1楼：手机用户
不一样的，引物的tm是引物本身的解链温度，软件一般会自动给出。溶解曲线横坐标的tm是pcr产物的解链温度，所以一般是比引物本身的tm值大的。
2楼：匿名用户
tm是当50％的引物和互补序列表现为双链dna分子时的温度。tm对于设定pcr退火温度是必需的。
tm可采用下列公式计算：tm＝2(a+t) + 4(g+c)。
3楼：匿名用户
不是一回事，引物的tm值不等与反应时的tm值。反应时的tm值测量的应该是整个体系的。
谁能具体解释一下荧光定量pcr中溶解曲线的意思以及作用
4楼：匿名用户
这个用于syber green实时pcr。而使用探针的不需要。
因为syber green是非特异性结合，所以如果有非特异性的序列被扩增，也会同样产生信号。在设计引物的时候，可以计算出被扩增序列的tm。pcr反应完成以后，开始进行解离曲线的测量。
一般是对反应产物逐步加温，每增加一度，测信号一次。pcr产物会在温度达到tm时发生解离，荧光信号会一下子消失、如果把温度和荧光信号的变化做一个图，就会看到一开始，荧光信号没有变化，是一个平直的线。达到tm附近是，会有一个比较锐利的峰，说明信号的变化很大，继续加热超过tm，这是双链都打开了。
所以信号也不会再有变化，所以又是平直的线。
如果产物都是特异性的，就是我上面说的那样。如果有非特异性产物，就会出现不在tm就出现峰值，或者有矮而胖的峰值等等异常情况出现，这样，那个管子的样本就不能用了。
实时定量pcr的tm值相差多少可以接受
5楼：匿名用户
用2-△△ ct法算的话，应如何算？ 假设检测a基因，ct分别为（这里记住ct越大，表明相对含量越低） 普通组/test1：28 实验组1/test2：
29 实验组2/test3：30 这时候要设对照了，假设test1为对照组（普通组），当然是以普通组为对照 那么，相对含量为。
实时荧光定量pcr，溶解曲线怎么判断是否为目的产物
6楼：南京金益柏生物科技****
根据曲线初步判断，整个实验设计还可以！你做相对定量吗，将样品结果与对照看看基因表达量分析就可以了！ 如果绝对定量，需要进一步实验吧！
7楼：为青生物
溶解曲线的单峰明显，横坐标在80度以上，一般就是pcr产物
谁能具体解释一下荧光定量pcr中溶解曲线的意思以及作用
8楼：匿名用户
溶解曲线是判断扩增产物是否单一的曲线，顾名思义，其跟模板（或其浓度）没有关系，扩增什么基因就应该有其相对应的溶解曲线，类似于电泳。那么你扩增几种基因就应该有几种对应的峰（一般sybr法的目的基因在80~90℃之间），我说的是一般情况，这个跟扩增片段长短有关系。出现其他峰就该考虑是否为引物二聚体（一般为60~75℃之间）视引物长度而定，而基因组dna污染的峰会在90℃以后。
出现引物二聚体可能是引物设计、引物加量等原因（也有可能是从加完反应液到上机开始pcr这之间的时间过长）所致；基因组dna那么考虑设计跨内含子引物或者实验之前做gdna的消除工作。而阴性对照有目的峰那可能就是模板污染，注意实验操作等避免模板污染。
详细请见我的回答：http://zhidao.baidu.com/question/548001369.html?from=pubpage&msgtype=2
9楼：表咏蒿乐蓉
用syber
green方法做完pcr后，用来判断产物是否相对专一。反应结束后，逐渐加温。和syber
green分子结合的pcr产物随温度升高逐渐变为单链，就不能在和syber
green结合。一般每加温一度，读一次信号。当温度到达pcr产物的tm时，产物解离一下增多。
曲线的横坐标是温度，而纵坐标是荧光信号的变化！开始加热，信号变化不大，所以几乎是平的，接近tm时，突然变化加大，所以出现峰值。再升温，产物全部解离，就又是一条直线了。
如果有非特异性产物，在加热过程中就会出现一些比较矮，宽的峰。
求助，荧光定量pcr扩增曲线和溶解曲线
10楼：抹不掉呀
实时pcr产物的tm值大小一般会在80deg;上下，所以溶解曲线不必从40deg;开始，可以从65deg;开始进行溶解曲线绘制，另外在产物之前出现的小峰，同时也在阴性对照中出现了，应该是引物二聚体或者是非特异的扩增。
11楼：真莉莉毕田
通过你的描述目前还有很多信息不实很了解：目的片段长度？pcr反应条件？
管家基因的溶解曲线怎么样？做的什么实验？是否将产物跑了电泳，条带怎么样？
你可以将上述问题整理一下在一些专业性较强的生物论坛发帖子让其他大神帮你分析一下。比如丁香园、生物秀等等。
出现怪异的溶解曲线大部分都是机器设置或者反应体系的问题，建议：
1、将扩增产物跑一下电泳，看一下目的条带亮不亮2、一般定量pcr扩增后目的片段的峰在80~90℃之间，反应条件确认一下设置是否有问题
3、适当增加模板量或者减少引物浓度。
4、用的是哪个公司的酶？问一下这个公司的技术支持
sybr green pcr溶解曲线有何意义
12楼：坏蛋老公他媳妇
作用类似于电泳，但是相对于电泳更灵敏，更清晰一些。
通过溶解曲线可
以了解目的产物tm值，是否出现杂峰。一般溶解曲线的结果+电泳的结果和在一起相对比较准确。当然最后片段也可以测序最终确定目的产物。
主要的是：根据溶解曲线可以确定以下几点：
a.扩增产物是否单一，即是否含有引物二聚体等其它非目的性产物。如果在90度左右的时候溶解曲线陡然下降，说明产物较纯。
b.可以确定产物的tm值，一般在90度以上。
可能用途更多，最常用的主要的两点就是这两个了。
针对溶解曲线还有一条相应的曲线，看起来更方便一些。
dna溶解曲线表示扩增产物的特异性。
曲线横坐标是温度，每个温度点一个。一般从60到98度纵坐标是荧光强度的变化值（不是强度本身）。一开始加热的时候，虽然荧光强度比较强，但是由于双链没有解离，所以荧光强度保持不变。
当加热接近于pcr产物tm时，双链开始解离，荧光强度变小，机器会比较前后2个温度点的荧光强度，然后把2者的差值标在图上。tm到达时，有一般双链解离，这时的荧光强度变化最大（峰值）。再加热，双链全部解离，所以荧光强度的变化又变小了。
pcr产物大小不一，但是只要有相同或者相近的tm，峰值就有可能在一个位置上。如果实际测得的峰值和理论计算的吻合，问题不大。如果有差别，说明有非特异性产物，不要再用sybr green方法。
荧光定量pcrtm值代表啥意思
13楼：满意请采纳哟
tm值和溶解曲线是为了检测pcr反应特异性的，
主峰前的一个小峰可能是非特异性扩增，
也可能是引物二聚体，可以降低引物浓度试试