1楼：匿名用户
冰浴过程中，原来加在溶液中的钙离子和细菌细胞膜结合，在低温下形成液晶结构，这样，在42度热激下，这种液晶结构收缩，将细胞膜扯开孔道，使dna进入细菌细胞中。这就是原理。 前面冰浴不清楚，热激我认为是让已经有孔的大肠杆菌孔膨胀，增加dna进入的几率，然后立刻冰浴，使孔收缩，进去的dna不要出来。
个人想法，没看到过类似文献。
你在ncbi上查查第一个利用大肠杆菌转化的人，他是怎么做的。文献里肯定有原理说明，不过可能是几十年前的文献了。
2楼：匿名用户
前面冰浴不清楚，热激我认为是让已经有孔的大肠杆菌孔膨胀，增加dna进入的几率，然后立刻冰浴，使孔收缩，进去的dna不要出来。个人想法，没看到过类似文献。
你在ncbi上查查第一个利用大肠杆菌转化的人，他是怎么做的。文献里肯定有原理说明，不过可能是几十年前的文献了。
3楼：浙大阿米巴
提高转化率。
具体原理我不知道。
大肠杆菌感受态细胞转化实验中没冰浴就热击会怎样?
4楼：冰锋
冰浴是为了质粒附着在菌体表面,热击是打开通道让质粒进入,觉得lz的做法影响不大,不过要实际验证
为什么制备大肠杆菌感受态细胞冰浴
5楼：阿鲁巴星人
因为你在加入钙离子之后，细胞很脆弱，需要低温，这样可以保护它。
大肠杆菌感受态细胞制备时的cacl2浓度到底是多少
6楼：匿名用户
（1）质粒dna的质量和浓度： 用于转化的质粒dna应主要是超螺旋态的，转化率与外源dna的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源dna的量过多或体积过大时，则会使转化率下降。一般地，dna溶液的体积不应超过感受态细胞体积的5%，1ng的cccdna即可使50ul的感受态细胞达到饱和。
对于以质粒为载体的重组分子而言，分子量大的转化效率低，实验证明，大于30kb的重组质粒将很难进行转化。此外，重组dna分子的构型与转化效率也密切相关，环状重组质粒的转化率较分子量相同的线性重组质粒高10~100倍，因此重组dna大都构成环状双螺旋分子。 （2）感受态细胞的质量：
所用的cacl2等试剂均需是最高纯度的，并用最纯净的水配制，最好分装保存于4℃ （3）细胞的生长状态和密度 最好从-70℃或-20℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备感受态细胞的菌液。不要用已经过多次转接，及贮存在4℃的培养菌液。细胞生长密度以每毫升培养液中的细胞数在5×107个左右为佳。
即应用对数期或对数生长前期的细菌，可通过测定培养液的od600控制。对tg1菌株，od600为0．5时，细胞密度在5×107个/ml左右。（应注意od600值与细胞数之间的关系随菌株的不同而不同）。
密度过高或不足均会使转化率下降。 （二）感受态细胞转化中的影响： 整个操作过程均应在无菌条件下进行，所用器皿，如离心管，移液枪头等最好是新的，并经高压灭菌处理。
所有的试剂都要灭菌，且注意防止被其它试剂、dna酶或杂dna所污染，否则均会影响转化效率或杂dna的转入。整个操作均需在冰上进行，不能离开冰浴，否则细胞转化率将会降低。
感受态细胞的制备时有什么注意事项
7楼：置嚼勒眯
方法一：细菌转化的方法多以mendel和higa（1970）的发现为基础，其基本方法是用冰预冷的cacl2或多种2价阳离子等处理细菌，使之进入感受态得以转化。用cacl2制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞，常用于成批制备感受态细菌。
本法适用于大多数大肠杆菌菌株，且迅速、重复性好。操作过程简述如下。1．从37℃培养16～20h的新鲜平板中挑取一个单菌落（如大肠杆菌dh52），或1ml新鲜的16～20h过夜培养物，转到一个含有100mllb培养基的1l或500ml烧瓶中。
于37℃剧烈振摇培养约2～3h（旋转摇床200～300r/min），每隔20～30min测量od600值≈0.4。2．在无菌条件下将细菌转移到一个，用冰预冷的50ml聚丙烯离心管中，在冰上放置10～20min。
3．于4℃用sorvallgs2转头（或与其离心管相配的转头）以4000r/min离心10min，以**细胞。4．倒数培养液，将管倒置1min以使最后残留的痕量培养液流尽。5．以10ml用冰预冷的0.
1mmcacl2重悬每份沉淀，放于冰上。6．于4℃用sorvallgs3转头（或与其相应的转头）以4000r/min离心10min，以**细胞。7．倒出培养液，将管倒置1min以使最后残留的痕量培养液流尽。
8．每50ml初始培养物用2ml冰预冷的0.1mcacl2重悬每份沉定，此时，可以迅速将细胞分装成小份，液氮中冰冻，-70℃贮存备用。9．用冷却的无菌吸头从每种感受态细胞悬液中各取200μl转移到无菌的微量离心管中，每管加dna或连接反应混合物（体积≤10μl，dna≤50ng），轻轻旋转以混匀内容物，在冰中放置30min。
10．将离心管放到预加温到40℃的循环水浴中的试管架上，放置90s～2min，不要摇动试管。11．快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却1～2min。12．每离心管加800μlsoc培养基，用水浴将培养基加温到37℃，然后将管转移到37℃摇床上，温育45min使细菌复苏，并且表达质粒编码的抗生素抗性标记基因。
13．将适当体积（每个90mm平板可达200μl）已转化的感受态细胞转移到含200mmol/lmgso4和相应抗生素的sob培养基上。14．将平板置于室温至液体被吸收。15．倒置平皿，于37℃培养，12～16h后可出现菌落。
方法二：cassuperone-step***petentcellprepskit采用一种简单便捷的方法处理大肠杆菌，使其成为感受态细胞，便于质粒dna的转化，可满足一般实验的要求。与cacl2法相比具有多种优点：
使用方便，只需一步即可完成感受态细胞的制备；转化效率略高于cacl2法，一般可达106-108cfu/μg，满足一般实验需要；感受态细胞制成后即可保存于-70℃,无须加入甘油，并且经长期保存活力无明显下降。准备工作：1．从液氮或低温冰箱中取出的大肠杆菌冻存菌，在lb平板上划线，37度过夜至长出单菌落。
挑形态饱满的单菌落2个，分别接种5mllb培养基中，37℃，250rpm，过夜培养。2．次日从5mllb培养物吸取200μl转入50mllb培养基中（250ml锥形瓶），37℃，250rpm培养2小时，此时od600约0.4—0.
5。感受态细胞的制备：3．吸取1ml菌液到1.
5ml离心管里，5000rpm离心5分钟，弃去上清。4．加入100μl预冷的solutiona，悬浮菌体，冰浴30分钟。5．此时感受态细胞已经制成可立即使用或-70℃保存。
细胞转化：6．在感受态细胞中加入100pg-10ngdna，混匀，冰浴30分钟，然后42℃1分钟热击，再次冰浴2分钟。加入0.
9mllb培养基，20μlsolutionb，37℃，振荡培养1小时。7．取适当菌液（100-200μl）涂布相应抗性的平板。8．过夜培养约16个小时，数菌落数，计算转化率。
补充说明：1．所用器具一定要清洁；2．操作步骤2中培养基的装量也是很重要的，建议装量不要高于此值：500ml锥形瓶装100ml培养基，250ml锥形瓶装50ml培养基；3．在收获菌体前半小时还可以在培养基中加入20mm的mgcl2，效果会更好一些；4．为保证细胞处于对数生长期，培养后的菌体的od值不要高于0.
6；5．制备感受态细胞时所有操作尽量保证在冰上操作；6．细胞转化操作步骤6中也可以不必进行热击，冰浴后直接加入新鲜lb，简化操作步骤，但转化效率低于热击方法，适用于对转化率要求不高的实验。方法三：1、取1%大肠杆菌e.
coli接种于含2mllb培养基的试管中，37℃振荡培养过夜2、取0.1ml过夜培养物转种于含10mllb培养基的三角瓶中，37℃振荡培养3h至od600=0.3ml离心管中，冰浴10min。
4、在4℃下以4000rpm离心5min，去上清液5、把菌体悬浮于15m1冰冷的0.1mcacl2溶液中，置冰上30min6、然后再在4℃下以4000rpm离心10min，去上清液7、将菌体悬浮于0.1mlcacl2溶液中，冰浴放置4-12hr备用。
方法四：（1）将1ml过夜培养的细菌（如dh52、tg1、tm101）接种于100ml2×yt培养于500ml烧瓶。于37℃刷烈振荡，通常≥200rpm培养的细菌密度约od550=0.
2～0.5(5×107cells/ml),需2～4h。（2）将培养物放于冰上致冷10min，于4℃离心细菌培养物，10000rpm离心10min。
（3）弃除上清，将细菌悬浮于原始培养体积的一半（约50ml）的50mmcacl2和10mmtris·hcl（ph8.0）无菌冷冻液体中。（4）将细菌悬浮放在冰上约5min，然后将悬浮物于4℃10000/rpm离心10min。
（5）弃上清，悬浮细菌于原始培养体积的1/15的50mmcacl和10mmtris·hcl（ph8.0）无菌冷冻中。此时的细胞是感受态细胞，即可用于转化。
200μl分装于无菌的1.5ml微量离心管中，贮存于-80℃冰箱中。方法五：
tsb法（也是本人热衷的方法）1.药品制备1mmg2+(1mmgso4和1mmgcl2等体积混合)，用0.22um滤膜超滤除菌。
tsb液（30ml/80ml菌液）（现配现用）：peg33503gtryptone0.3gyeastextract0.
15gnacl0.3g2.步骤：
（1）活化菌株（2）挑单菌落培养于5ml的液笨培养基中（3）取液体培养物50ul于80ml的液体培养基中进行扩大培养（4）370c培养3－4小时，od600在0.4－0.6（5）离心，去上清（6）加入20mltsb，重悬（7）离心，去上清（8）加入10mltsb，再加入15－20%的甘油，分装保存注，整个操作过程均应在冰上进行。
所用药品均需灭菌。转化程序（1）取出200μl感受态细胞慢慢使其溶化，并立即放于冰上，加入dna或连接反应混合物，dna量通常≤50mg。用手指弹打试管10次，使之混匀，然后放在冰上40～45min。
（2）将管放于42℃水浴中2min。（3）然后每管直接加入1.0ml2×yt培养基，倒置混匀，并于37℃培养8～12h，干浴或水浴，不需振摇。
此期间使细菌生长并开始表达抗菌素。（4）每200μl转化混合物分别于6个2×yt琼脂培养板上补充相应抗生素，并含有x-gal（20mg/ml）、iptg（200mg/ml）。
怎样检验感受态细胞转化是否成功,转化之后复苏感受态细胞能用加了氨苄的LB培养基吗
1楼 匿名用户 转化后铺含有相应抗生素的平板，如果有菌落长出，基本就是转化成功了。 怎样检验感受态细胞转化是否成功 2楼 匿名用户 当然是利用筛选平板了。 经典的就是蓝白斑实验。不过我们上学期做的红绿荧光蛋白的，直接用普通平板，到时观察有无荧光就行了。 3楼 匿名用户 将空载体转化上去，平板筛选，看...