什么叫酶的活力和比活力?测定酶活力应注意什么

2020-11-24 19:42:19 字数 5102 阅读 2653

1楼:渊源

酶活力(enzyme activity)也称为酶活性,是指酶催化一定化学反应的能力。酶活力的大小可用在一定条件下,酶催化某一化学反应的速度来表示,酶催化反应速度愈大,酶活力愈高,反之活力愈低。

根据酶的特性及定量原理,测定酶活力时,必须注意以下几点:

(1)酶促反应过程中,只有最初一段时间内反应速度与酶活性成正比,随着反应时间的延长,反应速度即逐渐降低。

(2)要规定一定的反应条件,如时间、温度、ph等,并在酶测定过程中保持这些反应条件的恒定,如温度不得超过规定温度的士1℃,ph应恒定。

(3)配制的底物浓度应准确且足够大,底物液中应加入不抑制该酶活力的防腐剂并保存于冰箱中,以防止底物被分解。

(4)标本要新鲜,由于绝大多数酶可因久置而活力降低,标本如无法及时测定,应保存于冰箱中。用血浆时,应考虑到抗凝剂对酶反应的影响。有些酶在血细胞、血小板中的浓度比血清高,为此在采血、分离血清时,应注意防止溶血和白细胞的破裂。

酶活力测定的注意事项有哪些

2楼:牙口竟品点

注意事项:

1.底物浓度 除选择适合的底物外,在实际应用中更多考虑的是底物浓度。由于[s]与反应速度v成双曲线关系,在酶活性测定时,要求[s]达到一定水平以保证酶活性与酶量成正比。[s]范围一般选择在10~20km为宜,此时反应速度基本达到最大反应速度,测定的误差在可接受范围。

2.酶浓度 在反应条件一定时,酶浓度与反应速度成正比。按照中间产物学说,只有[s]>>[e]时,酶才能被底物分子饱和,反应速度才能达到最大值。因此当标本酶活力过高时,应将标本适当稀释后再加以测定。

3.温度 不同的酶最适温度可以不同,多数酶的最适温度在37~40℃,高于或低于最适温度,酶活性都降低。目前,酶活性的测定温度尚未统一,但常规实验室多使用37℃。温度对酶促反应的影响程度通常用温度系数(q10)表示。

温度系数指温度每升高10℃,化学反应速度增加的倍数。q10通常为l~2。由温度系数得知,温度的变化对酶活性有着重要影响,因此要求酶活性测定要在恒温条件下进行,温度波动要控制在±1℃。

4.离子强度和ph值 在最适ph时,酶的活性最强,高于或低于最适ph,酶的活性都降低,多数酶的最适ph在5~8之间。在测定酶活性时,要求缓冲液具有足够的缓冲容量,以便使ph值保持稳定。血浆或血清标本含有多种缓冲溶质,具有较强的缓冲能力。

为了防止血浆或血清标本缓冲溶质对反应液酸碱度的影响,使ph不致偏离设定值,标本用量不宜过大,血浆或血清标本体积/反应液体积≤1/10为宜。

5 辅助因子 某些金属离子和维生素类辅酶是结合酶的辅助因子,例如zn2+是羧基肽酶的辅基,mo6+是黄嘌呤氧化酶的辅基,nadh是不需氧脱氢酶的辅酶。这些酶离开它们的辅基或辅酶就不能表现活性,因此在酶活性测定时,就要保证辅基或辅酶的供给。

6.激活剂 有些酶在有激活剂存在时才有活性或活性较高,例如mg2+是肌酸激酶的激活剂,cl-是淀粉酶的激活剂。因此在酶活性测定时,也要满足酶对激活剂的需要。

7.抑制剂 酶的抑制可分为不可逆抑制和可逆抑制,后者又可分为竞争性抑制和非竞争性抑制。重金属离子和砷化物对巯基酶的抑制、有机磷对羟基酶的抑制属于不可逆抑制;丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制、磺胺类药物对二氢叶酸合成酶的抑制属于竞争性抑制;哇巴因对na+,k+-atp酶的抑制属于非竞争性抑制。抑制剂使酶活性降低,在测定酶活性时,应避免抑制剂的影响。

综上所述,测定酶活性时,最适条件的选择应该遵循最适底物浓度、最适温度、最适ph值、满足辅助因子和激活剂、避免抑制剂的原则。

酶活力测定的注意事项有哪些?

3楼:匿名用户

1.底物浓度 除选择适合的底物外,在实际应用中更多考虑的是底物浓度。由于[s]与反应速度v成双曲线关系,在酶活性测定时,要求[s]达到一定水平以保证酶活性与酶量成正比。[s]范围一般选择在10~20km为宜,此时反应速度基本达到最大反应速度,测定的误差在可接受范围。

2.酶浓度 在反应条件一定时,酶浓度与反应速度成正比。按照中间产物学说,只有[s]>>[e]时,酶才能被底物分子饱和,反应速度才能达到最大值。因此当标本酶活力过高时,应将标本适当稀释后再加以测定。

3.温度 不同的酶最适温度可以不同,多数酶的最适温度在37~40℃,高于或低于最适温度,酶活性都降低。目前,酶活性的测定温度尚未统一,但常规实验室多使用37℃。温度对酶促反应的影响程度通常用温度系数(q10)表示。

温度系数指温度每升高10℃,化学反应速度增加的倍数。q10通常为l~2。由温度系数得知,温度的变化对酶活性有着重要影响,因此要求酶活性测定要在恒温条件下进行,温度波动要控制在±1℃。

4.离子强度和ph值 在最适ph时,酶的活性最强,高于或低于最适ph,酶的活性都降低,多数酶的最适ph在5~8之间。在测定酶活性时,要求缓冲液具有足够的缓冲容量,以便使ph值保持稳定。血浆或血清标本含有多种缓冲溶质,具有较强的缓冲能力。

为了防止血浆或血清标本缓冲溶质对反应液酸碱度的影响,使ph不致偏离设定值,标本用量不宜过大,血浆或血清标本体积/反应液体积≤1/10为宜。

5 辅助因子 某些金属离子和维生素类辅酶是结合酶的辅助因子,例如zn2+是羧基肽酶的辅基,mo6+是黄嘌呤氧化酶的辅基,nadh是不需氧脱氢酶的辅酶。这些酶离开它们的辅基或辅酶就不能表现活性,因此在酶活性测定时,就要保证辅基或辅酶的供给。

6.激活剂 有些酶在有激活剂存在时才有活性或活性较高,例如mg2+是肌酸激酶的激活剂,cl-是淀粉酶的激活剂。因此在酶活性测定时,也要满足酶对激活剂的需要。

7.抑制剂 酶的抑制可分为不可逆抑制和可逆抑制,后者又可分为竞争性抑制和非竞争性抑制。重金属离子和砷化物对巯基酶的抑制、有机磷对羟基酶的抑制属于不可逆抑制;丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制、磺胺类药物对二氢叶酸合成酶的抑制属于竞争性抑制;哇巴因对na+,k+-atp酶的抑制属于非竞争性抑制。抑制剂使酶活性降低,在测定酶活性时,应避免抑制剂的影响。

综上所述,测定酶活性时,最适条件的选择应该遵循最适底物浓度、最适温度、最适ph值、满足辅助因子和激活剂、避免抑制剂的原则。

进行酶活力测定时应注意什么

4楼:匿名用户

测定酶活力时,必须注意以下几点:

(1)酶促反应过程中,只有最初一段时间内反应速度与酶浓度成正比,随着反应时间的延长,反应速度即逐渐降低。

(2)要规定一定的反应条件,如时间、温度、ph等,并在酶测定过程中保持这些反应条件的恒定,如温度不得超过规定温度的士1℃,ph应恒定。

(3)配制的底物浓度应准确且足够大,底物液中应加入不抑制该酶活力的防腐剂并保存于冰箱中,以防止底物被分解。

(4)标本要新鲜,由于绝大多数酶可因久置而活力降低,标本如无法及时测定,应保存于冰箱中。用血浆时,应考虑到抗凝剂对酶反应的影响。有些酶在血细胞、血小板中的浓度比血清高,为此在采血、分离血清时,应注意防止溶血和白细胞的破裂。

(5)在测定过程中,所用仪器应绝对清洁,不应含有酶的抑制物,如酸、碱、蛋白沉淀剂等。

测定酶活力要注意控制哪些条件?

5楼:暖萱紫菱

1.底物浓度 除选择适合的底物外,在实际应用中更多考虑的是底物浓度。由于[s]与反应速度v成双曲线关系,在酶活性测定时,要求[s]达到一定水平以保证酶活性与酶量成正比。

2.酶浓度 在反应条件一定时,酶浓度与反应速度成正比。按照中间产物学说,只有[s]>>[e]时,酶才能被底物分子饱和,反应速度才能达到最大值。因此当标本酶活力过高时,应将标本适当稀释后再加以测定。

3.温度 不同的酶最适温度可以不同,多数酶的最适温度在37~40℃。高于或低于最适温度,酶活性都降低。

4.离子强度和ph值 在最适ph时,酶的活性最强,高于或低于最适ph,酶的活性都降低。

5 辅助因子 某些金属离子和维生素类辅酶是结合酶的辅助因子。这些酶离开它们的辅基或辅酶就不能表现活性,因此在酶活性测定时,就要保证辅基或辅酶的供给。

6.激活剂 有些酶在有激活剂存在时才有活性或活性较高。因此在酶活性测定时也,要满足酶对激活剂的需要。

7.抑制剂 酶的抑制可分为不可逆抑制和可逆抑制,后者又可分为竞争性抑制和非竞争性抑制。重金属离子和砷化物对巯基酶的抑制、有机磷对羟基酶的抑制属于不可逆抑制;丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制、磺胺类药物对二氢叶酸合成酶的抑制属于竞争性抑制;哇巴因对na+,k+-atp酶的抑制属于非竞争性抑制.抑制剂使酶活性降低,在测定酶活性时,应避免抑制剂的影响。

6楼:匿名用户

1保持待测材料的酶活 2在分光光度计下待测是控制反应时间

请解释什么是酶的活力和酶的比活力,并说

7楼:威尔格陵兰

酶的活力:酶的活力是指酶催化某一化学反应的能力,活力大小可以用一定条件下所催化的某一化学反应的反应速率来表示。

活力单位(iu):最适反应条件下(温度25c°),每分钟内催化1微摩尔底物转化为产物所需要的酶量定义为一个酶活力单位。

比活力:代表酶的纯度,用每毫克蛋白所含的酶活力单位数表示。

8楼:

酶的活力单位是指--在最适条件下,每分钟内催化1微摩尔(μmol)底物转化为产物所需的酶量。“每克酶单位含100酶活力单位”--应该是“每克酶制剂含有100个酶活力单位”,你也可以理解成一分钟之内可以将100微摩尔底物催化成产物,其实说的是酶的纯度,含酶量。

9楼:健十**官方客服

酶活力是酶催化反应的能力,用酶活单位表示;在酶的纯化过程中常表示酶的**率.比活力是单位质量的酶制剂所具有的酶活单位数,在纯化过程中,它所反映的是酶制剂的纯度。

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测定酶活力时应遵循哪些基本原则,配合日粮时应遵循哪些基本原则?

1楼 邂逅 1 酶促反应过程中,只有最初一段时间内反应速度与酶活性成正比,随着反应时间的延长,反应速度即逐渐降低。 2 要规定一定的反应条件,如时间 温度 ph等,并在理酶测定过程中保持这些反应条件的恒定,如温度不得超过规定温度的士1 ,ph应恒定。 3 配制的底物浓度应准确且足够大,底物液中应加入...

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