1楼：重量
illumina/solexa genome analyzer测序的基本原理是边合成边测序。在sanger等测序方法的基础上，通过技术创新，用不同颜色的荧光标记四种不同的dntp，当dna聚合酶合成互补链时，每添加一种dntp就会释放出不同的荧光，根据捕捉的荧光信号并经过特定的计算机软件处理，从而获得待测dna的序列信息。
第二代dna测序技术的概述
2楼：小北
dna测序（dna sequencing）作为一种重要的实验技术，在生物学研究中有着广泛的应用。早在dna双螺旋结构（watson and crick,1953)被发现后不久就有人报道过dna测序技术，但是当时的操作流程复杂，没能形成规模。随后在1977年sanger发明了具有里程碑意义的末端终止测序法，同年a.
m.maxam和w.gilbert发明了化学降解法。
sanger法因为既简便又快速，并经过后续的不断改良，成为了迄今为止dna测序的主流。然而随着科学的发展，传统的sanger测序已经不能完全满足研究的需要，对模式生物进行基因组重测序以及对一些非模式生物的基因组测序，都需要费用更低、通量更高、速度更快的测序技术，第二代测序技术（next-generation sequencing)应运而生。这三个技术平台各有优点，454 flx的测序片段比较长，高质量的读长（read）能达到400bp；solexa测序性价比最高，不仅机器的售价比其他两种低，而且运行成本也低，在数据量相同的情况下，成本只有454测序的1/10；solid测序的准确度高，原始碱基数据的准确度大于99.
94%，而在15x覆盖率时的准确度可以达到99.999%，是目前第二代测序技术中准确度最高的。虽然第二代测序技术的工作一般都由专业的商业公司来完成，但是了解测序原理、操作流程等会对后续的数据分析有很重要的作用，下文将以illumina/solexa genome analyzer 测序为例，简述第二代测序技术的基本原理、操作流程等方面。
第二代dna测序法的原理能解释一下么
3楼：匿名用户
dna测序（dna sequencing）作为一种重要的实验技术，在生物学研究中有着广泛的应用。早在dna双螺旋结构（watson and crick,1953)被发现后不久就有人报道过dna测序技术，但是当时的操作流程复杂，没能形成规模。随后在1977年sanger发明了具有里程碑意义的末端终止测序法，同年a.
m.maxam和w.gilbert发明了化学降解法。
sanger法因为既简便又快速，并经过后续的不断改良，成为了迄今为止dna测序的主流。然而随着科学的发展，传统的sanger测序已经不能完全满足研究的需要，对模式生物进行基因组重测序以及对一些非模式生物的基因组测序，都需要费用更低、通量更高、速度更快的测序技术，第二代测序技术（next-generation sequencing)应运而生。这三个技术平台各有优点，454 flx的测序片段比较长，高质量的读长（read）能达到400bp；solexa测序性价比最高，不仅机器的售价比其他两种低，而且运行成本也低，在数据量相同的情况下，成本只有454测序的1/10；solid测序的准确度高，原始碱基数据的准确度大于99.
94%，而在15x覆盖率时的准确度可以达到99.999%，是目前第二代测序技术中准确度最高的。虽然第二代测序技术的工作一般都由专业的商业公司来完成，但是了解测序原理、操作流程等会对后续的数据分析有很重要的作用，下文将以illumina/solexa genome analyzer 测序为例，简述第二代测序技术的基本原理、操作流程等方面。
基本原理
illumina/solexa genome analyzer测序的基本原理是边合成边测序。在sanger等测序方法的基础上，通过技术创新，用不同颜色的荧光标记四种不同的dntp，当dna聚合酶合成互补链时，每添加一种dntp就会释放出不同的荧光，根据捕捉的荧光信号并经过特定的计算机软件处理，从而获得待测dna的序列信息。
第二代dna测序技术的操作流程
4楼：咪浠w眯兮
操作流程如下：
1、测序文库的构建
首先准备基因组，然后将dna随机片段化成几百碱基或更短的小片段，并在两头加上特定的接头。如果是转录组测序，则文库的构建要相对麻烦些，rn**段化之后需反转成cdna，然后加上接头，或者先将rna反转成cdna，然后再片段化并加上接头。
2、锚定桥接
solexa测序的反应在叫做flow cell的玻璃管中进行，flow cell又被细分成8个lane，每个lane的内表面有无数的被固定的单链接头。上述步骤得到的带接头的dna 片段变性成单链后与测序通道上的接头引物结合形成桥状结构，以供后续的预扩增使用。
3、预扩增
添加未标记的dntp 和普通taq 酶进行固相桥式pcr 扩增，单链桥型待测片段被扩增成为双链桥型片段。通过变性，释放出互补的单链，锚定到附近的固相表面。通过不断循环，将会在flow cell 的固相表面上获得上百万条成簇分布的双链待测片段。
4、单碱基延伸测序
在测序的flow cell中加入四种荧光标记的dntp 、dna聚合酶以及接头引物进行扩增，在每一个测序簇延伸互补链时，每加入一个被荧光标记的dntp就能释放出相对应的荧光，测序仪通过捕获荧光信号，并通过计算机软件将光信号转化为测序峰，从而获得待测片段的序列信息。
5、数据分析
这一步严格来讲不能算作测序操作流程的一部分，但是只有通过这一步前面的工作才显得有意义。测序得到的原始数据是长度只有几十个碱基的序列，要通过生物信息学工具将这些短的序列组装成长的contigs甚至是整个基因组的框架，或者把这些序列比对到已有的基因组或者相近物种基因组序列上，并进一步分析得到有生物学意义的结果。
illumina/solexa genome analyzer测序的基本原理是边合成边测序。在sanger等测序方法的基础上，通过技术创新，用不同颜色的荧光标记四种不同的dntp，当dna聚合酶合成互补链时，每添加一种dntp就会释放出不同的荧光，根据捕捉的荧光信号并经过特定的计算机软件处理，从而获得待测dna的序列信息。
5楼：kyoya六
1）测序文库的构建（library construction）
首先准备基因组（虽然测序公司要求样品量要达到200ng，但是gnome analyzer系统所需的样品量可低至100ng,能应用在很多样品有限的实验中），然后将dna随机片段化成几百碱基或更短的小片段，并在两头加上特定的接头（adaptor）。如果是转录组测序，则文库的构建要相对麻烦些，rn**段化之后需反转成cdna，然后加上接头，或者先将rna反转成cdna，然后再片段化并加上接头。片段的大小（insert size）对于后面的数据分析有影响，可根据需要来选择。
对于基因组测序来说，通常会选择几种不同的insert size，以便在组装（assembly）的时候获得更多的信息。
2）锚定桥接（su***ce attachment and bridge amplification）
solexa测序的反应在叫做flow cell的玻璃管中进行，flow cell又被细分成8个lane，每个lane的内表面有无数的被固定的单链接头。上述步骤得到的带接头的dna 片段变性成单链后与测序通道上的接头引物结合形成桥状结构，以供后续的预扩增使用。
3）预扩增（denaturation and ***plete amplification）
添加未标记的dntp 和普通taq 酶进行固相桥式pcr 扩增，单链桥型待测片段被扩增成为双链桥型片段。通过变性，释放出互补的单链，锚定到附近的固相表面。通过不断循环，将会在flow cell 的固相表面上获得上百万条成簇分布的双链待测片段。
4）单碱基延伸测序（single base extension and sequencing）
在测序的flow cell中加入四种荧光标记的dntp 、dna聚合酶以及接头引物进行扩增，在每一个测序簇延伸互补链时，每加入一个被荧光标记的dntp就能释放出相对应的荧光，测序仪通过捕获荧光信号，并通过计算机软件将光信号转化为测序峰，从而获得待测片段的序列信息。从荧光信号获取待测片段的序列信息的过程叫做base calling，illumina公司base calling所用的软件是illumina’s genome analyzer sequencing control software and pipeline analysis software。读长会受到多个引起信号衰减的因素所影响，如荧光标记的不完全切割。
随着读长的增加，错误率也会随之上升。
5）数据分析（data analyzing）
这一步严格来讲不能算作测序操作流程的一部分，但是只有通过这一步前面的工作才显得有意义。测序得到的原始数据是长度只有几十个碱基的序列，要通过生物信息学工具将这些短的序列组装成长的contigs甚至是整个基因组的框架，或者把这些序列比对到已有的基因组或者相近物种基因组序列上，并进一步分析得到有生物学意义的结果。
第二代dna测序技术的应用展望
6楼：匿名用户
http://****nature.***/nbt/journal/v26/n10/full/nbt1486.html
http://shiyan.ebioe.***/dnasequencing01.htm
http://****85922222.***/zsyy/qyjs/201004/4091.html
http://****genomics.purdue.edu/~ltl/data-web/2nd_gen_sequencing.pdf
dna测序基本原理及流程是什么？
7楼：听风
pcr循环测序法是将pcr扩增和核酸序列分析技术相结合,从而形成的一种测定核苷酸序列的研究方法,也称作线性扩增测序.该方法采用pcr仪加热使dna模板变性,在taqdna聚合酶作用下,以温度循环模式在模板上进行多轮的双脱氧核苷酸测序反应,线性扩增标记的dna分子.
pcr循环测序法与以往的测序方法相比,其优点在于：大大减少所需的模板量；能提高测序反应产生的信号,降低了操作的复杂性,且聚合酶的用量减少；可在小量制备的模板上进行筛选反应；高温下进行的测序反应使dna聚合酶催化的聚合反应能够通过模板二级结构的区域；双链闭环dna可以直接作为反应模板应用,不用作预先碱变性处理.由于pcr循环测序法能够简单、快速地检测特定序列,因此, pcr循环测序法在核酸序列分析研究中受到广泛的重视.