1楼:杨风游
核酸分离与纯化
核酸分离提取的原则
1、选择原则,一是保证提取核酸一级结构的完整性,二是尽量排除其他分子的污染
2、保持核酸结构的完整性,应尽量减少破坏核酸的有害因素,尽量简化操作步骤。
技术路线的设计
1、核酸的释放,有物理法和化学法,化学法又分为溶胞法(应用最多最广泛)与干燥法
2、核酸的分离纯化,须去除三方面的杂质:非核酸大分子物质,不需要的核酸分子,分离纯化过程中新加入的有机溶剂和金属离子等。
3、核酸的浓缩、沉淀和洗涤
浓缩:若溶液中dna含量低且容积较大,不易进行乙醇沉淀时,可用固体聚乙二醇吸水浓缩法或丁醇抽提浓缩法浓缩dna。
沉淀与洗涤:有机溶液沉淀核酸主要是利用核酸可与纳钾等阳离子形成盐,屏蔽了带负电的磷酸基团,使核酸分子聚集在一起而不溶于有机溶剂;盐类可使核酸沉淀,但往往含有少量共沉淀的盐,此时可经70-75%的乙醇洗涤而除去。
核酸的鉴定
首先是含量的鉴定
1、紫外分光光度法:核酸分子中的碱基对波长260nm的紫外光有强烈吸收作用(最大吸收峰),1微克dna钠盐的吸光度之为0.02,也就是a260=1时双链dna含量为50μg/ml,单链dna/rna含量为40μg/ml,单链寡核苷酸的含量为33μg/ml。
适用于浓度大于0.25μg/ml的核酸溶液。
2、荧光光度法,以荧光染料嵌入碱基平面,则核酸在紫外线的激发下发出荧光,且荧光强度积分与核酸含量成正比,有三个特点:灵敏度高;受rna,ssdna和其他物质的干扰小;对分子生物学中的常用酶无抑制作用。
其次是纯度鉴定
1、紫外分光光度法:最常用,核酸在260nm处有最大吸收峰,蛋白质则在280nm处;盐和小分子在230nm处,酚在270nm处,这个差别可区分到底是什么污染;
纯dna的a260/a280=1.8,若高出说明rna污染,若低于则说明残余蛋白质;
a260/a280=2.0为高质量rna的标志(1.8-2.1都可以) a230/a260=0.4-0.5,若升高则说明有残余盐。
2、荧光光度法
利用荧光染料溴化乙锭嵌入碱基平面后,核酸在紫外线的激发下发出橙红色荧光,作为荧光染料示踪。可鉴定dna制品有无rna干扰,反之亦可。
rna变性电泳后有特征性的三条带,原核生物为23s、16s、5s的rrna条带,真核生物则由28s、18s的rrna和5s、5.8s的rrna和trna;(mrna代表基因转录水平,行使模版功能)
还有完整鉴定性:
以溴化乙锭为示踪染料的核酸琼脂糖凝胶电泳结果可用于判断核酸完整性
1、完整无降解或降解很少的总rna电泳图,除具特征性三条带外,三条带的荧光强度应为一特定比值
2、降解系数大的核酸条带相对分子质量大,电泳迁移率低,溴化乙锭嵌入核酸中的数量也增多,荧光强度高;反之~
3、一般28s或23srna的荧光强度约为18s或16s的2倍,否则提示有rna降解,若在加样槽附近有条带,则dna有污染。
保存:dna:原则是减少dna脱氨基,抑制dna酶、减少dna分子的各种反应、避免微生物污染
一般将dna保存于ph8.0的te缓冲溶液中,可减少dna脱氨/抑制dna酶,加少量氯仿可抑制细菌污染;在零下70度可保存5年+
rna:主要是抑制rna酶
以焦炭酸二乙酯水溶解rna,或在rna溶液中加入rnasin(rna酶阻抑蛋白)等rna酶抑制剂,可延长保存时间;另外将rna以沉淀形式保存于70%乙醇溶液或去离子甲酰胺溶液中,可于零下20度长期保存。
临床分子生物学检验的应用有哪些
2楼:化验所
遗传病检测,无创产前检查,遗传性癌症基因筛查,病原体细菌或病毒的检测,定量和分型
3楼:运美丽辛盈
一、rna干扰技术
1.rna干扰技术能高效特异地阻断基因的表达,已成为研究蛋白质及其基因功能、细胞信号传导途径、基因**和药物开发的理想手段。
2.微rna与检验医学网生物体阶段性发育密切相关,可以使特异基因在翻译水平受到抑制,在细胞生长和凋亡、血细胞分化、胚胎后期发育等过程中发挥重要作用,还可能与肿瘤发生有关。
二、生物芯片
1.生物芯片特点:高通量、微型化和自动化,能将生命科学研究中的许多不连续过程集成于一体。
2.生物芯片必将在基因功能研究、基因诊断、药物筛选和个体化药物**等方面扮演重要角色,具有重大的应用潜力。
三、蛋白质组学
当今的研究重点已经开始从揭示生命的遗传信息过渡到对生命活动的直接执行者——蛋白质进行整体水平的研究,蛋白质组学正成为目前揭示生命规律的新的重大热点领域。
临床分子生物学检验和分子诊断学是一本书吗?
4楼:杨风游
不是。《全国高等学校“十二五”医学规划教材·医学教育改革教材:临床分子生物学检验》分为六章,第一章主要介绍临床分子生物学检验的基本概念、基因及基因组、蛋白质组学、生物信息学;第二章至第四章分别阐述了核酸检测技术、蛋白质检测技术、生物芯片与生物传感器技术;第五章较为详细地介绍了分子生物学诊断技术的临床应用;第六章介绍了临床分子生物学检验的常用实验。
《全国高等学校“十二五”医学规划教材·医学教育改革教材:临床分子生物学检验》还配有网络资源与 《分子诊断学》是全国高等医药院校检验专业规划教材之一。全书共16章。
第一章为绪论,第二章至第四章着重叙述原核生物基因组、病毒基因组、真核基因组和蛋白质组,dna、rna、蛋白质等生物分子分离纯化、分子克隆等基础理论。第五章至第十章介绍dna测序技术、pcr技术、核酸分子杂交技术、蛋白质分析技术、生物芯片技术等。第十一章至第十六章在**分子诊断基本策略与方法的基础上,详细介绍感染性疾病的分子诊断、单基因疾病的分子诊断、多基因疾病的分子诊断、移植配型、法医学鉴定、单核苷酸多肽型分析以及生物信息学在分子诊断中的应用。
全书内容新颖、叙述严谨、文字精炼,并有大量彩图。 本书供五年制和七年制医学检验专业学生使用,也可作为卫生专业技术资格考试、研究生入学考试和临床工作中的参考用书。 各章节内容配套使用。
5楼:游戏天行
一个讲理论,一个讲应用
临床分子生物学检验名词解释大全
6楼:匿名用户
分子生物学 (molecular biology)是一门很专业很抽象很前沿的学科,想学好它其实
并不容易,它不象人体解剖学那样直观,不象生理学那样有条理化,更不象内外科那样
有吸引力.很多医学大学生三羧酸循环学得很好,甚至很精,但对于后面的分子生物学,
即基因信息传递一章却感到非常头痛,很多大五学生在考研时考虑到分值较小而干脆
放弃对这一章的复习.
其实只要强制自己静下心来花点时间先认真看好书本上分子生物学的第一章,
即dna的生物合成,当你对这一章看进去了,并且基本上看出了头绪,我相信你一定有
信心有兴趣继续看下去,并且最好是连贯性地系统性地看后面的,争取一次性地看完
分子生物学这一篇,用通俗的话说就是花大力气啃掉这块硬骨头.如果中途有特殊情
况,那么间隔时间最好不要超过两天,否则你前面辛辛苦苦培养出来的兴趣将会消失
的一干二净,你又将回到从前讨厌分子生物学的状态.
试述分子生物学检验在临床诊断中意义
7楼:匿名用户
将分子生物学技术应用到
临床检验诊断学,使疾病诊断深入到基因水平,称为基因诊断。基因诊断技术主要包括核酸分子杂交技术、聚合酶链式反应(pcr)技术、基因多态性分析技术、单链构象多态性(sscp)分析技术、荧光原位杂交染色体分析(fish)技术、波谱核型分析(sky)技术、dna测序技术、基因芯片技术以及蛋白质组技术等,一些先进的分离和检测技术大大促进了上述技术的完善和发展,如毛细管电泳技术(ce)、液质联用技术(lc/ms/ms)、变性高效液相色谱技术(dhplc)、非荧光遗传标记分析技术等。基因诊断在感染性疾病、遗传性疾病、肿瘤性疾病等的诊断中发挥越来越重要的作用。
下面,我们就临床检验诊断中涉及的主要分子生物学技术作一简要介绍。
1.核酸分子杂交技术
即基因探针技术。利用核酸的变性、复性和碱基互补配对的原理,用已知的探针序列检测样本中是否含有与之配对的核苷酸序列的技术。是临床应用最早的,也是最基础的分子生物学技术,是印迹杂交、基因芯片等技术的基础。
不少探针已经商品化。
2.pcr技术
pcr技术是一种特异扩增dna的体外酶促反应,可以短时间扩增出两段已知序列之间的dna,用于诊断、鉴定、制备探针及基因工程产品开发等,是一项及其有效和实用的技术。由于pcr试验存在一定的假阳性和假阴性问题,导致pcr技术在我国临床诊断中的应用曾一度被叫停,近年来由于改进的pcr技术如巢式pcr(nested pcr)、多重pcr(multiplex pcr) 、荧光pcr技术等在较大程度上增加了该技术的敏感性和特异性,加上卫生部于 2002-01颁发了有关基因扩增检验技术临床应用的法规性文件《临床基因扩增检验试验室管理暂行办法》(卫医发〔2002〕10号 ),要求从事临床基因扩增检验的技术人员必须经过卫生部临床检验中心或授权的省级培训机构的上岗培训,持证上岗,使pcr技术在临床检验诊断中重新发挥其不可替代的作用,pcr已广泛用于核酸的科学研究以及临床疾病的诊断和**监测,尤其在感染性疾病诊断方面更有应用价值。
3.基因多态性分析技术
在人群中,各个体基因的核苷酸序列会存在一定差异,称为基因多态性。基因多态性位点普遍存在于人的基因组中,并按孟德尔遗传方式遗传。如果在某个家庭中,某一致病基因与特定的多态性片段紧密连锁,就可以用这一多态性片段作为一种“遗传标记”来判断家庭成员或胎儿是否携带有致病基因。
目前认为基因多态性是个体的“身份证”;有的虽然不表现疾病,但也许会影响对药物的反应和用药效果。因此,基因多态性分析技术已经广泛应用于群体遗传学研究、疾病连锁分析和关联分析、疾病遗传机制研究、肿瘤易感性研究、个性化用药等诸多方面。遗传学上把基因多态性片段称为遗传标记。
遗传标记分析经历第一代限制性酶切片段多态性(restriction fragment length polymorphi**, rflp)、第二代微卫星dna(microsatellite dna),现已发展到第三代单核苷酸多态性分析(single nucleotide polymorphi**, snp)。下面分别介绍如下:
3.1限制性酶切片段多态性(rflp)分析技术
rflp是利用限制性内切酶在特定的核苷酸序列切割双链dna后凝胶电泳分离开不同大小片段,由于不同个体存在核苷酸序列差异导致限制性酶切位点变化从而使酶切片段呈现多态现象。传统的rflp方法是指基因组dna经限制性内切酶酶切,电泳分离后再结合southern 印迹杂交,构建出dna指纹图,这种方法特异性和敏感性均较高,但操作繁杂。目前结合pcr技术产生pcr-rflp方法,是检测与特定的酶切位点有关的突变的简便方法。
rflp方法在遗传性疾病诊断、微生物种属分型、肿瘤发病及诊断研究等领域应用广泛。
生物化学与分子生物学硕士,能否报考临床检验技师
1楼 环球网校 有些地方可以,但每个地方都不一样,建议你咨询当地卫生部门,以当地要求为准。 2楼 镜子碎了 对啊,你最后 通过了吗?还有,你的本科和研究生,专业差距太大了吧。。。 3楼 广鸿勤先本 你好,请问你最后报考检验师重庆这边审核通过了吗? 本科是生物工程专业,研究生是生物化学与分子生物学专业...
分子生物学实验室是什么意思,分子生物学preinitiation 是什么意思
1楼 匿名用户 分子生物学实验室 lmb 是一个设于英国剑桥的研究机构,参与了20世纪50年代到60年代发生的分子生物学革命,从那时起,它仍然是一个重要的医学研究实验室,但具有了更广泛的关注。于原址附近修建的新研究大楼于2013年5月投入使用。分子生物学实验室由英国 医学研究委员会于1947年设立。...
生物化学与分子生物学方向的研究生转医学博士好转吗
1楼 匿名用户 本科学过临床么?我们医学院一般把专业分为两大块 基础医学和临床医学。 如我们医学院也有生化分子专业 各种生物学的专业,都属于基础医学类的,所学的都是医学相关的基础研究,但颁发的一般都是理学学位,不是医学学位。要取得医学学位一般都是本科就开始学的临床学科,临床毕竟要求很高的,没有在医院...