1楼:匿名用户
(1) 利用有色荧光蛋白标记技术进行蛋白定位研究
此法也可称为活细胞定位.把两种具有相互作用的蛋白分别克隆到带有两种不同颜色荧光
蛋白(绿色荧光蛋白或红色荧光蛋白)的载体中,共转染到功能细胞中(一般选用 cos7 细胞)表达带有荧光的融合蛋白.这样,相互作用的两种蛋白就被标上不同的荧光,可以在细胞内用荧光显微镜直接观测.在进行精确细胞定位或共定位时,必须用共聚焦荧光显微镜观测.
因为共聚焦荧光显微镜(相当于医院给病人诊断的 ct)观测的是细胞内一个切面上的颜色.如果在一个切面上在同一区域看到两种颜色,就提示这两种蛋白在该区域内有相互作用.普通荧光显微镜看到的是一个立体图象,无法确定蛋白质共定位现象.
在进行定位或共定位同时,也可以对细胞核进行染色.这样,在细胞中就有三种颜色.细胞核的显色帮助你确定共定位发生的位置.
上面介绍的活细胞定位,其优点是表达的荧光蛋白荧光强,没有背景,观测方便.但缺点
是相互作用的蛋白由于标上荧光蛋白,实际上是两个融合蛋白.融合蛋白的定位结果或共定位结果是否与天然蛋白分布一致,有待于进一步确定.而利用免疫荧光标记技术可以避免这一缺点.
(2) 利用双色或多色染色的免疫荧光技术进行蛋白定位研究
免疫荧光的原理是,首先把细胞进行固定,然后用待检测靶蛋白的抗体(一抗)与细胞内
靶蛋白进行免疫反应,再用荧光素(如 fitc 和 tritc 等)标记的二抗与一抗进行反应.这样就在细胞内形成免疫复合物(靶蛋白----一抗---二抗),结果靶蛋白被标上颜色,然后可用共聚焦荧光显微镜观测定位与共定位结果.
免疫荧光技术最大优点就是可用来检测细胞内源性蛋白的定位及相互作用.当然也可以对
靶细胞进行转染表达目的蛋白,然后标记目的蛋白进行观测.免疫荧光技术的缺点是荧光相对较弱并且背景较高,结果受到干扰,所以这项技术不好掌握.为了结果的可靠性,要求严格设计阳性对照与阴性对照.
(3) 细胞内蛋白动态定位
有时细胞在正常状态下,有相互作用的蛋白在胞内可能暂时分开,没有共定位现象发生.
但是在某一个特定情况下,如细胞受到外界刺激时,细胞本身会产生应急反应,这时暂时分离的蛋白有可能发生相互作用,并产生共定位现象.所以在进行共定位研究时,可根据具体情况具体分析,必要时观测细胞内蛋白动态定位结果.
为什么荧光灯下翡翠玉变成黄色,买了一块翡翠吊坠,为何在荧光灯下看变成黄色了,麻烦懂的帮着看看是不是假货,谢谢
1楼 大理喜洲生态园 真金不怕火炼,真的翡翠经得起考验。翡翠a在荧光灯下不变色,变色的就有问题。希望帮到你,喜欢就给个采纳谢谢!提供参考对比。 2楼 野草铮铮 如果荧光灯下翡翠变色,那就说明你这个翡翠是冲胶的,不是a货。很遗憾的。 3楼 衡水知产顾问 那是因为它不是a货,经过处理了 4楼 为什么全是...
为什么通过镜子能看到对方的像,我不懂为什么我通过镜子可以看到别人的像,别人也可以看到我的像,是什么光路可逆,是哪条光线可逆,我眼 50
1楼 匿名用户 要弄明白这个问题你要知道的知识点有 1。平面镜成像的道理2。无论我们看到什么都是有光线进入我们的眼睛。 对方反射的太阳光 或灯光 射到平面镜上,由于平面镜的反射在镜子里成了像。而反射光射如了你的眼睛,而眼睛又是直线经验。所以就看见了你的像。 这里没办法给你画图,请参考初中物理课本人教...