1楼：南京金益柏生物科技****
一般来说,选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：
1.二抗应选用与使用的一抗相同的物种**;
2.二抗需与一抗的类别或亚类相匹配.这通常是针对单克隆抗体而言.多克隆抗体主要是igg类免疫球蛋白,因此相应的二抗就是抗igg抗体;
3.一般来说,不同的种属**与二抗的质量没有必然的联系,**于山羊的二抗与**于驴的二抗在一般的实验里没有太多的差别.然而在一些特殊的实验里, 如双标实验里,如果其中一个一抗是山羊**的,一个是小鼠**的,则相应的二抗分别要抗山羊和抗小鼠的二抗,这时候,二抗就不能选择山羊或者小鼠**的.
2楼：阚爽姓彦
免疫荧光法双标法我自己到没做过，不过我一同学在威斯腾生物做过免疫荧光双标
请教免疫荧光双标中荧光二抗的选择是否合适？
3楼：南京金益柏生物科技****
一般来说,选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：
1.二抗应选用与使用的一抗相同的物种**;
2.二抗需与一抗的类别或亚类相匹配.这通常是针对单克隆抗体而言.多克隆抗体主要是igg类免疫球蛋白,因此相应的二抗就是抗igg抗体;
3.一般来说,不同的种属**与二抗的质量没有必然的联系,**于山羊的二抗与**于驴的二抗在一般的实验里没有太多的差别.然而在一些特殊的实验里, 如双标实验里,如果其中一个一抗是山羊**的,一个是小鼠**的,则相应的二抗分别要抗山羊和抗小鼠的二抗,这时候,二抗就不能选择山羊或者小鼠**的.
如何选择荧光二抗？
4楼：百度用户
【一抗的种属**】
二抗应选用与使用的一抗相同的物种**，例如：如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。即根据一抗的物种**选择相应的抗该物种的二抗。
艾美捷能为您提供最全的抗不同种属的原装进口二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗。
【一抗的类别亚型】
二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是igg类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗igg抗体。
其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述，如果你的一抗是小鼠igm，那么相应的二抗就应当是抗小鼠igm。如果单克隆一抗是小鼠igg的某一亚类（igg1，igg2a，igg2b，igg3），那么几乎所有的抗小鼠igg都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠igg1，那么你可以选择抗igg1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种igg。
艾美捷能为您提供通用的igg（h+l）二抗，或者特异性只结合igm的antiigm（mu）antibody、iga的antiiga（alpha-antibody、ige的antiige（epsilon）antibody等。
【二抗的种属**】
一般来说，不同的种属**与二抗的质量没有必然的联系，**于山羊的二抗与**于驴的二抗在一般的实验里没有太多的差别。然而在一些特殊的实验里，如双标实验里，如果其中一个一抗是山羊**的，一个是小鼠**的，则相应的二抗分别要抗山羊和抗小鼠的二抗，这时候，二抗就不能选择山羊或者小鼠**的。艾美捷有相应的驴**的二抗，非常适合做类似双标的免疫实验。
【二抗的耦联标记】
一般来讲，耦联到二抗上的探针主要有酶（辣根过氧化酶hrp和碱性磷酸酶ap或其衍生物apaap，pap），荧光基团（fitc、rhodamine、texasred、pe、rhodamine、dylight等）、生物素、金颗粒。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。对于westernblot和elisa，最常用的二抗是酶标二抗；而细胞或组织标记实验（细胞免疫化学，组织免疫化学，流式细胞术）中通常使用荧光基团标记的二抗，免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记的二抗。
如果想要更大程度的放大检测信号，可以使用biotin/avidin检测系统。在一些荧光检测方案中，则需要选择不同的荧光标记；而金颗粒标记的二抗则更多的应用于免疫电镜中。艾美捷能为您提供上述所有不同类型标记的二抗。
【是否经过血清吸附过的二抗】
为减少二抗与样本的非特异性结合，艾美捷还能为您提供不同血清吸附的原装进口二抗。
免疫荧光双标两种一抗可以一起加吗
5楼：北京索莱宝科技****
一抗种属不同的情况下，免疫荧光双标两种一抗可以一起加：
容易起交叉反应的是二抗，因为二抗会对igg有反应。而一抗是针对特异蛋白表位的。并不是针对igg的。
免疫荧光实验方法（连续双标法）
石蜡切片
1)烘片
在60℃烘箱放置2-4小时，使蜡流失。
2)脱蜡、脱水
二甲苯溶液中脱蜡，2次，每次5min
100%乙醇，2次，每次3min
95%乙醇，1次，每次3min
90%乙醇，1次，每次3min
85%乙醇，1次，每次3min
h2o，1次，每次3min
3)固定
样本切片在冰的甲醇中放置10min(甲醇溶液在-80℃预冷)
用冰的pbs溶液洗2次，每次3min(pbs溶液在-20℃短暂预冷)
4)透化
用含0.25%tritonx-100的pbs孵育石蜡切片10min(200mlpbs+500ultritonx-100)
用pbs溶液洗3次，每次5min
5)第一荧光标记
用pbst配置1%的bsa封闭液，将切片在封闭液中孵育1h
4℃冰箱，一抗过夜
用枪吸走一抗液体，pbs溶液洗3次，每次5min
二抗室温1h
用枪吸走二抗液体，pbs溶液洗3次，每次5min（避光条件下进行）
6)第二荧光标记
4℃冰箱，一抗过夜
用枪吸走一抗液体，pbs溶液洗3次，每次5min
二抗室温1h
用枪吸走二抗液体，pbs溶液洗3次，每次5min（避光条件下进行） 7)dapi对比染色
2g/ml的dapi，15min
用pbs冲洗3次
8)封片
用移液枪吸中性树脂一小滴，盖上盖玻片，用指甲油涂抹边缘，待风干后显微镜照相
如何选择二抗——根据一抗种属及类型选择合适的二抗求解
6楼：天然
二抗广义上是指专门和一抗进
行特异性反应和结合的抗体，在免疫学反应中，经常需要针对试验选择不同的二抗，艾美捷能为您的科研工作提供最适合和最全面的二抗产品。检测任何目的靶蛋白都有不止一种抗体可供选择，同时在后继试验中也会有不同的检测方案，因此在选择二抗的时候要综合考虑一抗的类型及后继检测方案的要求，一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：【一抗的种属**】二抗应选用与使用的一抗相同的物种**，例如：
如果你的一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗则选抗小鼠的二抗（山羊抗小鼠或者兔抗小鼠等均可）；如果一抗是从兔血清里制备的兔源多克隆抗体，则相应的二抗需要选择抗兔的二抗。即根据一抗的物种**选择相应的抗该物种的二抗。艾美捷能为您提供最全的抗不同种属的原装进口二抗，包括抗小鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、人、豚鼠、猪、马、牛、鸡、鸭等二抗。
【一抗的类别亚型】二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是igg类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗igg抗体。
其中单克隆抗体的类别及亚类通常会在产品说明书中都会有描述，如果你的一抗是小鼠igm，那么相应的二抗就应当是抗小鼠igm。如果单克隆一抗是小鼠igg的某一亚类（igg1，igg2a，igg2b，igg3），那么几乎所有的抗小鼠igg都可以与之结合，或者你也可以选择专门针对这一亚类的二抗，例如，如果你的一抗是小鼠igg1，那么你可以选择抗igg1的二抗，此种抗体在双标记实验中尤其适合。在不清楚一抗为何种类/亚类的情况下，可以选用抗相应物种igg。
艾美捷能为您提供通用的igg(h+l)二抗，或者特异性只结合igm的anti igm (mu) antibody、iga的anti iga (alpha-antibody、ige的anti ige (epsilon) antibody等。【二抗的种属**】一般来说，不同的种属**与二抗的质量没有必然的联系，**于山羊的二抗与**于驴的二抗在一般的实验里没有太多的差别。然而在一些特殊的实验里， 如双标实验里，如果其中一个一抗是山羊**的，一个是小鼠**的，则相应的二抗分别要抗山羊和抗小鼠的二抗，这时候，二抗就不能选择山羊或者小鼠**的。
艾美捷有相应的驴**的二抗，非常适合做类似双标的免疫实验。【二抗的耦联标记】一般来讲，耦联到二抗上的探针主要有酶（辣根过氧化酶hrp和碱性磷酸酶ap或其衍生物apaap，pap），荧光基团（fitc、 rhodamine、texas red、pe、rhodamine、dylight等）、生物素、金颗粒。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。
对于western blot和elisa，最常用的二抗是酶标二抗；而细胞或组织标记实验（细胞免疫化学，组织免疫化学，流式细胞术）中通常使用荧光基团标记的二抗，免疫组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记的二抗。如果想要更大程度的放大检测信号，可以使用biotin/avidin检测系统。在一些荧光检测方案中，则需要选择不同的荧光标记；而金颗粒标记的二抗则更多的应用于免疫电镜中。
艾美捷能为您提供上述所有不同类型标记的二抗。【是否经过血清吸附过的二抗】为减少二抗与样本的非特异性结合，艾美捷还能为您提供不同血清吸附的原装进口二抗。如您的检测样本是人源的蛋白，一抗是小鼠源的单克隆抗体，二抗就需要选择抗小鼠源的二抗，如果您对实验的特异性要求很高，那我们向您推荐经过人血清吸附过的抗小鼠源的二抗，这种二抗由于经过人血清吸附而排除了与人源组织（如igg等）可能发生非特异性反应的igg，因此将非特异性结合降低到最低。
【anti-igg还是anti-igg, f(ab’)2 fragment】在一些如胸腺、脾脏、血液的组织以及造血细胞、淋巴细胞、b细胞等细胞内，通常含有较多的fc受体，这时候选择二抗时最好选择anti-igg, f(ab’)2 fragment这样的特异性二抗，这样就消除了由于fc部分与igg的非特异性结合。常规的anti-igg (h+l)二抗与igg的重链和轻链都有结合反应，即与igg的fc的f(ab’)2片段都能结合；由于igg、igm、iga都有保守的轻链结构域，因此anti-igg (h+l)与它们都有交叉反应。而anti-igg, f(ab’)2 fragment经过了igg fc片段的吸附，因此只与igg的f(ab’)2片段结合，然而igg、igm、iga都有保守的轻链结构域，因此与它们也有交叉反应。
【anti-igg(h+l)、anti-igg (gamma)、anti-igm (mu)、anti-iga (alpha)】在一些特殊的实验里，只需要检测样本里的igg或者igm，常规的anti-igg (h+l)由于与igg的重链和轻链都有结合反应，而igg、igm、iga都有保守的轻链结构域，因此不能特异性的检测某种类型的igg或者igm。这时候就需要针对特殊类型ig分子的二抗。艾美捷备有全面的二抗现货产品并能提供最完整的二抗产品线。
主要二抗品牌为全球最大的二抗产品jackson以及前沿抗体生产商earthox。按照标记分，有hrp、ap、生物素等标记二抗，fitc、tritc、rhodamine、cy3/5、dylight等荧光二抗；按照检测物种分，有抗人、大鼠、小鼠、猪、驴、绵羊、山羊、小鸡、马、兔、仓鼠、狗、牛，以及多种细菌类二抗；另外，还有igg、iga、igm以及igg(fc)、igg(ab’)2等不同类型抗体。
免疫荧光双标,免疫荧光双标两种一抗可以一起加吗
1楼 匿名用户 一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑 1 二抗应选用与使用的一抗相同的物种 2 二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是igg类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗igg抗体 3 一般来说，不同的种属 与二抗的质量没有必然的联系， 于山羊的二...