1楼：匿名用户
没有影响,最后读值时的吸收值和你细胞培养液颜色又不是一个步骤
能用细胞培液做western吗
2楼：匿名用户
当然可以，但是需要无血清培养液（里面的血清含有太多的杂蛋白），而且蛋白浓度太低了，需要用到超滤管进行浓缩。具体你去查超滤管的说明书吧。
请教：用培养的细胞做western
3楼：匿名用户
做western blot需要多少细胞并不是一个固定的值这主要取决于蛋白的表达量，没有一个绝对的量如果做细胞总蛋白的话，至少10的4次方细胞每微升蛋白裂解液。一般可以每泳道取10的5次方细胞每微升蛋白裂解液（即10微升上样）
根据这个数量级，结合western blot结果进行调整即可确认做western blot需要多少细胞
如何用western blot方法从细胞培养上清中检测目的蛋白
4楼：
western blot中蛋白样品调节浓度有很多方法 先检测出各个蛋白样品的浓度，根据体积通过不同单位的loading buffer将样品稀释成不同的体积，即可以保证各个蛋白样品浓度一致 或者在样品裂解的时候，用裂解液或者pbs去稀释蛋白样品，达到调节浓度的。
细胞培养液上清和血液中的细胞因子有区别吗
5楼：我哩岁月
有区别。细胞培养液是一种含有细胞分泌蛋白和死细胞的细胞培养液，而细胞因子是免疫反应、造血和炎症反应产生和维持所必需的蛋白质类物质。
细胞培养的上清中有目的蛋白需要用来刺激其他细胞，怎么去除培养基里的血清
6楼：
有区别。细胞培养液是一种含有细胞分泌蛋白和死细胞的细胞培养液，而细胞因子是免疫反应、造血和炎症反应产生和维持所必需的蛋白质类物质。
eg：细胞因子，是检测培养液中的蛋白还是细胞抽提物
7楼：
你不妨对细胞内外的蛋白都做一个检测，但是检测细胞外的蛋白比较麻烦。因为培养基的成分本身很复杂。等细胞长满后用完全培养基培养24小时，然后用pbs洗两遍，加hepes溶液，使细胞覆盖就行。
培养2-3天收集培养液离心，浓缩上清至原体积的1/30-1/10,然后做western检测。如果还检测不出来就用上述液做个免疫沉淀，然后做western。但这样就误差太大，基本看不出来变化。
所以建议：（1）以细胞内的蛋白做，刺激时间不要过长。（2）用表达量与此蛋白有直线相关的其他蛋白来代替，比如其信号通路上下游的一些激酶之类的。
如何提细胞的组蛋白做western blot？
8楼：
你的意思就是提取核蛋白，提取核蛋白和提取全蛋白用的裂解液是不一样的。一般情况下我们都是买试剂盒，里面包含有细胞裂解液和核裂解液，按照说明书实用就行了。
1 20mmol/l的hepe（ph 7.9）2 420mmol/l nacl
3 1.5mmol/l mgcl2
4 2%igepal
5 0.5mmo/l edta
6 20%甘油
7 1mmol/l dtt
8 0.25mmol/l pmsf
9 5ug/ml aprotinin
10 5ug/ml pepstatin
11 5ug/ml leupeptin
或者你可以按照这个配，这个是细胞核裂解液。
做法就是，你按顺序提了全蛋白以后把上清弃掉，在沉淀中加入这个核裂解液，**然后离心，此时上清就是核蛋白了。
9楼：匿名用户
通过有机溶剂或水溶法制备总蛋白
水溶液提取法
针对水、稀盐、稀酸或碱溶液中的蛋白质。稀盐和缓冲系统的水溶液
对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂 。
细胞裂解液： 50 mmol/l tris-hcl, 150 mmol/l nacl ,5 mmol/l edta, 1%np40 ， 0.05% pmsf ， 2μg/ml aprotinin, 0.
5μg/ml leupeptin ， ph8.0
有机溶剂提取法
对于分子中非极性侧链较多的蛋白质可用有机溶剂提取，包括乙醇、
丙酮和丁醇等。
通过层析或电洗脱法制备目的蛋白
bradford法
考马斯亮蓝g-250有红、蓝两种不同颜色的形式，在一定浓度的乙醇和酸性条件下，可配成淡红色的溶液，与蛋白结合后形成蓝色化合物，该化合物在595nm处有最大吸收值，化合物颜色深浅与蛋白的浓度高低成正比 。(上样量)
试剂：考马斯亮蓝工作液，0.1n盐酸，双蒸水，蛋白标准液（ 将10mg/ml蛋白溶液稀释至4.
0mg/ml, 3.5mg/ml, 3.0mg/ml, 2.
5mg/ml, 2.0mg/ml, 1.5mg/ml, 1.
0mg/ml, 0.5mg/ml。）
sds 是一种离子性的界面活性剂,它有强离子性的硫酸根离子也带有疏水
性的长碳链.当 sds 与蛋白质混合时,它会以其碳链与蛋白质之疏水性胺
基酸结合将蛋白质包起来,而以硫酸根离子外露与水分子作用.大多数蛋
白质和 sds 的平均结合量是 1:1.4 (以重量为单位),而蛋白质结合固定
比例之 sds 后,由於 sds 带强负价,使蛋白质原先的带电价微不足道,且
每单位重量之蛋白质带电价一致 (charge density),所以决定不同蛋白的泳动速率就只剩下分子大小一项因素
把硝酸纤维素滤膜放在密闭塑料袋或者培养皿中，根据滤膜面积以0.1ml/cm2的量加入加入一抗溶液与滤膜温育。37℃一小时，4 ℃过夜。
倒掉一抗溶液，用pbs漂洗液滤膜3次，每次10min。
加入用封闭液配制的二抗，摇床上缓慢摇动， 37℃一小时，4 ℃过夜。
倒掉一抗溶液，用pbs漂洗液滤膜3次，每次10min
10楼：匿名用户
差速离心先分离出细胞核，然后可以抽总核蛋白做wb。钱多的话有专门的试剂盒提组蛋白的。
11楼：
干嘛非要提组蛋白呢？直接提取细胞总蛋白，然后用组蛋白的抗体检测就是了，裂解液就用一般的就是了
细胞水煮裂解做western好吗
12楼：我痛得多漂亮
蛋白提取时使用蛋白裂解液将细胞裂解，然后离心分为上清液和下层沉淀，如果你说的是这个上清液的话，那么这个上清液是细胞中的可溶性蛋白，一般包括细胞质的蛋白和细胞核的可溶性蛋白，下层沉淀主要是细胞碎片以及不可溶的蛋白以及染色质之类的。