1楼：起始的结尾
第一法大肠杆菌mpn 计数
操作步骤
6.1、 样品的稀释
2楼：匿名用户
楼上的回答很专业！！厉害
大肠杆菌的检测方法
3楼：就酱挺好
多管发酵法。
多管发酵法是一种检测水体中大肠杆菌的传统方法，这种方法是在44.5℃的含有荧光底物的培养基上连续培养24h，而后能产生分解荧光底物——葡萄糖醛酸酶，从而释放出荧光产物，进而使培养基在紫外光照射下产生特征荧光。此方法可被用来对原样品中的菌落数作统计学估计。
在单料或双料乳糖胆盐发酵管内发酵，分离培养试验，利用伊红美蓝培养皿分离，接着是在乳糖发酵管中进行二次发酵，最后通过芽孢染色、革兰氏染色、显微镜观察等来完成。多管发酵法对试验条件要求不高，成本低，但是检测时间较长，容易受其他条件干扰，进而影响到测定结果的精确度。
4楼：点点星光带晨风
一、细菌的分离鉴定
1、标本：肠道外感染取中段尿、血液、脓液、脑脊液等，腹泻者取粪便。
2、分离培养与鉴定：粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培养基。血液需先经肉汤增菌，再转种血琼脂平板。其他标本可同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。
37℃孵育18～24小时后，观察菌落并涂片染色镜检。采用一系列生化反应进行鉴定。肠致病性大肠杆菌须先作血清学定型试验。必要时检定肠霉毒素。
泌尿系统除确定大肠杆菌外，还应计数，每毫升尿含菌量≥100，000时，才有诊断价值。
二、卫生细菌学检查
大肠杆菌不断随粪便排出体外，污染周围环境和水源、食品等。取样检查时，样品中大肠杆菌越多，表示样品被粪便污染越严重，也表明样品中存在肠道致病菌的可能性越大。故应对饮水、食品、饮料进行卫生细菌学检查。
1、细菌总数：检测每毫升或每克样品中所含细菌数，采用倾注培养计算。中国规定的卫生标准是每毫升饮水中细菌总数不得超过100个。
2、大肠菌数指数：指每立升中大肠菌群数，采用乳糖发酵法检测。中国的卫生标准是每1000ml饮水中不得超过3个大肠菌群；瓶装汽水、果汁等每100ml大肠菌群不得超过5个。
三、全自动微生物定量分析仪（tempo）检测
全自动微生物定量分析（tempo）仪的大肠杆菌群计数检测有tc和cc两种方法。tempo tc的开发是为了获得nf iso4832标准相当性能水平。
tempo cc法是tempo仪器上根据bam方法专门用于24h计数食品中大肠杆菌群的方法。该法是为了获得和aoac官方方法966.24及美国公共健康联合会检测乳制品检测方发（**edp）一致的效果。
tempo系统根据阳性空的大小和数目来推算出原始样本中大肠杆菌群数目。
5楼：匿名用户
大肠菌群测定的操作细则
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(mpn)表示。
1 设备和材料
1.1 温箱：36±1℃。
1.2 冰箱:0～4℃。
1.3 恒温水浴 :44.5±0.5℃。
1.4 天平。
1.5 显微镜。
1.6 均质器或乳钵。
1.7 平皿:直径为90mm。
1.8 试管。
1.9 吸管。
1.10 广口瓶或三角烧瓶:容量为500ml。
1.11 玻璃珠:直径约5mm。
1.12 载玻片。
1.13 酒精灯。
1.14 试管架。
2 培养基和试剂
2.1 乳糖胆盐发酵管:按gb 4789.28中4.9规定。
2.2 伊红美蓝琼脂平板:按gb 4789.28中4.25规定。
2.3 乳糖发酵管:按gb 4789.28中4.10规定。
2.4 ec 肉汤:按gb 4789.28中4.11规定。
2.5 磷酸盐缓冲稀释液:按gb 4789.28中3.22规定。
2.6 生理盐水。
2.7 革兰氏染色液:按gb 4789.28中2.2规定。
3 操作步骤
3.1 检样稀释
3.1.1 以无菌操作将检样25ml(或g)放于有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:
10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器,以8 000-10 000 r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。
3.1.2 用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml,注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。
3.1.3 另取1ml灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1ml灭菌吸管。
3.1.4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管。
3.2 乳糖发酵试验
将待检样品接种于乳糖 胆盐发酵管内,接种量在1ml以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1ml及1ml以下者,用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管,置36±1℃ 温箱内,培养24±2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。
3.3 分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃ 温箱内,培养18-24h,然后取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。
3.4 证实试验
在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置 36±1℃温箱内培养24±2h,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。
3.5 报告
根据证实为大肠菌群阳性的管数,查mpn检索表,报告每100ml(g)大肠菌群的mpn值。
4 粪大肠菌群(faecal coliform)
4.1 用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见3.2条)转种于ec肉汤管内,置44.
5±0.2℃水浴箱内(水浴箱内的水面应高于ec肉汤液面),培养24±2h,经培养后,如所有ec肉汤管均不产气,则可报告为阴性;如有产气者,则将所有产气的ec肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上,置 培养18-24h,凡平板上有典型菌落者,则证实为粪大肠菌群阳性。
4.2 结果报告
根据证实为粪大肠菌群的阳性管数,查mpn检索表,报告每100ml(g)粪大肠菌群的mpn值。
6楼：快乐宝贝加油
水中大肠杆菌检测，可以用酶底法。工作强度小，准确率高。你可以用这个试剂试试看colitech
7楼：匿名用户
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。
食品中大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(mpn)表示。
1设备和材料
1.1温箱：36±1℃。
1.2 冰箱:0～4℃。
1.3 恒温水浴 :44.
5±0.5℃。 1.
4 天平。 1.5 显微镜。
1.6 均质器或乳钵。 1.
7 平皿:直径为90mm。 1.
8 试管。 1.9 吸管。
1.10 广口瓶或三角烧瓶:容量为500ml。
1.11 玻璃珠:直径约5mm。
1.12 载玻片。 1.
13 酒精灯。 1.14 试管架。
2培养基和试剂
2.1乳糖胆盐发酵管:按gb 4789.28中4.9规定。
2.2伊红美蓝琼脂平板:按gb 4789.28中4.25规定。
2.3乳糖发酵管:按gb 4789.28中4.10规定。
2.4 ec肉汤:按gb 4789.28中4.11规定。
2.5磷酸盐缓冲稀释液:按gb 4789.28中3.22规定。
2.6生理盐水。
2.7革兰氏染色液:按gb 4789.28中2.2规定。
3.1检样稀释
3.1.1 以无菌操作将检样25ml(或g)放于有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:
10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器,以8 000-10 000 r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。
3.1.2 用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml,注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。
3.1.3 另取1ml灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1ml灭菌吸管。
3.1.4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管。
3.2乳糖发酵试验
将待检样品接种于乳糖 胆盐发酵管内,接种量在1ml以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1ml及1ml以下者,用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管,置36±1℃ 温箱内,培养24±2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。
3.3分离培养
将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃ 温箱内,培养18-24h,然后取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。
3.4证实试验
在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置 36±1℃温箱内培养24±2h,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。
3.5报告
根据证实为大肠菌群阳性的管数,查mpn检索表,报告每100ml(g)大肠菌群的mpn值。
4粪大肠菌群(faecal coliform)
4.1用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见3.2条)转种于ec肉汤管内,置44.
5±0.2℃水浴箱内(水浴箱内的水面应高于ec肉汤液面),培养24±2h,经培养后,如所有ec肉汤管均不产气,则可报告为阴性;如有产气者,则将所有产气的ec肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上,置 培养18-24h,凡平板上有典型菌落者,则证实为粪大肠菌群阳性。
4.2结果报告
根据证实为粪大肠菌群的阳性管数,查mpn检索表,报告每100ml(g)粪大肠菌群的mpn值。