1楼:智似岸端
分离肝实质细胞和肝非实质细胞主要是通过灌流方法分离的。灌流完后,低速离心,沉淀为实质细胞,上清为非实质细胞,收集上清就可以获得非实质细胞,在低速离心1-2次就可以分离获得比较纯净的非实质细胞了
如何收集用于western blot等的细胞
2楼:匿名用户
博凌科为解答:1、1 ml的pbs可能溶不了那么多细胞(如果你细胞多的话),所以建议用3 mlpbs,分两管装,离完心后用trizol溶解合成一管2、离心的速度太大了,细胞会死的,建议800 转,5 分钟,一般的细胞都可以离下来3、需要去上清,如果是提rna就用trizol溶解合成一管,然后放在-80度冰箱,如果提蛋白就直接将离心后的细胞放在-80度冰箱。上清对于 提蛋白和rna没什么影响。
还有一点,提rna的东西一定要高压,如果是初次做可以用depc水泡枪头,可以提高作成功的几率。如果操作严格,可以只把要 用的枪头和ep管高压即可。其他的没什么特别的,流程跟你写的是一样的。
3楼:匿名用户
目前在做western blot 不清楚怎么提细胞中的组蛋白怎么提,是用特殊的细胞你的意思就是提取核蛋白,提取核蛋白和提取全蛋白用的裂解液是不一样的。
如何用细胞刮收集细胞
4楼:跨考教育
师兄用的晶安生物细胞刮铲,希望可以帮到您~
5楼:烟火末落
很简单,你轻轻蹭一蹭就可以了。。。
怎样提取上清液用western blot测定上清液中细胞分泌的蛋白
6楼:匿名用户
这个还是有难度的,一般上清里分泌的目的蛋白很少。所以首先建议您用无血清培养基培养你的细胞。 收集上清比较简单,直接把上清收到离心管里,离心一下去掉细胞什么的,再用超滤管浓缩一下上清,不然的话上清还是太稀了。。
请教:用培养的细胞做western
7楼:匿名用户
做western blot需要多少细胞并不是一个固定的值这主要取决于蛋白的表达量,没有一个绝对的量如果做细胞总蛋白的话,至少10的4次方细胞每微升蛋白裂解液。一般可以每泳道取10的5次方细胞每微升蛋白裂解液(即10微升上样)
根据这个数量级,结合western blot结果进行调整即可确认做western blot需要多少细胞