1楼:
又阴性对照,阳性对照,有目标带的话,
几条带不重要,
因为只是检查有没有而已,不用取优化pcr,浪费时间。
菌落pcr检测有条带,但是测序结果根本没有连上,是什么原因
2楼:匿名用户
菌落baipcr的假阳性很多,也有du很多原因,所以一zhi般都是需要测序结果佐证的。
dao1,引物设计不合适专:选择的扩增属序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行 pcr 扩增时,扩增出的 pcr 产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性。
需重新设计引物。
2,靶序列或扩增产物的交叉污染:这种污染有两种原因:一是整个基因组或大片段的交叉污染,导致假阳性。
这种假阳性可用以下方法解决:操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。除酶及不能耐高温的物质外,所有试剂或器材均应高压消毒。
所用离心管及样进枪头等均应一次性使用。必要时,在加标本前,反应管和试剂用紫外线照射,以破坏存在的核酸。二是空气中的小片段核酸污染,这些小片段比靶序列短,但有一定的同源性。
可互相拼接,与引物互补后,可扩增出 pcr 产物,而导致假阳性的产生,可用巢式 pcr 方法来减轻或消除。
农杆菌转化后菌落pcr就是不出目的条带,求助
3楼:匿名用户
没有转化成功;
调整pcr条件;
提取质粒后再pcr。