DNA测序的测序原理是什么,DNA测序原理及方法

2020-11-22 09:06:33 字数 5462 阅读 7197

1楼:北京索莱宝科技****

dna测序是指分析特定dn**段的碱基序列,也就是腺嘌呤(a)、胸腺嘧啶(t)、胞嘧啶(c)与鸟嘌呤的(g)排列方式。快速的dna测序方法的出现极大地推动了生物学和医学的研究和发现。

其原理是化学试剂处理末段dn**段,造成碱基的特异性切割,产生一组具有各种不同长度的dna链的反应混合物,经凝胶电泳分离。化学切割反应:包括碱基的修饰修饰的碱基从其糖环上转移出去在失去碱基的糖环处dna断裂。

另一个原理是利用一种dna聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dntp),并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddntp)。

由于ddntp缺乏延伸所需要的3-oh基团,使延长的寡聚核苷酸选择性地在g、a、t或c处终止。终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dntps和ddntps的相对浓度可以调整,使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。

它们具有共同的起始点,但终止在不同的的核苷酸上,可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段,凝胶处理后可用x-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。

dna测序原理及方法

2楼:北京索莱宝科技****

dna测序的测序原理:

dna测序是指分析特定dn**段的碱基序列,也就是腺嘌呤(a)、胸腺嘧啶(t)、胞嘧啶(c)与鸟嘌呤的(g)排列方式。快速的dna测序方法的出现极大地推动了生物学和医学的研究和发现。

其原理是化学试剂处理末段dn**段,造成碱基的特异性切割,产生一组具有各种不同长度的dna链的反应混合物,经凝胶电泳分离。化学切割反应:包括碱基的修饰修饰的碱基从其糖环上转移出去在失去碱基的糖环处dna断裂。

另一个原理是利用一种dna聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dntp),并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddntp)。

由于ddntp缺乏延伸所需要的3-oh基团,使延长的寡聚核苷酸选择性地在g、a、t或c处终止。终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dntps和ddntps的相对浓度可以调整,使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。

它们具有共同的起始点,但终止在不同的的核苷酸上,可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段,凝胶处理后可用x-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。

3楼:匿名用户

给个比较容易理解的也比较专业的**

开开眼界吧

dna测序的测序原理

4楼:手机用户

就是利用一种dna聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dntp),并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddntp)。

由于ddntp缺乏延伸所需要的3-oh基团,使延长的寡聚核苷酸选择性地在g、a、t或c处终止。终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dntps和ddntps的相对浓度可以调整,使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。

它们具有共同的起始点,但终止在不同的的核苷酸上,可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段,凝胶处理后可用x-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。

5楼:生物之家

通过使用链

终止剂—类似于正常dntp的2’,3’-双脱氧核苷三磷酸(ddntp),将延伸的dna链特异性地终止。其反应体系也包括单链模板、引物、4种dntp和dna聚合酶。共分四组,每组按一定比例加入一种 (ddntp),它能随机渗入合成的dna链,一旦渗入合成即终止,于是各种不同大小片段的末端核苷酸必定为该种核苷酸,可以从放射自显影带上直接阅读dna的核苷酸序列。

6楼:北京索莱宝科技****

dna测序是指分析特定dn**段的碱基序列,也就是腺嘌呤(a)、胸腺嘧啶(t)、胞嘧啶(c)与鸟嘌呤的(g)排列方式。快速的dna测序方法的出现极大地推动了生物学和医学的研究和发现。

其原理是化学试剂处理末段dn**段,造成碱基的特异性切割,产生一组具有各种不同长度的dna链的反应混合物,经凝胶电泳分离。化学切割反应:包括碱基的修饰修饰的碱基从其糖环上转移出去在失去碱基的糖环处dna断裂。

另一个原理是利用一种dna聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dntp),并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddntp)。

由于ddntp缺乏延伸所需要的3-oh基团,使延长的寡聚核苷酸选择性地在g、a、t或c处终止。终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dntps和ddntps的相对浓度可以调整,使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。

它们具有共同的起始点,但终止在不同的的核苷酸上,可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段,凝胶处理后可用x-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。

dna 的 1代测序,2代测序,3代测序的区别是什么啊?

7楼:垠元

第一代测序:指双脱氧末端终止法,扩增后通过毛细管电泳读取序列,每次获取数据量少。

第二代测序:为高通量测序,采用微珠或高密度芯片边合成边测序,代表有454,solexa,solid,高通量,可一次获得数g数据,相对与第三代,都仍然需要扩增的方法放大信号,扩增后再检测。

第三代测序:特点是单分子测序,多基于纳米科技,无需扩增,对单分链dna/rna直接用合成、降解、通过纳米孔等方式直接测序,核心特点是无需扩增所以成本更低。

8楼:匿名用户

你说的1代2代指的是子代1代,2代吗?原本的双链dna就是亲代,以亲本为模板复制产生的子代dna就是子1代,子2代.....

dna测序基本原理及流程是什么?

9楼:听风

pcr循环测序法是将pcr扩增和核酸序列分析技术相结合,从而形成的一种测定核苷酸序列的研究方法,也称作线性扩增测序.该方法采用pcr仪加热使dna模板变性,在taqdna聚合酶作用下,以温度循环模式在模板上进行多轮的双脱氧核苷酸测序反应,线性扩增标记的dna分子.

pcr循环测序法与以往的测序方法相比,其优点在于:大大减少所需的模板量;能提高测序反应产生的信号,降低了操作的复杂性,且聚合酶的用量减少;可在小量制备的模板上进行筛选反应;高温下进行的测序反应使dna聚合酶催化的聚合反应能够通过模板二级结构的区域;双链闭环dna可以直接作为反应模板应用,不用作预先碱变性处理.由于pcr循环测序法能够简单、快速地检测特定序列,因此, pcr循环测序法在核酸序列分析研究中受到广泛的重视.

dna测序的原理?基因组测序的原理?

10楼:匿名用户

我认为有的。

dna序列测定分手工测序和自动测序,手工测序包括sanger双脱氧链终止法和maxam-gilbert化学降解法。自动化测序实际上已成为当今dna序列分析的主流。自动化测序是在sanger法基础上发展而来的。

dna测序的原理,要答 maxam-gilbert化学降解法、sanger双脱氧链终止法和现在发展起来的焦磷酸化测序的原理。

如果说现在最常用的测序原理,应答自动化测序:采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳,应用该公司专利的四色荧光染料标记的ddntp(标记终止物法),因此通过单引物pcr测序反应,生成的pcr产物则是相差1个碱基的3'末端为4种不同荧光染料的单链dna混合物,使得四种荧光染料的测序pcr产物可在一根毛细管内电泳,从而避免了泳道间迁移率差异的影响,大大提高了测序的精确度。由于分子大小不同,在毛细管电泳中的迁移率也不同,当其通过毛细管读数窗口段时,激光检测器窗口中的ccd(charge-coupled device)摄影机检测器就可对荧光分子逐个进行检测,激发的荧光经光栅分光,以区分代表不同碱基信息的不同颜色的荧光,并在ccd摄影机上同步成像,分析软件可自动将不同荧光转变为dna序列,从而达到dna测序的目的。

http://****biobars.**/article/view.asp?id=309

基因组测序的原理:则涉及到样品的制备、大规模的测序,以及序列分析等

参见http://****majorbio.***/teq/454-gs_flx.shtml

基因测序原理是什么?

11楼:颜白似悦

基因是位于dna上的,其测序的原理是一样的dna测序的方法有很多种.

目前最常见的是双脱氧终止法了.

在测序用的缓冲液中含有四种dntp及聚合酶.

测序时分成四个反应,

每个反应除上述成分外分别加入2,3-双脱氧的a,c,g,

t核苷三磷酸(称为ddatp,

ddctp,

ddgtp,

ddttp),

然后进行聚合反应.

在第一个反应物中,

ddatp会随机地代替datp参加反应一旦ddatp加入了新合成的dna链,

由于其3位的羟基变成了氢,

所以不能继续延伸.

所以第一个反应中所产生的dna链都是到a就终止了;

同理第二个反应产生的都是以c结尾的;

第三个反应的都以g结尾,

第四个反应的都以t结尾,

电泳后就可以读出序列了.

也许这样说你不一定明白.

举一个例子,

假如有一个dna,

互补序列是gatccgat,

我们试着做一下:

在第一个反应中由于含有dntp+ddatp,所以遇到g,

t,c三个碱基时没什么问题,

但遇到a时,

掺入的可能是datp或ddatp,

比如已合成到g,

下一个如果参与反应的是ddatp则终止,

产生一个仅有2个核苷酸的序列:

ga,否则继续延伸,

可以产生序列gatccg,

又到了下一个a了.

同样有两种情况,

如果是ddatp掺入,

则产生的序列是gatccga,

延伸终止,

否则可以继续延伸,

产生gatccgat.

所以在第一个反应系统中产生的都是以a结尾的片段:

ga,gatccga,

同理在第二个反应中产生的都是以c结尾的片段:

gatc,

gatcc,

在第三个反应中产生的都是以g结尾的片段:

g,gatccg

在第四个反应中产生的都是以t结尾的片段:

gat,

gatccgat,

电泳时按分子量大小排列,

a反应的片段长度为2,

7;c反应的为4,

5;g反应的为1,

6;t反应的为3,

8,四个反应的产物分别电泳,

结果为876

5432

1a||

c||g

||t|

|我们可以从右向左读,

为gatccgat,

至此,测序完成

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