1楼:阿鲁巴星人
因为蔗糖溶液在离心时,离心管内形成一连续或不连续的密度梯度,可以通过重力或离心力的作用使不同分子量的物质分离。
同样可以用于密度梯度离心的还要氯化铯、氯化铷、多聚蔗糖等。
为什么要用蔗糖作密度梯度离心?不同浓度的蔗糖不会因为扩散而聚到一起吗
2楼:你真好菜
使用蔗糖密度梯度离心时,不同浓度的蔗糖为什么会分层
纯化病毒常用的方法是蔗糖密度梯度离心法,能得到比较纯的病毒。其过程如下:
1、将收集的组织或脏器或其他,用玻璃匀浆器充分研磨后制成悬液,经反复冻融3 次后,置- 20 ℃冰箱中,备用。
2、先以5000g离心15分钟后,获取上清夜,然后再20000g高速离心30分钟后取上清夜。
3、接着10万g超速离心2h,将沉淀用少量ste溶解。
4、先在超速离心管中加入5-8ml的第3步所获取的含病毒样品的溶解液,然后在离心管中依次加入30 % , 45 % , 60 %的蔗糖,加的时候是用长针头从底部往上加的。11万g离心2.5h,发现在30 %与45 % 以及45 % 与60 %之间都有一条明亮的带,用长针头将两条不同部位的带都吸取出来,分别收集到不同的瓶内。
5、去蔗糖;用ste缓冲液适量稀释纯化的病毒,然后11万g离心3h,用少量ste(根据沉淀的量决定加入多少)缓冲液把沉淀悬起,即最后获得了纯化的病毒。-20度冻纯备用,用时可用分光光度计测定其病毒含量
使用蔗糖密度梯度离心时,不同浓度的蔗糖为什么会分层? 30
3楼:匿名用户
当含有细小颗复粒的悬浮液静置不动制时,由于重力场的bai作用使得悬du浮的颗粒逐渐下zhi
沉。粒子越重,下dao沉越快,反之密度比液体小的粒子就会上浮。微粒在重力场下移动的速度与微粒的大小、形态和密度有关,并且又与重力场的强度及液体的粘度有关。
象红血球大小的颗粒,直径为数微米,就可以在通常重力作用下观察到它们的沉降过程。
此外,物质在介质中沉降时还伴随有扩散现象。扩散是无条件的绝对的。扩散与物质的质量成反比,颗粒越小扩散越严重。
而沉降是相对的,有条件的,要受到外力才能运动。沉降与物体重量成正比,颗粒越大沉降越快。对小于几微米的微粒如病毒或蛋白质等,它们在溶液中成胶体或半胶体状态,仅仅利用重力是不可能观察到沉降过程的。
因为颗粒越小沉降越慢,而扩散现象则越严重。所以需要利用离心机产生强大的离心力,才能迫使这些微粒克服扩散产生沉降运动。
离心就是利用离心机转子高速旋转产生的强大的离心力,加快液体中颗粒的沉降速度,把样品中不同沉降系数和浮力密度的物质分离开
4楼:
因为蔗糖分子和水分子的质量不同…所以在离心时获得的速度也就不同…所以会产生分层…
用蔗糖密度梯度和氯化铯密度梯度离心法分离生物大分子,在原理上有什么不同
5楼:匿名用户
大量提取的质粒dna一般需进一步纯化,常用柱层析法和氯化铯梯度离心法。常使用的所有纯化方法都利用了质粒dna 相对较小及共价闭合环状这样两个性质。
蔗糖密度梯度离心法提出的蛋白含糖跑western时会不会有影响
6楼:阳光文学城
密度梯复度区带
离心法(制简称区带离心法),是bai将样品加在惰du性梯度介质中进zhi行离心沉降或沉降dao平衡,在一定的离心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同区带的分离方法。此法的优点是:①分离效果好,可一次获得较纯颗粒;②适应范围广,能象差速离心法一样分离具有沉降系数差的颗粒,又能分离有一定浮力密度差的颗粒;③颗粒不会挤压变形,能保持颗粒活性,并防止已形成的区带由于对流而引起混合。
此法的缺点是:①离心时间较长;②需要制备惰性梯度介质溶液;③操作严格,不易掌握。
7楼:鄢雁桃不陶
因为蔗糖溶液在离心时,离心管内形成一连续或不连续的密度梯度,可以通过重力或离心力的作用使不同分子量的物质分离。
同样可以用于密度梯度离心的还要氯化铯、氯化铷、多聚蔗糖等。
密度梯度离心法 应该怎么操作?
8楼:匿名用户
密度梯度离心法是将样品加在惰性梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡,在一定的离心力下把颗粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同区带的分离方法。此法的优点是:①分离效果好,可一次获得较纯颗粒;②适应范围广,能象差速离心法一样分离具有沉降系数差的颗粒,又能分离有一定浮力密度差的颗粒;③颗粒不会挤压变形,能保持颗粒活性,并防止已形成的区带由于对流而引起混合。
此法的缺点是:①离心时间较长;②需要制备惰性梯度介质溶液;③操作严格,不易掌握。
密度梯度离心法又可分为速度沉降和等密度沉降平衡两种:
(1)差速区带离心法:当不同的颗粒间存在沉降速度差时(不需要像差速沉降离心法所要求的那样大的沉降系数差)。在一定的离心力作用下,颗粒各自以一定的速度沉降,在密度梯度介质的不同区域上形成区带的方法称为差速区带离心法。
此法仅用于分离有一定沉降系数差的颗粒(20% 的沉降系数差或更少)或分子量相差3倍的蛋白质,与颗粒的密度无关,大小相同,密度不同的颗粒(如线粒体,溶酶体等)不能用此法分离。
离心管先装好密度梯度介质溶液,样品液加在梯度介质的液面上,离心时,由于离心力的作用,颗粒离开原样品层,按不同沉降速度向管底沉降,离心一定时间后,沉降的颗粒逐渐分开,最后形成一系列界面清楚的不连续区带,沉降系数越大,往下沉降越快,所呈现的区带也越低,离心必须在沉降最快的大颗粒到达管底前结束,样品颗粒的密度要大于梯度介质的密度。梯度介质通常用蔗糖溶液,其最大密度和浓度可达1.28 g/cm3和60%。
此离心法的关键是选择合适的离心转速和时间
(2)等密度区带离心法:离心管中预先放置好梯度介质,样品加在梯度液面上,或样品预先与梯度介质溶液混合后装入离心管,通过离心形成梯度,这就是预形成梯度和离心形成梯度的等密度区带离心产生梯度的二种方式。
离心时,样品的不同颗粒向上浮起,一直移动到与它们的密度相等的等密度点的特定梯度位置上,形成几条不同的区带,这就是等密度离心法。体系到达平衡状态后,再延长离心时间和提高转速已无意义,处于等密度点上的样品颗粒的区带形状和位置均不再受离心时间所影响,提高转速可以缩短达到平衡的时间,离心所需时间以最小颗粒到达等密度点(即平衡点)的时间为基准,有时长达数日。
等密度离心法的分离效率取决于样品颗粒的浮力密度差,密度差越大,分离效果越好,与颗粒大小和形状无关,但大小和形状决定着达到平衡的速度、时间和区带宽度。
等密度区带离心法所用的梯度介质通常为氯化绝cscl,其密度可达1.7 g/cm3。此法可分离核酸、亚细胞器等,也可以分离复合蛋白质,但简单蛋白质不适用。
纯化病毒常用的方法是蔗糖密度梯度离心法,能得到比较纯的病毒。其操作过程如下:
1、将收集的组织或脏器或其他,用玻璃匀浆器充分研磨后制成悬液,经反复冻融3 次后,置- 20 ℃冰箱中,备用。
2、先以5000g离心15分钟后,获取上清夜,然后再20000g高速离心30分钟后取上清夜。
3、接着10万g超速离心2h,将沉淀用少量ste溶解。
4、先在超速离心管中加入5-8ml的第3步所获取的含病毒样品的溶解液,然后在离心管中依次加入30 % , 45 % , 60 %的蔗糖,加的时候是用长针头从底部往上加的。11万g离心2.5h,发现在30 %与45 % 以及45 % 与60 %之间都有一条明亮的带,用长针头将两条不同部位的带都吸取出来,分别收集到不同的瓶内。
5、去蔗糖;用ste缓冲液适量稀释纯化的病毒,然后11万g离心3h,用少量ste(根据沉淀的量决定加入多少)缓冲液把沉淀悬起,即最后获得了纯化的病毒。-20度冻纯备用,用时可用分光光度计测定其病毒含量。
9楼:匿名用户
http://baike.baidu.***/view/930763.htm
http://hi.baidu.***/xiangyu_16888/blog/item/89c5deb1a29b5f57092302c2.html
去看看吧。
您好,请问蔗糖密度梯度离心中,45%的蔗糖浓度溶液怎么配制?
10楼:天马行空设计
在溶剂体积相同的前提下,根据不同浓度称取不同质量的蔗糖,溶解后,由高浓度到低浓度缓慢加到容器,如试管,应该就可以了吧,还是很容易分层的