1楼：数学知道行家
我这个很纠结，这个蛋白的抗体，我专门去找了很多家都正好分子量在52-54kd，没办法避免。然后我做的实验是用生物素标记膜蛋白，再用亲和素去发光，抗体是中间用来像ip一样拉出来这个蛋白的作用，所以我只能想办法去除重链影响，目前看到的方法就只有试剂盒和封闭抗体
关于免疫共沉淀最后一步的问题？
2楼：匿名用户
最后一步煮沸以后，抗体和抗体结合的蛋白都变性了，从琼脂糖珠上脱落下来，所以有人直接就连珠子带上清就去电泳，琼脂糖进不了胶。或者为了样品跑出来好看，你直接转速再高点，甩一下，让大部分柱子都沉底，取上清电泳就行。
一般都用上样缓冲液煮沸了，珠子上不剩什么了。
求助，免疫共沉淀第一抗体应加多少较为合适
3楼：
不需要。或者说需要分开一个个证明。用一个抗体去做
ip，然后分别用3个抗体做ib,看你抓下的蛋白是否是3个蛋白复合物。
抗体（antibody）指机体的免疫系统在抗原刺激下，由b淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。主要分布在血清中，也分布于组织液及外分泌液中。 抗体通常由一些基础单元组成，每一个抗体包括：
两个长（大）的重链，以及两个短（小）的轻链。而轻链和重链之间以双硫键连接。轻链和重链又分为可变区和恒定区，而不同类型的重链恒定区，将会导致抗体种型的不同。
免疫共沉淀定量问题求助
4楼：匿名用户
真核生物的基因组dna以染色质的形式存在。因此，研究蛋白质与dna在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因表达机制的基本途径。染色质免疫沉淀技术（chromatin immunoprecipitation assay, chip） 是目前唯一研究体内dna与蛋白质相互作用的方法。
它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质－dna复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的dn**段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与dna相互作用的信息。chip不仅可以检测体内反式因子与dna的动态作用，还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。而且，chip与其他方法的结合，扩大了其应用范围：
chip与基因芯片相结合建立的chip-on-chip方法已广泛用于特定反式因子靶基因的高通量筛选；chip与体内足迹法相结合，用于寻找反式因子的体内结合位点；rna-chip用于研究rna在基因表达调控中的作用。由此可见，随着chip的进一步完善，它必将会在基因表达调控研究中发挥越来越重要的作用。
染色体免疫共沉淀（chromatin immunoprecipitation，chip）是基于体内分析发展起来的方法，也称结合位点分析法，在过去十年已经成为表观遗传信息研究的主要方法。这项技术帮助研究者判断在细胞核中基因组的某一特定位置会出现何种组蛋白修饰。chip不仅可以检测体内反式因子与dna的动态作用，还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰 与基因表达的关系。
近年来，这种技术得到不断的发展和完善。采用结合微阵列技术在染色体基因表达调控区域检查染色体活性，是深入分析癌症、心血管疾病以及**神经系统紊乱等疾病的主要通路的一种非常有效的工具。
免疫共沉淀中proteina/g的工作原理？western blot中封闭原理
5楼：匿名用户
不知道你所说的proteina / protein g 是偶联了beads的吗？
如果是：用来结合抗体的。
如果不是：一般用来在加入抗体之前的封闭，当然也可以用来结合抗体的。
6楼：匿名用户
我说下个人理解，我认为加入proteina/g是一方面与抗体结合，另一部位与琼脂糖珠子结合，便于后续分离，至于问题2我就不清楚了
免疫共沉淀两个抗体需要不同种源吗
7楼：神级人氏
不需要。或者说需要分开一个个证明。用一个抗体去做ip，然后分别用3个抗体做ib,看你抓下的蛋白是否是3个蛋白复合物。
抗体（antibody）指机体的免疫系统在抗原刺激下，由b淋巴细胞或记忆细胞增殖分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。主要分布在血清中，也分布于组织液及外分泌液中。 抗体通常由一些基础单元组成，每一个抗体包括：
两个长（大）的重链，以及两个短（小）的轻链。而轻链和重链之间以双硫键连接。轻链和重链又分为可变区和恒定区，而不同类型的重链恒定区，将会导致抗体种型的不同。