1楼：南京金益柏生物科技****
建议楼主查询文库，一般这个上面有详细的处理过程哈，而且还是比较具体，这样子操作是很好的
请教qrt-pcr数据统计问题
2楼：匿名用户
这样算：
你先把几次试验的对照组的平均值设为1, 再把每个单独试验对照组的数值算出和这个对照组平均值的差异，就可以计算标准差了。
这么简单的统计分析，用不着spss吧， excel就可以解决了。
3楼：匿名用户
rt-qpcr由普通pcr技术发展而来，它是在传统pcr反应体系中加入荧光化学物质（荧光染料或者荧光探针），根据各自不同的发光机制实时检测pcr退火、延伸过程中荧光信号变化来计算pcr每个循环中产物的变化量，目前最常见的方法为biog染料法荧光染料法和biog探针法。
4楼：life实验室
老师们好，“你先把几次试验的对照组的平均值设为1, 再把每个单独试验对照组的数值算出和这个对照组平均值的差异，”那么δδct = δct实验组样品 － δct对照组样品，这里的“δct对照组样品”用的应该是平均值还是单个的测定值，假如测定的是不同部位（根、茎、叶），每个部位都有对照，用的应该是根、茎和叶所有对照的平均值还是其他？
怎么通过q-pcr的扩增曲线和溶解曲线来分析结果，如何通过曲线来判断结果的好与坏？
5楼：匿名用户
1、扩增曲线（如果做双δct法）：
（1）扩增曲线必须是s型，有明显的四个时期，且复孔的ct值尽量一致，相差不要超过0.5个ct值（上限是1个ct值）；
（2）同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增，其相差的ct值为相差浓度倍数的2次开方。当然这是理论值；另外阴性对照不能有扩增（40个循环以后出ct值属正常现象，也可算作没有扩增）。
2、溶解曲线：
（1）溶解曲线是判断扩增产物是否单一的曲线，顾名思义，其跟模板（或其浓度）没有关系，扩增什么基因就应该有其相对应的溶解曲线；
（2）一般sybr法的目的基因在80~90℃之间；
（3）出现其他峰就该考虑是否为引物二聚体（一般为60~75℃之间）视引物长度而定，而基因组dna污染的峰会在90℃以后。出现引物二聚体可能是引物设计、引物加量等原因所致；
（4）基因组dna那么考虑设计跨内含子引物或者实验之前做gdna的消除工作。而阴性对照有目的峰那可能就是模板污染，注意实验操作等避免模板污染。
3、溶解曲线是为了验证扩增产物特异性的，要是溶解曲线是单峰说明产物只有一条，结果较好；要是双峰说明产物不特异，可能存在引物二聚体或非特异性扩增，有可能引物设计有问题。
6楼：匿名用户
具体要看你做什么实验，模板和扩增的基因实怎样的。
1、扩增曲线：一般来说如果你做双δct法那么你的扩增曲线必须是s型，有明显的四个时期，且复孔的ct值尽量一致，相差不要超过0.5个ct值（上限是1个ct值）；同一个基因在不同浓度的相同模板下扩增，其相差的ct值为相差浓度倍数的2次开方。
比如同一种cdna5倍浓度稀释，那么同一种基因扩增的前提下，5倍浓度模板的ct值会比1倍浓度模板的ct值提前2.3个循环左右，以此类推，当然这是理论值；另外阴性对照不能有扩增（40个循环以后出ct值属正常现象，也可算作没有扩增）。
2、溶解曲线：溶解曲线是判断扩增产物是否单一的曲线，顾名思义，其跟模板（或其浓度）没有关系，扩增什么基因就应该有其相对应的溶解曲线，类似于电泳。那么你扩增几种基因就应该有几种对应的峰（一般sybr法的目的基因在80~90℃之间），我说的是一般情况，这个跟扩增片段长短有关系。
出现其他峰就该考虑是否为引物二聚体（一般为60~75℃之间）视引物长度而定，而基因组dna污染的峰会在90℃以后。出现引物二聚体可能是引物设计、引物加量等原因（也有可能是从加完反应液到上机开始pcr这之间的时间过长）所致；基因组dna那么考虑设计跨内含子引物或者实验之前做gdna的消除工作。而阴性对照有目的峰那可能就是模板污染，注意实验操作等避免模板污染。
纯手打，支持下。
7楼：匿名用户
扩增曲线要是s形的，融解曲线要单峰。满足这些条件结果才可靠
如何运用ncbi设计q-pcr引物
8楼：
引物大吗？ 如果二十几个bp以上的话，能查出来 正向引物不变，反向引物找反向互补序列，(就是说aatcggatcctcj就要翻成gaggatccgatt)把这两个序列用两个空格分开，或者用逗号隔开去blast，为了精确，应该在高级选项限制条件里选择你要的那种生物，你要的那种基因（比如是酶就选择酶那一类）。 然后在结果里认真找哈~~
做q-pcr,相同的标本为什么每次做结果不同?
9楼：匿名用户
注意操作的一致性以及稳定性，一般情况下不同批次是有批间差的，但是实验流程相对比较成熟的实验室，或者老师批间差不会很大，我们实验室要求相同样本批间差在0.2cycle以内。建议你多做几组重复。
q-pcr的几个问题？
10楼：阿鲁巴星人
1 可以先平均再求差值，也可以先差值再平均。两种方式的variation应该是一样的。
2 可以去掉，但是少于3个的样品没有统计学上的意义。你可以自己看看。
1 看内参和目的基因的ct值没有问题
2 对数期的线条应该是比较漂亮的，前头的不好看正常。很有软件有美化这些线条的功能，所以会很漂亮，这个不用太在意，只要你的ct值重复孔是一样的就好。
如何选择绝对定量rt-pcr的数据统计分析方法 5
11楼：匿名用户
根据正态、方差齐、样本量等选择分析方法。
逆转录pcr(reverse transcription pcr)或者称反转录pcr(reverse transcription-pcr, rt-pcr)，是聚合酶链式反应(pcr)的一种广泛应用的变形。在rt-pcr中，一条rna链被逆转录成为互补dna，再以此为模板通过pcr进行dna扩增。
由一条rna单链转录为互补dna(cdna)称作"逆转录"，由依赖rna的dna聚合酶(逆转录酶)来完成。随后，dna的另一条链通过脱氧核苷酸引物和依赖dna的dna聚合酶完成，随每个循环倍增，即通常的pcr。原先的rna模板被rna酶 h降解，留下互补dna。
rt-pcr的指数扩增是一种很灵敏的技术，可以检测很低拷贝数的rna。rt-pcr广泛应用于遗传病的诊断，并且可以用于定量监测某种rna的含量。(检测基因表达的方法，参见northern blot法。
rt-pcr的关键步骤是在rna的反转录，要求rna模版为完整的且不含dna、蛋白质等杂质。常用的反转录酶有两种，即鸟类成髓细胞性白细胞病毒(avian myeloblastosis virus,amv)反转录酶和莫罗尼鼠类白血病病毒(moloney murine leukemia vrius,mmlv)反转录酶。
rt-pcr有时候也会指代实时pcr(real-time pcr)。为了与逆转录pcr相区别，通常被写作"定量pcr"(quantitative pcr)或者rtq-pcr(real-time quantitative pcr)。
12楼：匿名用户
根据正态、方差齐、样本量等选择分析方法
我替别人做这类的数据分析蛮多的