1楼:笑敬过往
ct= -k lgx0+ b(线性方程)用这个方程可以通过ct值算出样品的起始浓度 斜率=-1/lg(1+e) 扩增效回率e=1, 斜率=-3.32 扩增效率范围答:90%-110% 斜率范围:
-3.1和-3.59之间 △△ct这是相对荧光定量的一个计算公式的简化形式,用于比较不同样品之间的差。
2楼:匿名用户
qpcr扩增效率如何计算
荧光定量pcr标准曲线有几个梯度
相对定量 相对定量得到的结果为特定样本中目的基因相对于另一参照样本的量的变化。 在某些不需要对基因进行绝对定量,只需要确定基因相对表达差异的情况下,如某样品在经过某种处理后目的基因表达量是增加了还是减少了,用相对定量的方法就可以得到结果,......
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如何进行qpcr结果分析?这篇文章或许能帮到你
实质等同性**录组学)实验
数字pcr技术的发展与应用简介
实时定量pcr探针概述
基于数字pcr的单分子dna定量技术研究进展(二)
请教下大神,实时定量pcr(qpcr)实验,看扩增曲线的意义是什么?
3楼:科研高手
你好,扩增曲线可以粗略地判断扩增效
率。sybr green的双delta ct法要求目的基因和内参的扩增效率基本一致。如果不一致,需要对公式进行修正,部分qpcr仪的配套软件可以做到,直接输入每对引物的扩增效率。
但无论如何,保证高扩增效率是实验成功的关键。如果扩增效率一致,不同ct的曲线显示出来就基本是平行的位移,其倾斜程度基本一致。而如下图一样,一条比较“陡”,另一条比较“平”,那么意味着扩增效率不一致。
有可能是引物效率不一,或者个别样品、反应孔存在抑制pcr的污染等。
来自:肽度时界威客吴博士,有科研难题、科研需求就上肽度时界吧!
影响pcr扩增效率的因素有哪些
4楼:匿名用户
主要考bai虑是否在模板稀释过程中出现问du题,是否存在zhi高浓度样品污染低浓
dao度样品的情况。具回体的要看了你的扩增
答曲线、溶解曲线以及标准曲线的结果才能判断。其次题主提到的两个问题1、模板浓度过高会抑制pcr反应,可能会导致扩增效率降低。但同时可能会出现非特异性扩增导致结果的ct值不可信,最终导致扩增效率不可信。
2、在一定范围内提高退火温度不会太影响扩增效率。
请问荧光定量pcr进行相对定量时,若是目的基因和内参基因扩增效率不一致,为什么会导致结果的不准确?
5楼:匿名用户
你先得弄清相来对定量什么自
意思,举个例子,样bai品a和样品b中检测基因duy的表达水平,以b-actin为内
zhi参,相对定量就dao是用样品a中的基因y的量除以b-actin得到值y1,用样品b中的基因y的量除以b-actin得到值y2,然后y1/y2就是基因y在样品a和b中的相对表达水平。若基因y和b-actin扩增效率不一致,那么y1/y2就不能反映实际情况了。
扩增效率是由退火温度和引物效率决定的,需要试多个退火温度和多对引物,希望有帮助
6楼:匿名用户
相对定量有抄两种方法。要求扩增效率相同的是δδct法,因为只有扩增效率相同目的基因与内参基因的ct值之差才是恒定的值,这是使用这种方法处理数据的前提,所以正式实验之前要进行条件优化,这种方法的优势是不用作标准曲线。如果扩增效率不同就要用另一种双标准曲线法,这种方法需要标准品,稀释不同的浓度梯度,作标准曲线,根据标准曲线得到你的拷贝数在进行数据处理,得到相对值。
希望能对你有帮助……
qpcr标准曲线斜率与扩增效率的关系
7楼:匿名用户
扩增效率=(10^(-(1/斜率)))-1
所以当斜率=3.3时,扩增效率为100%。
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主营业务收入连续三年增长率怎么计算
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