1楼:字符与标点
限制性内切酶只能识别并切割特异的双链dna序列,这种能被特异性识别的切割部位都具有回文序列,也就是在切割部位,一条链正向读的碱基顺序与另一条链反向读的顺序完全一致。我们在说一个限制性内切酶例如ecorⅰ的酶切位点时,只是为了方便只提gaattc,但此处的gaattc是包含双链信息的(另一条链5'到3'的序列也是gaattc)。两边加接头碱基并不影响酶的识别特异性。
总之,一般来说,限制性内切酶不能切割dna单链,除非单链内部形成了局部的回文结构(可以认做某种意义上的双链)恰好是限制性内切酶的切点。
2楼:匿名用户
1. 有少数限制性内切酶能切割dna单链,效率满低的。
2. 在末端加一些ggcc的和单双链没有关系,个人觉得和酶与dna识别binding的结构有关。
常用dna限制性内切酶有哪些?
3楼:hi漫海
内切酶主要分成三大类。
第一类内切酶能识别专一的核苷酸顺序,并在识别点附近的一些核苷酸上切割dna分子中的双链,但是切割的核苷酸顺序没有专一性,是随机的。这类限制性内切酶在dna重组技术或基因工程中没有多大用处,无法用于分析dna结构或克隆基因。这类酶如ecob、ecok等。
第二类内切酶能识别专一的核苷酸顺序,并在该顺序内的固定位置上切割双链。由于这类限制性内切酶的识别和切割的核苷酸都是专一的。所以总能得到同样核苷酸顺序的dn**段,并能构建来自不同基因组的dn**段,形成杂合dna分子。
因此,这种限制性内切酶是dna重组技术中最常用的工具酶之一。这种酶识别的专一核苷酸顺序最常见的是4个或6个核苷酸,少数也有识别5个核苷酸以及7个、9个、10个和11个核苷酸的。如果识别位置在dna分子中分布是随机的,则识别4个核苷酸的限制性内切酶每隔46(4096)个核苷酸就有一个切点。
人的单倍体基因组据估计为3×199核苷酸,识别4个核苷酸的限制性内切酶的切点将有(3×109/2.5×102)约107个切点,也就是可被这种酶切成107片段,识别6个核苷酸的限制性内切酶也将有(3×109/4×103)约106个切点。
第二类内切酶的识别顺序是一个回文对称顺序,即有一个中心对称轴,从这个轴朝二个方向“读”都完全相同。这种酶的切割可以有两种方式。一是交错切割,结果形成两条单链末端,这种末端的核苷酸顺序是互补的,可形成氢键,所以称为粘性末端。
如ecori的识别顺序为:
↓ |5’……gaa | ttc……3’
3’……ctt | aag……5’
| ↑垂直虚线表示中心对称轴,从两侧“读”核苷酸顺序都是gaattc或cttaag,这就是回文顺序(palindrome)。实线剪头表示在双链上交错切割的位置,切割后生成5’……g和aattc……3’、3’……cttaa和g……5’二个dn**段,各有一个单链末端,二条单链是互补的,可通过形成氢键而“粘合”。另一种是在同一位置上切割双链,产生平头末端。
例如haeⅲ的识别位置是:
↓5’……gg↓cc……3’
3’……cc↓gg……’
↑在箭头所指处切割,产生的两个dn**段是:
5’……gg cc……3’
和3’……cc gg……5’
有时候两种限制性内切酶的识别核苷酸顺序和切割位置都相同,差别只在于当识别顺序中有甲基化的核苷酸时,一种限制性内切酶可以切割,另一种则不能。例如hpaⅱ和mspⅰ的识别顺序都是5’……ccgg……3’,如果其中有5’-甲基胞嘧啶,则只有hpaⅱ能够切割。这些有相同切点的酶称为同切酶或异源同工酶(isoschizomer)。
第三类内切酶也有专一的识别顺序,但不是对称的回文顺序。它在识别顺序旁边几个核苷酸对的固定位置上切割双链。但这几个核苷酸对则是任意的。
因此,这种限制性内切酶切割后产生的一定长度dn**段,具有各种单链末端。这对于克隆基因或克隆dn**段没有多大用处。
4楼:匿名用户
sfii,noti,sali,ecori,ecorv,psti 我在的实验室经常用的
比较核酶核酸酶限制性内切酶有何不同
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