1楼:匿名用户
丙酮或无水乙醇
石英砂:使研磨充分
碳酸钙:中和酸,防止色素被破坏
后面还有一些步骤,有疑问尽管问
叶绿素的提取用什么方法 是提取不是分离
2楼:匿名用户
提取,溶剂萃取法
分离,纸层析法
3楼:匿名用户
实验原理:叶绿体色素溶解于机溶剂,酒精或丙酮(相似相溶),根据原理叶绿体色素提取,形色素液.四种色素层析液溶解度同,随层析液滤纸扩散速度同,溶解度越高,扩散速度越快,溶解度越低,扩散速度越慢.
根据原理使各种色素离. 实验步骤: 1.
提取绿叶色素: 取材:称取2g菠菜叶片.
剪碎绿叶:称叶片剪碎放入研钵. 研磨:
加入少许石英砂(二氧化硅)碳酸钙及5ml丙酮,迅速研磨.再用5ml丙酮淋洗. 滤:
研磨液滤试管,并及用棉塞塞紧试管口 2.制备滤纸条:准备6cm、宽1cm干燥滤纸条,剪端两角,距离该端约1cm处用铅笔画条细线 3.
画滤液细线:用毛细吸管吸取少量研磨滤液,沿铅笔画线画条细直滤液细线,吹干再重复画滤液细线若干,每画线都要吹干再画. 4.
离色素:画滤液细线滤纸条轻轻插入盛3ml层析液(由航空汽油丙酮按10:1比例配制)烧杯,并覆盖烧杯.
滤液细线能触及层析液. 5.观察结:
注意观察滤纸条变化,几钟,取滤纸条仔细观察.
叶绿素的提取和分离办法
4楼:梦中的卫清炆
叶绿素有一个亲水的基团还有个亲脂的基团所以要提取的话用有水分的有机溶剂就好,比如90%乙醇,在一个碗中放一些酒(一般酒里有酒精成分有水成分),蔬菜叶子切碎去掉茎脉,捣碎研磨就能简易提取叶绿素了。
叶绿素的提取和分离实验步骤
5楼:匿名用户
提取:(1) 取菠菜或其他植物新鲜叶片4-5片(2g左右),洗净,擦干,去掉中脉剪碎,放入研。(2) 研钵中加入少量石英砂及碳酸钙粉,加2-3ml 95%乙醇,研磨至糊状,再加10-15ml 95%乙醇,离心35min,提取上清液过滤于三角瓶中,残渣用10ml 95%乙醇冲洗,一同过滤于三角瓶中。
(3) 如无新鲜叶片,也可用事先制好的叶干粉提取。取新鲜叶片(以菠菜叶最好),先用105℃杀青,再在80℃下烘干,研成粉末,密闭储存。用时称叶粉2g放入小烧杯中,加95%乙醇20-30ml 浸提,并随时搅动。
待乙醇呈深绿色时,滤出浸提液备用。分离:(1) 取圆形定性滤纸一张(直径11cm),将其剪成滤纸条(9cm×3cm),用滴管吸取乙醇叶绿体色素提取液,沿纸条的长度方向涂在纸条的一边(距边约1cm),使色素扩散的宽度限制在0.
5cm以内,风干后,再重复操作数次。 (2) 在层析缸中加入适量的推动剂,将滤纸条带有色素的一端插入层析缸中,使滤纸条下端浸入推动剂中。迅速盖好层析缸盖。
此时,推动剂借毛细管引力顺滤纸条向上扩散,并把叶绿体色素向上推动,不久即可看到各种色素的条带。 (3) 当推动剂前沿接近滤纸边缘时,取出滤纸,风干,即可看到分离的各种色素:叶绿素a为蓝绿色,叶绿素b为黄绿色,叶黄素为鲜黄色,胡萝卜素为橙黄色。
用铅笔标出各种色素的位置和名称。
6楼:匿名用户
这是一种纸色谱,步骤书上有啊,高中生物书。横线只起标示作用,没什么,注意划线时要多划,而且要保持细小,不能粗大
叶绿素的提取和分离
7楼:匿名用户
一 实验目的
1.掌握提取叶绿素的方法
;2.了解薄层层析的原理,掌握薄层层析的一般操作和定性鉴定方法
二 实验原理
1.叶绿素提取
高等植物体内的叶绿体色素有叶绿素和类胡萝卜素两类,主要包括叶绿素a (c55h72o5n4mg)、叶绿素b(c55h70o6n4mg)、β—胡萝卜素(c40h56)和叶黄素(c40h56o2)等4种。叶绿素a和叶绿素b为吡咯衍生物与金属镁的配合物,胡萝卜素是一种橙色天然色素,属于四萜类,为一长链共轭多烯,有α、β、γ三种异构体,其中,β异构体含量最多。叶黄素为一种黄色色素,与叶绿素同存在于植物体中,是胡萝卜素的羟基衍生物,较易溶于乙醇,在乙醚中溶解度较小。
根据它们的化学特性,可将它们从植物叶片中提取出来,并通过萃取、沉淀和色谱方法将它们分离开来。
2.薄层色谱
薄层层析是快速分离和定性分析微量物质的一种极为重要的实验技术,具有设备简单、操作方便而快速的特点。它是将固定相支持物均匀地铺在玻片上制成薄层板,将样品溶液点加在起点处,置于层析容器中用合适的溶剂而达到分离的目的。用此法分离时几乎不受温度的影响,可采用腐蚀性显色剂,而且可在高温下显色,特别适用于挥发性小或在较高温度下易发生反应的物质,同时也常用来跟踪有机反应或监测有机反应完成的程度。
薄层层析的器材选择:
(1)基板:玻璃、塑料、金属箔,常用玻璃板。
(2)吸附剂:
吸附剂要有合适的吸附力,并且必须与剂和被吸附物质均不起化学反应。可用作吸附剂的物质很多,常用的有硅胶和氧化铝,由于吸附性好,适用于各类化合物的分离,应用最广。选择吸附剂时主要根据样品的溶解度、酸碱性及极性。
氧化铝一般是微碱性吸附剂,适用于碱性物质及中性物质的分离;而硅胶是微酸性吸附剂,适用于酸性物质及中性物质的分离。以下简单介绍吸附剂的几个基本参数。
种类:常用:氧化铝(强极性)、硅胶(中强极性)
不常用:硅藻土、纤维素、糖类、活性碳
符号:h——无任何添加剂;g——加有锻石膏(gypsum,caso4·1/2 h2o)粘合剂;
f——加有荧光素(fluorescein)
cmc——加有羧甲基纤维素钠(carboxymethyl cellulose)
例:硅胶gf254表示硅胶中既加有煅石膏粘合剂,也加有荧光素,可以在波长254nm的紫外光下激发出荧光
粒度:目:1cm2内的筛孔数,数目越大,颗粒越小。薄层所用吸附剂颗粒较细,氧化铝为200目,硅胶为100~150目。
μ:颗粒的平均直径,以微米表示。例如:40μ的颗粒与100目相当。
活性:吸附剂按其含水量的多少各分为五个等级:i级含水量最少,活性最高;v级含水量最多,活性最低;但并不是活性越高分离效果越好,选用哪种活性级别的吸附剂,要用实验的方法来确定。
酸碱性:
市售氧化铝有酸性(用以分离酸性化合物)、中性、碱性(用以分离生物碱等碱性化合物),其蒸馏水洗出液的ph值分别为4、7.5、9—10;其中以中性氧化铝应用最广,可用来分离各种化合物,特别是那些对酸、碱敏感的化合物。
硅胶没有酸碱性之分。
(3)剂
在样品组分-吸附剂-剂三个因素中。对一确定组分,样品的结构和性质可看作是一不变因素,吸附剂和剂是可变因素。而吸附剂的种类有限,因此选择合适的剂就成为解决问题的关键。
剂的选择有以下要求:
(a)对待测组分有很好的溶解度。
(b)能使待测组分与杂质分开,与基线分离。
(c)使后的组分斑点圆而集中,不应有拖尾现象。
(d)使待测组分的rf值最好在0.4~0.5,如样品中待测组分较多,rf值则可在0.
25~0.75范圈内,组分间的rf值最好相差0.1左右。
由于薄层色谱法用途非常广泛,国内外均有现成的铺有吸附剂的薄层板**。一般实验室中也可自己制备。
(e)不与组分发生化学反应,或在某些吸附剂存在下发生聚合。
(f)具有适中的沸点和较低的粘滞度。
剂的极性是指与样品组分相互作用时。剂分子与吸附剂分子的色散作用、偶极作用、氢键作用及介电作用的总和。剂要根据样品的极性及溶解度,吸附剂活性等因素进行选择,总的原则是剂的极性能使组分的rf值在0.
5左右。常用溶剂极性次序是:石油醚《环己烷《苯《乙醚《氯仿《乙酸丁酯《正丁醇《丙酮《乙醇《甲醇。
如一种溶剂不能充分,可选用二元或多元溶剂系统。
4.槽与:
薄层的在密闭的容器即槽或称为层析缸中进行。
:合适的剂用量为浸及下端硅胶,但不浸及样点;点样端向下,每次只一块,放在正中,以免爬斜(进而倾斜)。
5.显色:
如果化合物本身有颜色,就可直接观察它的斑点。如果本身无色,可先在紫外灯光下观察有无荧光斑点(有苯环的物质都有),用铅笔在薄层板上划出斑点的位置;对于在紫外灯光下不显色的,可放在含少量碘蒸气的容器中显色来检查色点(因为许多化合物都能和碘成黄棕色斑点),显色后,立即用铅笔标出斑点的位置。常用
普适性显色剂:浓硫酸、碘蒸气、荧光素,专用显色剂:茚三酮、三氯化铁溶液等。
三、实验仪器与药品
仪器:半微量玻璃仪器一箱,小烧杯,层析缸(槽),载玻片(100mm×25mm)干燥器,电吹风,毛细管,移液管,研钵,布氏漏斗,抽滤装置。
试剂:硅胶,1% cmc,石油醚(60~90℃),乙醇,丙酮,乙醚,饱和nacl溶液,无水na2so4
四、实验步骤
1.制板:
将硅胶加 1% cmc,调成桨状(硅胶:cmc=1:3~4)(在平铺玻璃板上能晃动但不能流动),将其涂在载玻片上(100mm×25mm)),为使其坦平,可将载玻片用手端平晃动,至平坦为止,放在干净平坦的台面上,晾干之后放入105℃烘箱活化1小时,取出放入干燥器内待用。
2、叶绿素的提取
在研钵中放入几片(约5g)菠菜叶(新鲜的或冷冻的都可以.如果是冷冻的,解冻后包在纸中轻压吸左水分)。加人10ml2:1石油醚和乙醇混合液,适当研磨。
将提取液用滴管转移至分液漏斗中,加人10 ml饱和nacl溶液(防止生成乳浊液)除去水溶性物质,分去h2o层,再用蒸馏水洗涤两次。将有机层转入干燥的小锥形瓶中,加2g入无水na2so4干燥。干燥后的液体倾至另—锥形瓶中(如溶液颜色太浅,可在通风柜中适当蒸发浓缩)。
3、点样
用一根内径 1mm的毛细管,吸取适量提取液,轻轻地点在距薄板一端1.5cm处,平行点两点,两点相距1cm左右。若一次点样不够,可待样品溶剂挥发后.再在原处点第二次,但点样斑点直径不得越过2mm。
4、 先在层析缸中放入剂[石油醚(60~90℃)-丙酮—乙醚(体积比为3:1:1)],加盖使缸内蒸气饱10min, 再将薄层板斜靠于层析缸内壁。
点样端接触剂但样点不能浸没于剂中,密闭层祈缸。待剂上升到距薄层板另一端约1crm时,取出平放,用铅笔或小针划前沿线位置,晾干或用电吹风吹干薄层。
五、实验注意事项
1.制板时用注意使板上硅胶厚度尽量一致。
2.植物叶片不要研成糊状,否则会给分离造成困难
不同的叶绿素提取方法对叶绿素含量有什么影响
1楼 潇洒的热心网友 目的 优选地表水中浮游植物叶绿素a的提取方法。方法实验室制备发生水华的水样, 分别选用丙酮研磨法 冻融法 丙酮加热法 混合溶剂法4种方法提取叶绿素a, 进行叶绿素a含量的测定。结果 冻融法 丙酮加热法 混合溶剂法对样品中叶绿素a的提取效果及方法精密度优于丙酮研磨法 p 0 05...
高中生物叶绿素提取分离实验的录像
1楼 幻海清心 http v youku v show id xntk3mzyynty html 2楼 匿名用户 http tudou programs view r3lqawtwrg 就是你要求的,我们上课也看过 已发送,请查收 高中生物叶绿素提取与分离实验 3楼 匿名用户 不对啊,不是溶解度大的...
高中生物叶绿素提取与分离实验为什么色素溶解度大的
1楼 狐仙玉藻 就是溶解度大的先溶解,先在滤纸上扩散,自然就在上端,而溶解度小的,扩散时间晚,就在滤纸底部 就像用纸沾水,水扩散的很快,用纸沾泥,泥只会扩散一点点 在叶绿素提取实验中,为什么溶解度大的扩散快 2楼 匿名用户 原理 层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂 叶绿体中的色素在层析液中的溶解度不同...