本的读数当中,有多少数值是背景,多少是真实特异性的反应所得。

elisa空白和阴性对照这样设置可以吗

3楼:南京金益柏生物科技****

用稀释液代替检测样本、用以观测最终反应的显色“本底”、并用回于酶标仪消除、扣除“本底”,即:答以本底为“零”读取阳性、阴性对照孔和样本检测孔的吸光值(a);或者,在计算阴性对照均值(ncx)、阳性对照均值(pcx)、样本读数的s/c.o.

值时减去空白对照的本底吸光值。

阴性对照,应当是本项检测试验中采用与待捡物具有同源性和同质性,又不含有待检物质,并能客观比较和鉴别处理因素(血清免疫学试验中有特异性抗原与抗体反应)之间的差异。 阴性对照的基本组成也应该尽量与检测样本的组成一致,最好先行检测确定其中不含待检物质。比如,检测人血清标本时,阴性阳性对照同阴性对照,只是采用“精选”的含有待检物质的人血清制备而成。

所谓“精选”,就是把收集的阳性人血清经过数种试验进行“筛试”、把含有“干扰性物质”的血清剔除、不用,以避免出现“假阳性”干扰试验结果。

阳性对照的基本组成应该尽量与检测样本的组成一致,一般阳性对照多以含蛋白保护剂的缓冲液为基质,加入一定量的待检物质。比如,以人血清为标本的测定,阳性对照多用确定的病人血清或者以复钙人血浆为原料加入一定量标准品。仅供参考

夹心法elisa的阴性对照,空白对照有何意

4楼:南京金益柏生物科技****

阴性值一般比较接近空白值,设置阴性对照,主要还是排除所加样品里有没有其他物质对实验干扰引起显色,导致所测值偏高。

elisa法为什么每次实验应做阳,阴性对照?

5楼:

你可以理解为它是系统适应性试验的一部分。如果是定量elisa法的话一般专还要做高中低对照属品。这些对照品是用来证明试验是有效的,可信的。

举个例子,如果你检的样品全是阴性,可能的原因是你忘加二抗了,怎么排除这一原因呢?这就要看阳性对照,如果它是正常的,那么说明没有忘加。结果比较可信

夹心法elisa的阴性对照、空白对照有何意义?

6楼:南京金益柏生物科技****

阴性值一般比较接近空白值,设置阴性对照,主要还是排除所加样品里有没有其他物质对实验干扰引起显色,导致所测值偏高

7楼:小智

阴性对照即为空白对照,你们老师应该问的是阴性与阳性的意义吧?

定性实内验加底物显色后容,在白色背景上直接肉眼观察结果。阴性对照孔应基本无色,阳性对照空呈蓝色,若待测样品空颜色深于阳性对照则其浓度大于阳性对照孔的浓度,若是颜色介于阴性与阳性之间则其浓度也应介于其间。(我们的实验是对afp的检测,其中阳性孔浓度为400ng/ml阴性为20ng/ml,正常人afp含量小于20ng/ml,在试验中应该为阴性)

空白对照组、阴性对照组、阳性对照组怎么设置

8楼:匿名用户

空白对照组:不加来任何源物质,反应显色为bai试剂本身。

阴性du对zhi照组:加入阴性血清(物质)dao反应显色为阴性颜色。

阳性对照组:加入阳性血清(物质)反应显色为阳性颜色。

试验中加入这三组对照。一是用于判断检测结果,而是用于质量控制!

夹心法elisa的阴性对照,空白对照有何意义

9楼:南京金益柏

阴性值一般比较接近空白值,设置阴性对照,主要还是排除所加样品里有没有其他物质对实验干扰引起显色,导致所测值偏高

安慰剂对照与空白对照是一回事吗,安慰剂是什么?

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