1楼：匿名用户
法1：称取硫酸铜（cuso4.5h2o）34.
7g溶于500ml蒸馏水中。静置一天后过滤。b ：
称取酒石酸钠钾173g加氢氧化钠50g共同溶于蒸馏水并稀释至500ml,静置二天后过滤
法2：1)取硫酸铜结晶 6.93 g.加水使溶解成 100 ml.
(2)取酒石酸钾钠结晶 34.6 g 与 氢氧化钠 10 g.加水使溶解成 100 ml.
法3：称取无水na2co340g，溶于100ml蒸馏水中,溶后加酒石酸7.5g若不易溶解可稍加热，冷却后移入1000ml的容量瓶中。
另取纯结晶cuso4 4.5g溶200ml蒸馏水中，溶后再将此溶液倾入上述容量瓶内，加蒸馏水至1000ml刻度，放置备用。
法3最好。
碱性铜试剂是测量微量还原性糖的重要方法。
在测定酶活力时,为什么对试剂配置、实际用量、血清用量、温度、ph、作用时间均需严格控制?求认真解答
2楼：时玉娟娟
淀粉酶活力的测定
一、目的
学习和掌握测定淀粉酶（包括α-淀粉酶和β-淀粉酶）活力的原理和方法.
二、原理
淀粉是植物最主要的贮藏多糖,也是人和动物的重要食物和发酵工业的基本原料.淀粉经淀粉酶作用后生成葡萄糖、麦芽糖等小分子物质而被机体利用.淀粉酶主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶两种.
α-淀粉酶可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖,同时使淀粉的粘度降低,因此又称为液化酶.β-淀粉酶可从淀粉的非还原性末端进行水解,每次水解下一分子麦芽糖,又被称为糖化酶.淀粉酶催化产生的这些还原糖能使3,5-二硝基水杨酸还原,生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸,其反应如下：
淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比.用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线,用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量,以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力.
淀粉酶存在于几乎所有植物中,特别是萌发后的禾谷类种子,淀粉酶活力最强,其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶.两种淀粉酶特性不同,α-淀粉酶不耐酸,在ph3.6以下迅速钝化.
β-淀粉酶不耐热,在70℃15min钝化.根据它们的这种特性,在测定活力时钝化其中之一,就可测出另一种淀粉酶的活力.本实验采用加热的方法钝化β-淀粉酶,测出α-淀粉酶的活力.
在非钝化条件下测定淀粉酶总活力（α-淀粉酶活力+β-淀粉酶活力）,再减去α-淀粉酶的活力,就可求出β-淀粉酶的活力.
三、实验材料、主要仪器和试剂
1．实验材料
萌发的小麦种子（芽长约1cm）
2．仪器
（1）离心机
（2）离心管
（3）研钵
（4）电炉
（5）容量瓶：50ml×1, 100ml×1
（6）恒温水浴
（7）20ml具塞刻度试管×13
（8）试管架
（9）刻度吸管：2ml×3, 1ml×2, 10ml×1
（10）分光光度计
3．试剂（均为分析纯）
（1）标准麦芽糖溶液（1mg/ml）：精确称取100mg麦芽糖,用蒸馏水溶解并定容至100ml.
（2）3,5-二硝基水杨酸试剂：精确称取3,5-二硝基水杨酸1g,溶于20ml 2mol/l naoh溶液中,加入50ml蒸馏水,再加入30g酒石酸钾钠,待溶解后用蒸馏水定容至100ml.盖紧瓶塞,勿使co2进入.
若溶液混浊可过滤后使用.
（3）0.1mol/l ph5.6的柠檬酸缓冲液
a液：（0.1mol/l 柠檬酸）：称取c6h8o7·h2o 21.01g,用蒸馏水溶解并定容至1l.
b液：（0.1mol/l柠檬酸钠）：称取na3c6h5o7·2h2o 29.41g,用蒸馏水溶解并定容至1l.
取a液55ml与b液145ml混匀,既为0.1mol/lph5.6的柠檬酸缓冲液.
（4）1%淀粉溶液：称取1g淀粉溶于100ml 0.1mol/l ph5.6的柠檬酸缓冲液中.
四、操作步骤
1．麦芽糖标准曲线的制作
取7支干净的具塞刻度试管,编号,按表1加入试剂：
表1 麦芽糖标准曲线制作
试 剂管 号12
3456
7麦芽糖标准液（ml）
00.2
0.61.0
1.41.8
2.0蒸馏水（ml）
2.01.8
1.41.0
0.60.2
0麦芽糖含量（mg）
00.2
0.61.0
1.41.8
2.03,5-二硝基水杨酸（ml）
2.02.0
2.02.0
2.02.0
2.0摇匀,置沸水浴中煮沸5min.取出后流水冷却,加蒸馏水定容至20ml.
以1号管作为空白调零点,在540nm波长下比色测定光密度.以麦芽糖含量为横坐标,光密度为纵坐标,绘制标准曲线.
2．淀粉酶液的制备
称取1g萌发3天的小麦种子（芽长约1cm）,置于研钵中,加入少量石英砂和2ml蒸馏水,研磨匀浆.将匀浆倒入离心管中,用6ml蒸馏水分次将残渣洗入离心管.提取液在室温下放置提取15～20min,每隔数分钟搅动1次,使其充分提取.
然后在3 000r/min转速下离心10min,将上清液倒入100ml容量瓶中,加蒸馏水定容至刻度,摇匀,即为淀粉酶原液,用于α-淀粉酶活力测定.
吸取上述淀粉酶原液10ml,放入50ml容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,摇匀,即为淀粉酶稀释液,用于淀粉酶总活力的测定.
2． 酶活力的测定：取6支干净的试管,编号,按表2进行操作.
表2 酶活力测定取样表
操 作 项 目 α淀粉酶活力测定 β-淀粉酶活力测定
ⅰ- 1 ⅰ- 2 ⅰ- 3 ⅱ- 4 ⅱ- 5 ⅱ- 6
淀粉酶原液（ml） 1.0 1.0 1.0 0 0 0
钝化β-淀粉酶 置70℃水浴15min,冷却
淀粉酶稀释液（ml） 0 0 0 1.0 1.0 1.0
3,5-二硝基水杨酸（ml） 2.0 0 0 2.0 0. 0
预保温 将各试管和淀粉溶液置于40℃恒温水浴中保温10min
1%淀粉溶液（ml） 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
保温 在40℃恒温水浴中准确保温5min
3,5-二硝基水杨酸（ml） 0 2.0 2.0 0 2.0 2.0
将各试管摇匀,显色后进行比色测定光密度,记录测定结果,操作同标准曲线.
五、结果计算
计算ⅰ- 2、ⅰ- 3光密度平均值与ⅰ- 1光密度之差,在标准曲线上查出相应的麦芽糖含量（mg）,按下列公式计算α- 淀粉酶的活力.
计算ⅱ- 2、ⅱ- 3光密度平均值与ⅱ- 1光密度之差,在标准曲线上查出相应的麦芽糖含量（mg）,按下式计算（α＋β）淀粉酶总活力.
β-淀粉酶活力＝（α＋β）淀粉酶总活力－α-淀粉酶活力
六、附 注
（1）样品提取液的定容体积和酶液稀释倍数可根据不同材料酶活性的大小而定.
（2）为了确保酶促反应时间的准确性,在进行保温这一步骤时,可以将各试管每隔一定时间依次放入恒温水浴,准确记录时间,到达5min时取出试管,立即加入3,5-二硝基水杨酸以终止酶反应,以便尽量减小因各试管保温时间不同而引起的误差.同时恒温水浴温度变化应不超过±0.5℃.
（3）如果条件允许,各实验小组可采用不同材料,例如萌发1d、2d、3d、4d的小麦种子,比较测定结果,以了解萌发过程中这两种淀粉酶活性的变化.
推荐**：
http://****estarch.***/news/26/news_6498.html
http://****bbioo.***/bio101/2006/7201.htm
http://****scuta.edu.**/yuanxi/bylw/syzd/srdsyzdsy18.htm
酶的最适温度一定吗 为什么说它与酶作用时间长短有关？
3楼：§画兰
温度影响酶的活性。
固然在最适温度上线，酶的活性降低，作用时间变长。
测定酶活力需要控制哪些条件
4楼：
测定酶力必须注意几点：
（1）酶促反应程初段间内反应速度与酶浓度比随着反应间延反应速度即逐渐降低
（2）要规定定反应条件间、温度、ph等并酶测定程保持些反应条件恒定温度超规定温度士1℃ph应恒定
（3）配制底物浓度应准确且足够底物液应加入抑制该酶力防腐剂并保存于冰箱防止底物解
（4）标本要新鲜由于绝数酶久置力降低标本及测定应保存于冰箱用血浆应考虑抗凝剂酶反应影响些酶血细胞、血板浓度比血清高采血、离血清应注意防止溶血白细胞破裂
（5）测定程所用仪器应绝清洁应含酶抑制物酸、碱、蛋白沉淀剂等
5楼：卓秀梅辛致
1．底物浓度
除选择适合的底物外，在实际应用中更多考虑的是底物浓度。由于[s]与反应速度v成双曲线关系，在酶活性测定时，要求[s]达到一定水平以保证酶活性与酶量成正比。
2．酶浓度
在反应条件一定时，酶浓度与反应速度成正比。按照中间产物学说，只有[s]>>[e]时，酶才能被底物分子饱和，反应速度才能达到最大值。因此当标本酶活力过高时，应将标本适当稀释后再加以测定。
3．温度
不同的酶最适温度可以不同，多数酶的最适温度在37～40℃。高于或低于最适温度,酶活性都降低。
4．离子强度和ph值
在最适ph时，酶的活性最强，高于或低于最适ph，酶的活性都降低。
5辅助因子
某些金属离子和维生素类辅酶是结合酶的辅助因子。这些酶离开它们的辅基或辅酶就不能表现活性，因此在酶活性测定时，就要保证辅基或辅酶的供给。
6．激活剂
有些酶在有激活剂存在时才有活性或活性较高。因此在酶活性测定时也，要满足酶对激活剂的需要。
7．抑制剂
酶的抑制可分为不可逆抑制和可逆抑制，后者又可分为竞争性抑制和非竞争性抑制。重金属离子和砷化物对巯基酶的抑制、有机磷对羟基酶的抑制属于不可逆抑制；丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制、磺胺类药物对二氢叶酸合成酶的抑制属于竞争性抑制；哇巴因对na+，k+-atp酶的抑制属于非竞争性抑制.抑制剂使酶活性降低,在测定酶活性时，应避免抑制剂的影响。
6楼：闻时芳邓娴
最适测定条件与条件的优化
国际临床化学联合会（ifcc）和中华医学会检验分会均推荐选择在“最适条件”下测定酶活性浓度。所谓最适条件是指能满足酶促反应速度达到最大反应速度所需的条件。包括：
①合适的底物和最适底物浓度；②理想的缓冲液种类和最适离子强度；③反应液的最适ph；④最适反应温度；⑤合适的辅因子、激活剂浓度；⑥若是酶偶联反应，还需要确定指示酶和辅助酶的用量；⑦合理的测定时间，包括延滞期尽量短暂，有足够的线性期；⑧合适的样品与反应试剂的比例；⑨足够的检测范围；⑩尽量去除各种抑制剂等。
1．底物浓度
除选择适合的底物外，在实际应用中更多考虑的是底物浓度。由于[s]与反应速度v成双曲线关系，在酶活性测定时，要求[s]达到一定水平以保证酶活性与酶量成正比。[s]范围一般选择在10～20km为宜，此时反应速度基本达到最大反应速度，测定的误差在可接受范围。
2．酶浓度
在反应条件一定时，酶浓度与反应速度成正比。按照中间产物学说，只有[s]>>[e]时，酶才能被底物分子饱和，反应速度才能达到最大值。因此当标本酶活力过高时，应将标本适当稀释后再加以测定。
3．温度
不同的酶最适温度可以不同，多数酶的最适温度在37～40℃，高于或低于最适温度，酶活性都降低。目前，酶活性的测定温度尚未统一，但常规实验室多使用37℃。温度对酶促反应的影响程度通常用温度系数(q10)表示。
温度系数指温度每升高10℃，化学反应速度增加的倍数。q10通常为l～2。由温度系数得知，温度的变化对酶活性有着重要影响，因此要求酶活性测定要在恒温条件下进行，温度波动要控制在±1℃。
4．离子强度和ph值
在最适ph时，酶的活性最强，高于或低于最适ph，酶的活性都降低，多数酶的最适ph在5～8之间。在测定酶活性时，要求缓冲液具有足够的缓冲容量，以便使ph值保持稳定。血浆或血清标本含有多种缓冲溶质，具有较强的缓冲能力。
为了防止血浆或血清标本缓冲溶质对反应液酸碱度的影响，使ph不致偏离设定值，标本用量不宜过大，血浆或血清标本体积／反应液体积≤1／10为宜。
5辅助因子
某些金属离子和维生素类辅酶是结合酶的辅助因子，例如zn2+是羧基肽酶的辅基，mo6+是黄嘌呤氧化酶的辅基，nadh是不需氧脱氢酶的辅酶。这些酶离开它们的辅基或辅酶就不能表现活性，因此在酶活性测定时，就要保证辅基或辅酶的供给。
6．激活剂
有些酶在有激活剂存在时才有活性或活性较高，例如mg2+是肌酸激酶的激活剂，cl-是淀粉酶的激活剂。因此在酶活性测定时，也要满足酶对激活剂的需要。
7．抑制剂
酶的抑制可分为不可逆抑制和可逆抑制，后者又可分为竞争性抑制和非竞争性抑制。重金属离子和砷化物对巯基酶的抑制、有机磷对羟基酶的抑制属于不可逆抑制；丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制、磺胺类药物对二氢叶酸合成酶的抑制属于竞争性抑制；哇巴因对na+，k+-atp酶的抑制属于非竞争性抑制。抑制剂使酶活性降低，在测定酶活性时，应避免抑制剂的影响。
综上所述，测定酶活性时，最适条件的选择应该遵循最适底物浓度、最适温度、最适ph值、满足辅助因子和激活剂、避免抑制剂的原则。