细胞免疫功能检测常用有哪几种方法

2021-01-13 20:21:51 字数 4846 阅读 6331

1楼:匿名用户

细胞免疫(cmⅰ)是由多种细胞相互

作用的结果。免疫细胞间相互作用导致多种细胞因子的释放。因此细胞功能测定不仅涉及t细胞的数量和功能与包括各类因子活性测定,因此评价机体的细胞免疫功能不仅程序复杂,且很难标准化。

一、迟发型过敏反应的体外检测方法

**试验和接触性过敏的诱发是检测迟发型过敏反应(dth)的两种常用方法。**试验中诱发对曾经使病人致敏的抗原的再次应答,而接触性过敏是测试受者对从未接触过的物质发生致敏的能力。

1.**试验 用**试验诊断dth,常用的抗原有结核菌纯蛋白衍生物(ppd)、腮腺炎病毒、念珠菌素等,在人类试验时在前臂皮内注射少量可溶性抗原,24~48小后,测量红肿硬结的大小,硬结直径大于10mm即被看作为阳性。表明受试者对该病原菌有了一定的细胞免疫能力,若皮试无反应,可用更高浓度的抗原重复试验,若仍无反应即为阴性,需排除皮试技术误差,也可能受试者从未接触过此抗原,也可能由于细胞免疫功能缺损,或由于细胞免疫功能缺损,或由于严重感染(麻疹、慢性播散性结核)造成的无反应性。

2.接触性过敏常应用低分子量化合物如二硝基氯苯(dncb)诱生接触性过敏。化合物与**蛋白质结合而导至dth反应。在动物试验时,初次**上涂抹dncb后间隔7~10天再激发刺激,则**出现即为阳性。

此试验人类已不使用。

二、细胞免疫的体外检测方法

体外检测淋巴细胞的数量和功能,最易采集的是血标本,首先需分离或纯化淋巴细胞,一般使用萄聚糖-泛影葡胺配成比重为1.077的淋巴细胞分层液,当将血液重叠于淋巴细胞分层液之上离心时,由于红细胞(1.092)、多形核白细胞(1.

090)、淋巴细胞(1.070)的比重不同而相互分开。淋巴细胞和单核细胞在血浆和分层液交界处形成一薄层。

仔细分出这一薄层的细胞,其中淋巴细胞占80%,单核细胞占20%,淋巴细胞中t细胞占80%,b细胞占4%~10%,其作为非dt、非b细胞。

1.t细胞计数

(1)e花环法:人类t细胞表面有srbc受体(cd2)能与srbc结合形成玫瑰花环样结构,将经分层液分离现的rbm悬液与srbc在含有血清的平衡盐水中混合,经37℃培养5~10分钟放4℃过夜,取细胞悬计数,外周血淋巴细胞中约70%~80%淋巴细胞结成花环即为t细胞。目前此方法已用来分离t细胞,而不用做t细胞计数。

(2)用单克隆抗体计数t细胞:将人的pbm分成三等份,分别用小鼠抗人cd3、cd4和cd8的单克隆抗体作第一抗体与细胞结合,再用fitc标记的兔抗小鼠igg抗体作第二抗体进行间接免疫荧光染色,在荧光显微镜下或流式细胞仪检测结果,在pbm中被cd3抗体染上荧光的细胞称为cd3 细胞即总t细胞。正常人在pbm中t细胞占70%~80%。

正常人的cd4 细胞和cd8 细胞之和应与cd3 细胞数一致。cd4 细胞与cd8 细胞的比值正常人约为2/1而艾滋病患者则比值小于1.7。

2.t细胞活化试验 t细胞能被非特异的物质称为有丝**原所激活而向淋巴母细胞转化。t细胞转化过程可伴随有dna、rna、蛋白质的合成增加,最图导致细胞**。在光学显微镜下可计数转化后的淋巴细胞数,也可用氚标记的胸腺嘧啶核苷(3htdr)掺入正在**的淋巴细胞,用液闪测定仪检查掺入正在**的淋巴细胞,用液测量仪检查掺入的3h-tdr的多少确定淋巴细胞转化率。

最近有一种不用同位素,又可用仪器测量的淋巴细胞增殖反应的检查法,称为mtt检测法,mtt是一种甲氮唑盐,它是细胞线粒体脱氢酶的底物,细胞内的酶可将mtt分解产生蓝黑色甲(fromazan)产物。该产物的多少与活性细胞数正相关。结果可用酶标检测仪(595mm)测量汇丰银行密度,做为mtt法的检查指标。

此法的结果与3h-tdr掺入法平行,并能反应试验中的活细胞数。

3.细胞毒试验 tc细胞、nk细胞、lak细胞、til细胞对其靶细胞有直接的细胞毒(杀伤)作用。常用的栓测细胞毒效应的方法是51cr-na2cro4盐水溶液与靶细胞胞混合,于37℃培养1小时左右,51cr即可进入靶细胞,与胞浆蛋白结合,洗去游离的51cr后,即可得到51cr标记的靶细胞,将待检细胞毒性的细胞与51cr标记的靶细胞混合(比例约为50:1或100:

1)靶细胞被杀伤越多,释放到上清液中的液游离的51cr越多,且不能被其他细胞吸收。用γ射线测量仪检测上清液中的cpm值,即可计算出待检细胞杀伤活性的高低。

细胞毒试验检测tc细胞效应功能是否健全,及经igg介导的adcc效应,或nk细胞在抗肿瘤免疫中的作用是有意义的。

4.混合淋巴细胞的反应(mir) 是体外研究t细胞的较好的方法,双向mlr常被用来筛选骨髓移植的供体。来自不同供体的淋巴细胞分别与病人的淋巴细胞混合培养4~5天,在最后8小时掺入51tdr掺入法测t细胞的反应性。或用细胞毒法观察受刺激的t细胞与活的靶细胞混合(靶细胞来自与刺激细胞相同的个体)如果t细胞受刺激后产生了细胞毒t细胞,可杀死活的细胞,根据靶细胞释放51cr的多少算出t细胞移动抑制因子)和lif(白细胞移动抑制因子)来评估细胞免疫功能。

近年来应用测定il-2的免疫酶技术,操作简单,并能定量以取代了mif和lif的测定。单个核细胞与**原一起培养24小时,然后测定清液中的il-2活性。在细胞免疫功能缺损时,特别是aids病人,il-2分泌明显降低。

而有些疾病,如多发性硬化、类风湿关节炎、移植排斥反应等病人体内血清中il-2水平升高,表明病人t细胞活性增高。发生移植排斥反应的病人尿中il-2也可升高。

也可用酶联免疫吸附试验测定各种体液中活化的t细胞脱落的il-2受体(cd25),一般来说il-2的水平和il-2受体水平是平行的,il-2和il-2受体的检测可用于对某些疾病的监测,如移杆排斥、自身免疫病以及接受免疫抑制**的病人。

对体外培养的细胞进行细胞因子产生能力检测是检查细胞培养上清液中细胞因子的生物活性或抗原性。现已可用核酸杂交技术,即从组织中或细胞中提取rna,与同位素或酶标记的该种细胞因子的cdna探针作分子杂交试验,即印迹(dot blotting)或northern印迹,若查出有某种因子的mrna存在,即说明该细胞在所处培养条件下有产生某种细胞因子的能力。

免疫学检验常用技术有哪些

2楼:科学普及交流

以下是几种常用的免疫学技术:

1.免疫荧光技术

免疫荧光技术是利用荧光素标记的抗体(或抗原)检测组织、细胞或血清 中的相应抗原(或抗体)的方法。由于荧光抗体具有安全、灵敏的特点,因此已 广泛应用在免疫荧光检测和流式细胞计数领域。根据荧光素标记的方式不同,可 分为直标荧光抗体和间标荧光抗体。

间标荧光抗体中一抗并不直接连接荧光素, 而是先将一抗结合到蛋白,然后带有荧光素的二抗再结合至一抗。通过二抗的结 合,能将信号进行放大,因此能在一定程度上提高检测的灵敏度,但是随之带来 的高背景也降低了检测的特异性。近年来,随着荧光素和荧光检测技术的不断进 步,荧光检测的灵敏度已经接近同位素检测的水平,直接标记的荧光抗体逐渐取 代间接标记抗体。

这些标记了荧光素的抗体直接结合至抗原,大大提高了检测的 特异性,使检测的结果更加准确可靠。荧光检测技术的发展,使得免疫荧光技术 在传染病诊断上有广泛的用途,如在细菌、病毒、螺旋体感染的疾病,检查igm 抗体,做为近期接触抗原的标志。利用单克隆荧光直接标记抗体鉴定淋巴细胞的 亚类。

通过流式细胞仪,针对细胞表面不同抗原,可以同时使用多种不同的荧光 抗体,对同一细胞进行多标记染色。

2.放射免疫检测

放射免疫检测技术是目前灵敏度最高的检测技术,利用放射性同素标记抗 原(或抗体),与相应抗体(或抗原)结合后,通过测定抗原抗体结合物的放射 性检测结果。放射性同位素具有pg 级的灵敏度,且利用反复**的方法可对痕 量物质进行定量检测。但放射性同位素对人体的损伤也限制了该方法的使用。

3.酶联免疫吸附试验(elisa)

酶联免疫检测是目前应用最广泛的免疫检测方法。该方法是将二抗标记上 酶,抗原抗体反应的特异性与酶催化底物的作用结合起来,根据酶作用底物后的 显色颜色变化来判断试验结果,其敏感度可达ng 水平。常见用于标记的酶有辣 根过氧化物酶(hrp)、碱性磷酸酶(ap)等。

由于酶联免疫法无需特殊的仪器, 检测简单,因此被广泛应用于疾病检测。常用的方法有间接法、夹心法以及bas -elisa。间接法是先将待测的蛋白抱被在孔板内,然后依次加入一抗、标记了 酶的二抗和底物显色,通过仪器(例如酶标仪)定量检测抗原。

这种方法操作简 单但由于高背景而特异性较差。目前已逐渐被夹心法取代。夹心法利用二种一抗 对目标抗原进行捕获和固定,在确保灵敏度的同时大大提高了反应的特异性。

近 年来,抗原的定量检测技术也不断推陈出新。近年来,在夹心法elisa 的基础上, 开发了多抗原检测试剂盒,能同时检测微量液相样本中多个抗原含量。这项技术 的应用大大缩短了诊断的时间,提高诊断的可靠性和及时性。

4.免疫金胶体技术

胶体金技术经过30 多年的发展到现在已日趋成熟,该方法是将二抗标记上 胶体金颗粒,利用抗原抗体间的特异性反应,最终将胶体金标记的二抗吸附于渗 滤膜上,此方法简单,快速,广泛应用于临床筛查。

3楼:果阿果的果

血清学技术、免疫标记技术

影响抗原免疫的因素如下:

一:抗原因素:

1:异质性 (1)异种物质 (2)同种异体物质 (3)自身物质。

2:抗原分子的理化性质 (1)分子量的大小 (2)一定的化学组成和结构,一般而言,蛋白脂类物质抗原性较强,其中含有芳香族氨基酸的蛋白质,其免疫原性多较强;多糖的免疫原性原性较蛋白质弱;核酸的免疫原性很弱,但与蛋白质载体连接后其免疫原性明显增加;脂类一般无免疫原性。(3)分子构象与易接近性 (4)物理状态。

二:机体(宿主)因素

1:遗传因素;

2:年龄、性别与健康状态;

3:抗原的剂量及进入机体的途径。

三:抗原的特异性与交叉反应

抗原表位:又称抗原决定簇,是指存在于抗原表面的,能与tcr/bcr或抗体特异性结合、决定抗原特异性的特殊化学基团。

四:抗原的种类

不完全抗原:仅有免疫反应性而无免疫原性的物质称为不完全抗原,又称半抗原,多为一些简单的小分子物质、药物等,如某些油漆、染料、化妆品和青霉素、吗啡等。半抗原若与大分子蛋白质或非抗原性的多聚赖氨酸等载体交联或结合也可称为完全抗原。

五:常见的抗原

异嗜性抗原:是一类与种属特异性无关的存在于人、动物、植物和微生物之间的共同抗原

细胞免疫的生物学功能有哪些,细胞免疫有哪些生物学效应?

1楼 匿名用户 这两种免疫属于体内的特异性免疫。细胞免疫在首次接触外界抗原后,b细胞增殖分化成为浆细胞分泌抗体,对抗体液循环中的抗原,结合成抗原抗体复合物被吞噬细胞吞噬,同时形成记忆b细胞,对二次抗原入侵免疫效率提升。当抗原变成细胞内抗原 如 细胞免疫有哪些生物学效应? 2楼 谭银光 细胞免疫分为三...

免疫球蛋白有哪几种各有什么作用,免疫球蛋白的种类及生理功能有哪些?

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